葡萄组织培养技术-组培繁育流程

葡萄组织培养与快繁技术

主讲人：姜放军湖南生物机电职业技术学院植物组织培养技术1.选取优良葡萄品种植株的顶梢为外植体材料。2.表面消毒后，在超净工作台上剥离茎尖进行微茎尖培养。3.成苗后进行病毒检测，无病毒的植株即为葡萄脱毒试管苗。4.将脱毒试管苗繁殖成种苗5.取脱毒试管苗或脱毒种苗的器官进行芽诱导培养。6.形成的小苗进行壮苗、生根培养后，进行驯化移栽。工作任务苗圃育苗微茎尖培养脱毒病毒检测葡萄脱毒苗芽诱导壮苗、生根炼苗、移栽品种种苗优良品种获得葡萄脱毒苗的流程图一、葡萄组培快繁技术

（一）外植体的选择茎尖、茎段、腋芽、叶片、叶柄、根尖、花粉、花药、胚、胚珠、胚乳、子房等，整个器官、部分组织；单个细胞、原生质体。外植体必须使用无菌材料。实践知识以茎段、茎尖为外植体时应选择品种特性优良、生长健壮、无病虫害的休眠枝条，用0.01％的6-BA溶液浸泡24h，打破休眠，然后扦插到盛有无菌基质的苗床上，置于洁净的室内或培养箱中促使其萌发，温度控制在25～28℃。若生长季节于田间取材，则要在晴天、无露珠时进行，然后将材料插入培养液或自来水中，置于室内或培养箱中进行预培养。（二）芽的培养与诱导再生1.取材与消毒当催芽处理的材料长出新梢10～15cm时，取4～5cm的嫩梢，自来水冲洗15～30min，然后剪取1cm的茎尖。除去幼叶后置于无菌条件下消毒；先用2％次氯酸钠溶液浸泡消毒3～5min，用无菌水冲洗3～5次，再用0.1％升汞溶液浸泡5～10min，用无菌水冲洗3～5次，无菌滤纸吸净材料上的水分，备用。2.接种和培养无菌条件下，将芽放在解剖镜下用锋利的解剖刀切取0.5～1cm的茎尖，接种于事先准备好的诱导培养基上进行培养。培养温度为25±2℃。接种1～2周暗培养，2周后光照（12～16h/d，1000～3000Lx）培养，15d后可见到不定芽长出。（三）壮苗、生根与移栽1.壮苗与生根培养当不定芽长至2～3cm以上时，为了获得大量健壮的试管苗，就要从生长缓慢的诱导分化培养基中，将不定芽转接到生长快的壮苗生根培养基中培养。

方法是无菌条件下将试管苗剪成带叶单芽段接入壮苗生根培养基中培养。

表5-1葡萄组织培养培养基

培养基成份基本培养基激素浓度（mg/L）诱导培养基1/2MS6BA0.01+IAA0.2+KT1.0壮苗生根培养基1/2MSIBA0.1～1.0培养条件为温度（23±2）℃，光照16h/d，光强2000～3000Lx。2.炼苗与移栽

葡萄组培苗的驯化移栽多在春季或冬季的温室大棚中进行。（1）光培炼苗（2）沙培炼苗（3）温室营养钵炼苗及大棚移栽（1）光培炼苗

当组培苗根长2～3cm、具有3～4片正常叶片时，转入温室或大棚内，开瓶在20000～40000Lx的自然光下炼苗3～7d，待叶片油亮、幼茎呈淡红色时，即可将生长势强、根系粗壮的试管苗从培养瓶中取出。（2）沙培炼苗

清晨或傍晚，组培苗出瓶，栽入沙床，株距3～4cm，行距8～10cm。栽后沙床加盖小拱棚。最初3d的棚内温度保持在（25±2）℃，最高不超过30℃，最低不低于20℃，相对湿度保持在80％～95％，光强逐渐增强到40000Lx。6～7d拆除拱棚。（3）温室营养钵炼苗及大棚移栽

经沙培后的合格苗，在空气湿度不低于70％、温度20～25℃、散射光