常用病毒性疫苗的制备

常用病毒性疫苗的制备

-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例

一、实验目的掌握鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制备程序。二、实验器材鸡新城疫Ⅰ系苗毒种、受精蛋、孵化箱、无菌生理盐水、5%碘酊、75%酒精、灭菌镊子、无菌吸管、灭菌瓶、青霉素、链霉素、无菌注射器、酒精灯、超净工作台等。常用病毒性疫苗的制备

-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例

三、实验方法1.毒种由中国兽药监察所负责鉴定、保管和供给。对鸡胚的最小致死量不低于10-6、0.1毫升。鸡胚于接种后24～72h内死亡，胚体病变明显。对红细胞凝集价在1:80以上。毒种对鸡的最小免疫量不低于10-6、0.1毫升。安全无菌。常用病毒性疫苗的制备

-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例

2.Ⅰ系苗湿苗的制造（1）鸡胚选择与孵化健康种鸡所产的新鲜卵。38.5～39℃、相对湿度60%～70%、孵化9～11日龄。鸡胚接种前，应照蛋挑选活力强的发育胚，并划好气室部位和接种部位。常用病毒性疫苗的制备

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（2）病毒的鸡胚培养无菌生理盐水将毒种作1:100倍稀释，接种9～11日龄鸡胚的尿囊腔内，每胚0.1ml，接种后继续置孵化箱内孵化。以后每日上下午各照蛋1用石蜡将接种孔封闭，次。胚胎应于接种后24～48h内死亡（一般多在36h前后死亡）。将死胚立即取出，气室向上，置0～10℃冷却4～24h，凡在24h内和48h后死亡的胚均弃去不用。常用病毒性疫苗的制备

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（3）病毒的收获将冷却后的死胚取出，气室部向上并涂擦5%碘酊，用灭菌镊子敲破气室部位的卵壳并剔除之，揭出卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜和羊膜，以无菌吸管吸取尿囊液，装入灭菌瓶内，若干胚的胚液混合为一组。常用病毒性疫苗的制备

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（4）收毒后处理每毫升病毒液加入青霉素和链霉素各500单位，放入冰箱保存，经检验合格后即成疫苗。收获的鸡胚液应逐瓶进行无菌检验，即每瓶抽疫苗0.2ml，分别接种于鲜血琼脂斜面和厌气肉肝汤培养基内，在37℃培养72h，应无细菌生长。然后将无菌生长之疫苗混合后，分别装小瓶或安瓿内，0.5～1ml/瓶。瓶上注明疫苗名称、批号及收获日期。以上各项操作均要在无菌室或无菌罩内无菌操作进行，要严防鸡新城疫强毒污染。常用病毒性疫苗的制备

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3.疫苗检验（1）无菌检验每批疫苗任抽5瓶作为样品，供作无菌检验，方法同上，应无细菌生长。在做细菌培养的同时，亦可注射小鼠若干，每只皮下注射0.2ml，观察10d，应全部健活。若有细菌生长或小鼠死亡者，此苗废弃。常用病毒性疫苗的制备

-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例

（2）安全试验用4～12月龄未经鸡新城疫疫苗免疫的健康鸡3只，每只鸡肌注100倍稀释疫苗1ml，观察10～14d，应无任何反应，或有轻度反应，且在14日内恢复者，认为合格。有严重反应不能康复者，应重复检测一次。常用病毒性疫苗的制备

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（3）效力试验方法一每批疫苗抽样1瓶，用无菌生理盐水将疫苗按其含毒量稀释成10-5，接种10日龄的鸡胚5个，每胚尿囊内接种0.1毫升。鸡胚应在24-72h全部死亡。胎儿有明显的病变。混合鸡胚液对1%鸡红细胞的凝集价在1:80以上者为合格。常用病毒性疫苗的制备

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方法二选4～12月龄的健康鸡若干只，分为试验组和对照组。试验组每只鸡以105倍稀释疫苗肌肉注射1毫升，或用钢笔尖蘸取1000倍稀释的疫苗于翅膀内侧无血管处皮下刺种2次。观察14天，与对照组一起以鸡新城疫强毒攻击。剂量为每只鸡肌注1000倍稀释的新鲜鸡胚强毒液1毫升，观察10～14天，试验组