肿瘤浸润淋巴细胞的表征和功能

1/1肿瘤浸润淋巴细胞的表征和功能第一部分TIL表征方法的比较 2第二部分TIL表征的细胞标记物 4第三部分TIL表征的空间定位 7第四部分TIL的免疫调节功能 8第五部分TIL与肿瘤进展的关系 11第六部分TIL表征的预后价值 14第七部分TIL表征在免疫治疗中的意义 16第八部分TIL表征的标准化策略 18

第一部分TIL表征方法的比较关键词关键要点【基于分选的TIL表征方法比较】

1.流式细胞术分选：通过标记特异性表面抗原，可以对细胞群体进行高度特异性分离。此方法可用于分选各种类型的TIL，包括CD8+T细胞、Treg细胞和自然杀伤细胞。

2.免疫磁珠分选：利用磁珠标记靶细胞表面抗原，通过磁场分离出目标细胞。该方法操作简单，可实现大规模细胞分选，适合高通量研究。

【基于组织学方法的TIL表征比较】

TIL表征方法的比较

免疫组织化学染色（IHC）

*最常见的TIL表征方法，使用抗体检测肿瘤组织中的特定免疫细胞标志物，如CD3、CD4、CD8、FoxP3等。

*优点：简便快捷、成本低、可获取性高。

*缺点：定量精度较低、不能区分不同亚群的细胞、可能存在交叉反应和背景染色。

流式细胞术（FCM）

*利用荧光标记的抗体检测单细胞悬液中的特定免疫细胞或分子标志物。

*优点：定量精度高、细胞表型分析能力强、可同时检测多个标志物、能对TIL亚群进行排序和分离。

*缺点：样本制备复杂、可能受细胞活性和自发荧光的干扰。

多重免疫荧光染色（MIF）

*使用多种抗体同时染色组织切片，可对不同免疫细胞群体进行共定位和空间分布分析。

*优点：可视化TIL的细胞分布和相互作用、分辨率高、可识别罕见细胞群体。

*缺点：样本制备复杂、多重荧光可能导致交叉反应和背景染色、数据分析耗时。

质谱成像（MSI）

*利用质谱仪分析组织切片中的肽和蛋白质谱图，生成免疫相关分子的空间分布图。

*优点：可检测组织中广泛的蛋白质表达、灵敏度高、可分析未知分子。

*缺点：样本制备复杂、数据分析耗时、对组织结构的破坏可能影响准确性。

单细胞RNA测序（scRNA-seq）

*对单个细胞进行RNA测序，可全面分析TIL的转录组特征和细胞异质性。

*优点：分辨率最高、可识别罕见细胞群体、能同时检测多种免疫相关基因表达。

*缺点：成本高、样本制备复杂、数据分析具有挑战性。

表1：TIL表征方法的比较

|方法|优势|缺点|

||||

|IHC|简便快捷、成本低|定量精度低、不能区分细胞亚群|

|FCM|定量精度高、细胞表型分析能力强|样本制备复杂、受干扰因素影响|

|MIF|可视化细胞分布和相互作用、分辨率高|样本制备复杂、多重荧光交叉反应|

|MSI|蛋白表达谱图广泛、灵敏度高|样本制备复杂、数据分析耗时|

|scRNA-seq|分辨率最高、基因表达检测全面|成本高、样本制备复杂、数据分析挑战|

结论

不同的TIL表征方法各有优缺点，适用于不同的研究目的。IHC和FCM是常用的方法，而MIF、MSI和scRNA-seq则提供更深入的分析。研究人员应根据具体需求选择最合适的表征方法，以全面了解TIL的特征和功能。第二部分TIL表征的细胞标记物关键词关键要点肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的表面标记物

1.CD3：T细胞表面泛表达的共受体，与TCR复合物结合以识别抗原递呈细胞，TIL中CD3阳性细胞的丰度与患者预后相关。

2.CD4和CD8：分别标记辅助性T细胞和细胞毒性T细胞，TIL中的CD4/CD8比率可以指示免疫反应的类型和患者预后。

3.HLA-DR：II类主要组织相容性复合物（MHC），在抗原呈递细胞和活化的T细胞上表达，TIL中HLA-DR阳性细胞的含量反映了抗原呈递和T细胞激活的状态。

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的功能标记物

1.穿孔素和颗粒酶：细胞毒性T细胞释放的裂解酶，通过诱导凋亡杀死肿瘤细胞，TIL中穿孔素和颗粒酶表达的增加与更好的患者预后相关。

2.激活受体：如CD27、CD28和4-1BB，表达在活化的T细胞上，这些受体参与T细胞增殖、分化和细胞因子释放的调节，TIL中激活受体表达的增加与抗肿瘤免疫反应增强相关。

3.抑制受体：如PD-1和CTLA-4，表达在调节性T细胞和被抑制的T细胞上，这些受体抑制T细胞反应并促进肿瘤免疫逃避，TIL中抑制受体表达的增加与较差的患者预后相关。肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）表征的细胞标记物

TILs是一个异质性细胞群，包含各种免疫细胞亚群，其表征需要利用多种细胞标记物。常用的标记物包括：

淋巴细胞谱系和激活标记物：

*CD3：泛T细胞标记物，识别所有T细胞亚群。

*CD4：辅助T细胞标记物。

*CD8：细胞毒性T细胞标记物。

*CD20：B细胞标记物。

*CD56：自然杀伤（NK）细胞标记物。

*HLA-DR：主要组织相容性复合物II类（MHC-II）分子，表示抗原呈递能力。

活化和功能状态标记物：

*CD25：白细胞介素-2（IL-2）受体，表示T细胞活化。

*CD69：早期激活标志物。

*CD103：调节性T细胞（Treg）标记物。

*狐尾蛋白P3（FoxP3）：Treg主转录因子。

*GranzymeB：细胞毒性T细胞和NK细胞释放的细胞毒性蛋白。

*穿孔素：细胞毒性T细胞和NK细胞释放的细胞毒性蛋白。

*干扰素-γ（IFN-γ）：Th1细胞释放的促炎细胞因子。

*白细胞介素-17（IL-17）：Th17细胞释放的促炎细胞因子。

*白细胞介素-10（IL-10）：抗炎细胞因子。

其他表征标记物：

*Ki-67：增殖细胞标记物。

*PD-1：免疫检查点分子，表示T细胞衰竭。

*CTLA-4：免疫检查点分子，抑制T细胞激活。

*TIM-3：免疫检查点分子，抑制T细胞功能。

*LAG-3：免疫检查点分子，抑制T细胞活化。

表征策略：

TILs的表征通常使用多色流式细胞术，同时检测多种标记物。通过结合不同的标记物组合，可以识别和量化TILs的不同亚群及其功能状态。免疫组织化学和免疫荧光染色等技术也可用于评估TILs的空间分布和与肿瘤微环境的相互作用。

选择正确的标记物组合对于准确表征TILs至关重要。表征策略应根据研究的目的和具体研究的肿瘤类型进行定制。综合使用多种标记物可以提供全面的TILs表征，有助于阐明TILs在肿瘤发生和进展中的作用。第三部分TIL表征的空间定位肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的空间定位

概述

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是一类存在于肿瘤微环境中的免疫细胞，其在抗肿瘤免疫反应中发挥着重要作用。TIL的空间定位对于理解其功能和介导免疫响应的能力至关重要。

TIL的亚群和定位

TIL包含异质性的淋巴细胞亚群，每种亚群具有独特的定位模式：

*CD8+细胞毒性T细胞(Tc)：主要位于肿瘤细胞的肿瘤浸润前缘(ITE)，与肿瘤细胞呈密切接触。

*CD4+辅助性T细胞(Th)：分布在ITE内外，调节免疫反应。

*γδT细胞：主要位于肿瘤基质中，具有免疫监视和肿瘤细胞杀伤功能。

*自然杀伤(NK)细胞：分布广泛，在肿瘤细胞表面表达杀伤配体时对其进行杀伤。

空间定位与TIL功能的关系

TIL的空间定位影响其功能：

*ITE中的Tc：与肿瘤细胞的直接接触增强了其杀伤能力。

*ITE外的Th：通过释放细胞因子调节免疫反应，招募并激活其他免疫细胞。

*基质中的γδT细胞：通过产生细胞因子和直接杀伤肿瘤细胞参与免疫监视。

*全肿瘤分布的NK细胞：通过释放细胞毒性物质杀伤肿瘤细胞。

TIL定位的影响因素

TIL的空间定位受多种因素影响，包括：

*趋化因子梯度：细胞因子和趋化因子引导TIL向肿瘤组织迁移。

*细胞粘附分子：介导TIL与肿瘤细胞和基质成分的相互作用。

*免疫抑制因素：如PD-1和CTLA-4等抑制性受体抑制TIL的功能和空间定位。

空间定位的临床意义

TIL的空间定位是评估肿瘤免疫微环境和预测患者预后的重要指标：

*高浸润性的TIL(尤其是CD8+Tc)：与更好的生存率相关。

*聚集在ITE中的TIL：与更有效的抗肿瘤免疫反应相关。

*定位异常的TIL(如基质中的Tc)：可指示免疫抑制或肿瘤逃避。

结论

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的空间定位是理解其功能和免疫反应的关键。不同的TIL亚群具有独特的定位模式，影响其与肿瘤细胞和免疫微环境的相互作用。对TIL定位的影响因素的研究对于开发有效的免疫治疗策略至关重要。第四部分TIL的免疫调节功能关键词关键要点TIL在抑制性免疫细胞中的作用

1.TIL能够抑制调控性T细胞（Treg）的活性，从而增强抗肿瘤免疫反应。

2.TIL与髓样抑制细胞（MDSC）相互作用，导致MDSC功能障碍和抗肿瘤免疫增强。

3.TIL通过细胞毒性机制或分泌细胞因子，直接靶向并清除抑制性免疫细胞，释放抗肿瘤免疫反应。

TIL在抗原提呈中的作用

1.TIL具有抗原提呈功能，能够将肿瘤抗原呈递给淋巴结中的T细胞，引发抗肿瘤免疫应答。

2.TIL可以促进树突状细胞（DC）的成熟和抗原提呈能力，增强免疫系统对肿瘤抗原的识别。

3.TIL通过分泌趋化因子吸引DC到肿瘤微环境，增强抗原提呈和抗肿瘤免疫反应。

TIL在免疫细胞因子网络中的作用

1.TIL能够分泌多种细胞因子，包括IFN-γ、TNF-α和IL-2，这些细胞因子对激活和募集其他免疫细胞至关重要。

2.TIL与天然杀伤（NK）细胞和CD8+T细胞相互作用，促进细胞因子的产生，从而增强抗肿瘤免疫反应。

3.TIL通过调节细胞因子网络，塑造肿瘤微环境，促进抗肿瘤免疫反应。

TIL在免疫检查点中的作用

1.TIL表达多种免疫检查点分子，如PD-1和CTLA-4，这些分子可以抑制T细胞活性。

2.阻断免疫检查点分子可以解除对TIL的抑制作用，增强抗肿瘤免疫应答。

3.TIL与免疫检查点抑制剂联用治疗，已被证明在多种癌症中具有协同抗肿瘤作用。

TIL的异质性

1.TIL在肿瘤微环境中表现出异质性，不同类型的TIL具有不同的表型和功能。

2.TIL异质性的分子基础是复杂的，涉及多种基因表达谱和免疫表型。

3.了解TIL异质性对于制定个性化免疫治疗策略至关重要，以最大限度地提高治疗效果。

TIL的未来研究方向

1.深入研究TIL的分子机制和异质性，以开发更有效的免疫治疗方法。

2.探索TIL与其他免疫细胞和肿瘤微环境成分之间的相互作用，进一步阐明其免疫调节功能。

3.开发基于TIL的新型免疫治疗策略，以克服当前免疫治疗的限制并提高治疗效果。肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的免疫调节功能

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）在肿瘤微环境中发挥着至关重要的免疫调节作用，既可以抑制肿瘤生长，也可以促进肿瘤进展。TILs的免疫调节功能主要体现在以下几个方面：

1.细胞毒性作用

TILs中包含大量具有细胞毒性功能的细胞，包括CD8+T细胞、自然杀伤（NK）细胞和NKT细胞。这些细胞能够识别并杀伤表达肿瘤相关抗原（TAAs）的肿瘤细胞。

2.T细胞介导的免疫应答

CD4+T细胞是TILs中另一个重要的亚群。这些细胞通过识别肿瘤细胞表面表达的MHC-II分子和抗原肽复合物，激活并增强CD8+T细胞的抗肿瘤功能。

3.免疫抑制作用

TILs中也存在一些具有免疫抑制作用的细胞，包括调节性T细胞（Tregs）、髓系抑制细胞（MDSCs）和肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）。这些细胞通过释放细胞因子（如TGF-β、IL-10）或直接细胞间相互作用，抑制抗肿瘤免疫应答。

4.免疫耐受

TILs的免疫调节功能会受到肿瘤微环境中免疫耐受机制的影响。肿瘤细胞可以表达免疫检查点分子（如PD-1、CTLA-4），与TILs表面表达的受体结合，抑制其抗肿瘤活性。

TILs免疫调节功能的临床意义

TILs的免疫调节功能在肿瘤的发生、发展和治疗反应中起着重要作用。TILs数量和活性增加与更好的预后相关，而TILs数量减少或功能受损则与更差的预后相关。因此，靶向TILs的免疫调节功能是癌症免疫治疗的一个重要策略。

免疫治疗靶向TILs

目前有各种免疫治疗方法正在开发，以靶向TILs的免疫调节功能，包括：

*免疫检查点抑制剂：这些药物阻断免疫检查点通路，释放TILs的抗肿瘤活性。

*细胞因子：IL-2、IL-12和IL-15等细胞因子可以刺激TILs的增殖和活性。

*过继性细胞治疗：从患者身上分离出TILs，然后在体外扩增并活化，再回输到患者体内以增强抗肿瘤免疫应答。

结论

TILs在肿瘤微环境中发挥着复杂的免疫调节作用，既可以抑制肿瘤生长，也可以促进肿瘤进展。靶向TILs的免疫调节功能是癌症免疫治疗的一个重要策略，有望改善患者的预后。第五部分TIL与肿瘤进展的关系关键词关键要点【TIL与肿瘤进展的关系】

1.TIL数量与肿瘤恶性程度呈正相关，提示其可能参与肿瘤进展。

2.TIL亚群组成与肿瘤预后相关，某些亚群与更好的预后有关，而另一些亚群则与更差的预后有关。

3.TIL的功能状态影响肿瘤进展，激活的TIL具有抗肿瘤活性，而抑制的TIL则促进肿瘤生长。

【TIL调节肿瘤微环境】

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）与肿瘤进展的关系

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）是存在于肿瘤微环境中的异质性免疫细胞群，其数量和组成与肿瘤进展和治疗反应密切相关。大量研究表明，TIL在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着复杂而多面的作用。

TIL丰度与肿瘤预后

TIL丰度与多种肿瘤患者的预后相关。高水平的TIL通常与更好的预后有关，这表明免疫应答在抑制肿瘤生长和进展中起着保护作用。例如，在乳腺癌、肺癌和结直肠癌中，TIL高丰度与更高的生存率和更低的复发率相关。

TIL表型与肿瘤侵袭性

TIL的表型差异很大，从活化的效应细胞到抑制性细胞不等。效应TIL，例如CD8+细胞毒性T细胞，可以通过直接杀死肿瘤细胞来抑制肿瘤生长。然而，抑制性TIL，例如调节性T细胞（Treg），可以通过抑制效应TIL的活性来促进肿瘤逃避。

研究表明，效应TIL的高丰度与较低的肿瘤侵袭性相关。例如，在膀胱癌中，CD8+TIL的低丰度与更高的肿瘤分级和转移风险有关。相反，抑制性TIL的高丰度与肿瘤的侵袭性和转移能力增加有关。

TIL与血管生成

TIL参与肿瘤血管生成，这是肿瘤生长和转移的关键过程。效应TIL，特别是CD8+细胞毒性T细胞，可释放抗血管生成因子，如干扰素-γ（IFN-γ），以抑制肿瘤血管的形成。相反，抑制性TIL，如调节性T细胞（Treg），可以释放促血管生成因子，如转化生长因子-β（TGF-β），以促进血管生成。

在多种肿瘤中，TIL丰度与肿瘤血管密度密切相关。高丰度的效应TIL与较低的血管密度和较小的肿瘤大小相关。相反，高丰度的抑制性TIL与较高的血管密度和更大的肿瘤大小相关。

TIL与免疫检查点调控

免疫检查点是免疫系统中的调控分子，负责维持自身耐受性和防止过度免疫反应。然而，肿瘤细胞可以利用免疫检查点来逃避免疫监视和破坏。

某些TIL，特别是调节性T细胞（Treg），表达高水平的免疫检查点分子，如PD-1和CTLA-4。这些免疫检查点分子可以抑制效应TIL的活性，从而促进肿瘤免疫逃避。

阻断免疫检查点的抗体疗法，例如抗PD-1和抗CTLA-4抗体，已在多种肿瘤中显示出疗效。这些疗法通过解除TIL对免疫检查点的抑制，恢复效应TIL的抗肿瘤活性。

TIL与肿瘤微环境

TIL与肿瘤微环境中的其他细胞和成分相互作用，包括肿瘤细胞、基质细胞和细胞因子。这些相互作用塑造了肿瘤微环境，影响肿瘤的进展和治疗反应。

例如，TIL可以释放细胞因子，如干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α），以激活肿瘤细胞凋亡和细胞毒性。此外，TIL可以与基质细胞相互作用，释放促炎性或抗炎性细胞因子，从而调节肿瘤微环境。

TIL与治疗反应

TIL丰度和表型与多种癌症治疗反应密切相关。免疫治疗，如免疫检查点阻断和CART细胞疗法，依赖于功能性TIL的存在。高丰度的效应TIL和低丰度的抑制性TIL与更好的治疗反应相关。

此外，TIL可以被传统治疗方式，如化疗和放疗，调控。这些治疗方式可以诱导免疫原性细胞死亡，释放肿瘤抗原并激活TIL。通过与TIL协同作用，这些治疗方式可以增强抗肿瘤免疫应答和改善患者预后。

结论

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着至关重要的作用。TIL丰度、表型和与肿瘤微环境的相互作用与肿瘤进展、预后和治疗反应密切相关。了解TIL的复杂生物学特性对于开发有效的免疫治疗策略和改善患者预后至关重要。第六部分TIL表征的预后价值关键词关键要点TIL表征的预后价值

主题名称：TIL数量与预后

1.TIL数量与多种癌症的预后呈正相关，提示TIL具有抗肿瘤活性。

2.高TIL浸润与更长的无复发生存期、总生存期和更好的疾病特异性生存率相关。

3.TIL数量的增加与肿瘤浸润性、转移潜力降低和对治疗的反应性增强相关。

主题名称：TIL亚群与预后

TIL表征的预后价值

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的表征在预测癌症患者预后中具有重要意义。研究表明，TIL的数量、类型和功能性均与患者的生存率和治疗反应相关。

TIL数量

总体TIL数量的增加通常与预后较好相关。在多种癌症中，高TIL密度与肿瘤进展迟缓、复发率降低和总体生存率提高相关。例如，在乳腺癌中，高TIL密度与疾病特异性生存率提高和更低的转移风险有关。在结直肠癌中，高TIL数量预示着术后生存率更高。

TIL类型

TIL的亚组成分也具有预后意义。CD8+细胞毒性T细胞的浸润与较好的预后相关，而调节性T细胞（Treg）则与预后较差相关。CD8+/Treg比率的增加表明抗肿瘤免疫反应强，预示着更好的预后。在黑色素瘤中，CD8+TIL的浸润与患者生存率提高和对免疫治疗的反应性增强相关。相反，Treg的增加与预后较差和免疫治疗反应较弱有关。

TIL功能性

TIL的功能活性也是预后的重要决定因素。产生促炎细胞因子（例如IFN-γ和TNF-α）的TIL与较好的预后相关。高TIL功能性预示着肿瘤细胞杀伤增强、抗肿瘤免疫反应增强。在肝细胞癌中，高IFN-γ产生TIL与总体生存率提高和术后复发风险降低相关。在肺癌中，TNF-α产生TIL与肿瘤进展缓慢和更长的无病生存期相关。

TIL表征的治疗反应预测

TIL表征还可用于预测患者对治疗的反应性。例如，在黑色素瘤中，高TIL密度与对免疫检查点阻断治疗的反应率更高相关。在乳腺癌中，高CD8+TIL浸润的患者对化疗和靶向治疗的反应性更好。在肺癌中，高TIL功能性预示着放疗和免疫治疗的疗效增强。

此外，TIL表征可用于识别可能从免疫治疗中获益的患者亚群。通过评估TIL的数量、类型和功能性，可以优化患者的分层治疗，选择最合适的治疗方案。

总之，TIL表征在预测癌症患者预后和治疗反应中具有重要意义。总体TIL数量、TIL亚组成分和TIL功能性均与患者的生存率和治疗反应相关。对TIL进行表征有助于识别预后较好和对治疗反应较好的患者，并指导个性化治疗策略。第七部分TIL表征在免疫治疗中的意义TIL表征在免疫治疗中的意义

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）表征在免疫治疗中具有重大意义，因为它提供了对患者免疫应答状况和治疗反应的见解。

免疫治疗疗效预测

TIL丰度和表型与免疫治疗的疗效密切相关。高密度的CD8+细胞毒性T细胞TIL与更好的预后和对免疫检查点抑制剂的反应增加相关。相反，调节性T细胞（Treg）的增加会抑制免疫应答，降低免疫治疗的疗效。

免疫应答监测

TIL表征可用于监测免疫治疗期间的免疫应答。治疗后的TIL丰度和活化状态的变化可以反映免疫系统对治疗的反应。例如，CD8+T细胞TIL的增加和Treg的减少表明免疫应答的增强。

治疗靶点鉴定

TIL表征有助于识别免疫治疗的潜在靶点。通过分析TIL的特异性T细胞受体，我们可以确定肿瘤特异性抗原。这些抗原可以开发成个性化疫苗或嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法。

耐药机制研究

TIL表征可揭示免疫治疗耐药的机制。通过分析耐药患者的TIL，我们可以识别免疫抑制机制。例如，PD-L1表达的增加或免疫调节细胞的积累可以导致耐药性。了解这些机制有助于开发克服耐药性的治疗策略。

TIL表征方法

TIL表征通常通过免疫组化、流式细胞术或单细胞RNA测序进行。

*免疫组化：用于评估TIL的空间分布和密度。

*流式细胞术：用于表征TIL的免疫表型（如CD8、CD4、Treg）。

*单细胞RNA测序：提供了TIL亚群的高分辨率表征，包括转录谱和功能特征。

结论

TIL表征在免疫治疗中至关重要，因为它提供了对患者免疫应答状况和治疗反应的宝贵见解。通过表征TIL的丰度、表型和特异性，我们可以预测治疗效果、监测免疫应答、识别治疗靶点和研究耐药机制。随着TIL表征技术的不断进步，我们对免疫治疗的理解不断加深，有望开发出更有效和个性化的治疗方案。第八部分TIL表征的标准化策略关键词关键要点TIL表征的标准化策略

免疫组化

1.确定TIL的空间分布和数量，包括间质TIL和浸润TIL。

2.使用建立的免疫组化标志物，如CD3、CD8、FoxP3等，鉴定TIL亚群。

3.定量评估TIL密度，使用各种评分系统，如国际TIL工作组评分或H-score。

流式细胞术

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）表征的标准化策略

TILs表征的标准化至关重要，以确保不同研究之间数据的可比性和可靠性。国际上的共识意见和指南已经制定，旨在促进TILs表征的一致性。

免疫组化（IHC）评分

IHC是TILs表征最常用的方法。以下策略有助于标准化IHC评分：

*抗体选择：使用经过验证的抗体，针对感兴趣的淋巴细胞亚群（例如CD3、CD8、FoxP3）。

*评分系统：使用统一的评分系统（例如，定量H-score或定性IRS），考虑染色强度、阳性细胞百分比和总体分布。

*Cut-off值：确定明确的cut-off值来区分TILs高和低浸润，基于历史数据或多中心研究。

流式细胞术分析

流式细胞术允许对TILs进行更详细的表征：

*细胞表面标记：使用一组抗体来标记淋巴细胞亚群（例如，CD3、CD4、CD8、FoxP3）。

*细胞内标记：加入细胞因子（例如，IFN-γ、IL-17）或其他细胞内标记物，以评估TILs的功能状态。

*数据分析：使用标准化的分析软件，根据前向散射和侧向散射门来鉴定和量化细胞群。

转录组学分析

RNA测序等转录组学技术可提供关于TILs基因表达谱的深入信息：

*基因表达谱：分析TILs中免疫相关基因的表达，以识别激活通路和功能。

*细胞亚群鉴别：利用聚类分析来鉴定TILs中的不同细胞亚群，基于它们的独特转录组特征。

*功能注释：使用功能注释数据库（例如，GeneOntology）将基因表达数据映射到生物学途径和过程。

功能分析

除了表征TILs的组成外，了解其功能也很重要：

*细胞因子释放试验：培养TILs并测量细胞因子释放，以评估其致炎或免疫调节能力。

*细胞毒性测定：评估TI