食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用

第九章體外實驗與新生物技術在毒理學中的應用1食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024重點內容：哺乳動物細胞製備和培養以及細胞培養在食品毒理學中應用。難點內容：哺乳動物細胞製備的基本技術。整體要求：掌握哺乳動物細胞製備和培養以及細胞培養在食品毒理學中應用。熟悉亞細胞組分製備及其檢測方法、生物膜的製備與其性質的研究方法以及分子生物學技術在毒理學中的應用。瞭解體外試驗系統。2食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024第九章主要內容1.體外實驗2.哺乳動物細胞製備和培養3.新生物技術在毒理學中的應用3食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024體外實驗4食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024體外試驗－－概述分類①篩選試驗②附加試驗③替代試驗5食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024體外試驗－－概述體外試驗的優缺點6食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024體外試驗－－概述體外試驗的優缺點－－不足之處：①體外到體內外推的問題；②體外毒性試驗難以預測慢性毒性。7食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024體外試驗－－體外試驗系統(一)臟器灌流(二)臟器切片(三)原代細胞培養(四)細胞培養(五)組織勻漿(六)亞細胞組分(七)酶8食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養9食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養細胞是生物體的結構和功能單位，把細胞從生物體中分離出來，在體外模擬體內的生理環境，使之在人工環境下存活並生長，以便於更直接地研究細胞的結構、功能、代謝和細胞對環境諸因素影響的反應等，這就是細胞培養(CellCulture)研究的內容。10食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養細胞毒理學是研究外源性有害因數包括物理、化學和生物因數對生命細胞損傷作用規律，探討毒作用機制，並對其作出危險評估的一門方法學，是毒理學的一個重要分支。細胞毒理學研究方法的特點：(1)操作簡便、實驗花費少；(2)可在細胞存活的狀態下研究分析和評價；(3)實驗條件易於控制，實驗重複性好；(4)可避免實驗動物個體差異。11食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養－－概述細胞在毒理學中應用的優、缺點：12食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養－－基本技術儀器與設備培養用液消毒技術13食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養－－培養細胞的鑒定

污染鑒定生存指標細胞特性鑒定14食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養－－細胞培養在食品毒理學中應用毒理學中應用細胞培養技術時應注意的幾個問題：1.細胞類型的選擇2.代謝活化3.受試物的給予4.設立陽性對照組5.毒性指標的選擇15食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024哺乳動物細胞製備和培養細胞生物學網路資源1．/德克薩斯大學細胞生物學研究生培養方面的網站2．/bio/bio181/BIOBK/BioBookCELL2.html一個細胞學教學網3．/bio/BIO181/BIOBK/BioBookTOC.html國外的細胞生物學線上圖書4．/courses/加州大學伯克利分校細胞與分子教學網站5．/Science/Cell_Biology/細胞生物學網址16食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用17食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用一、PCR技術PCR(polymerasechainreaction)技術稱聚合酶鏈反應技術，又稱無細胞克隆技術，是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。其主要過程由變性、退火和延伸三個步驟反復的迴圈組成。18食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用二、毒理學中的mRNA定性與定量的測定方法Northern印跡分析(Northernblotanalysis)是廣泛使用的mRNA測定方法之一，其基本原理是將RNA固定於帶電荷的膜上，用特定的RNA探針與其雜交。19食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用三、轉基因動物（一）轉基因動物的產生1974年。Jaenisch等將病毒SV40的DNA注入小鼠的胚泡，發現40％子代鼠的器官中整合有外源基因，首次成功地培育了轉基因動物；1982年，Palmiter等用顯微注射法，將小鼠金屬硫蛋白啟動子和大鼠生長激素基因拼接轉入小鼠受精卵原核中，得到7只轉基因小鼠。20食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用三、轉基因動物（二）轉基因動物模型的構建目的基因的構建目的基因的導入轉基因動物篩選及繁育轉基因品系21食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用三、轉基因動物（三）轉基因動物模型在毒理學中的作用致突變檢測模型致癌檢測的模型其他毒理學機制研究模型22食品毒理学课件体外实验与新生物技术在毒理学中的应用5/9/2024新生物技術在毒理學中的應用四、基因晶片技術基因晶片(genechip)，又稱DNA晶片，是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規律地排列固定於支持物上，然後與待測的標記樣品的基因按堿基配對的原理進行雜交，再通過鐳射共聚焦螢光檢測系統等對晶片進行掃描，並配以電腦系統對每一探針上的螢光信號作比較和檢測，從而迅速得出所需要的資訊，分析出待測樣品DNA序列。23