DB32T3777-2020规模化猪场猪圆环病毒病防治技术规范

ICS65.020.20

B31

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3777—2020

规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范

TechnicalSpecificationsforPreventionandControlofPorcineCircovirusDiseases

intheLarge-scalePigFarms

2020-04-08发布2020-05-15实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3777—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由南京农业大学提出并归口。

本标准起草单位：南京农业大学。

本标准起草人：姜平、白娟、王先炜、李玉峰、陈闻、曹瑞兵、周斌、许家荣

II

DB32/T3777—2020

规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范

1范围

本标准规定了猪圆环病毒病的诊断、疫情报告、疫情处置、预防与控制等技术规范。

本标准适用于规模化猪场猪圆环病毒病的诊断、疫情报告和确认、疫情处置、预防与控制。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链式反应试验方法

GB/T35910猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范

DB32/T1457猪圆环病毒2型检测方法SYBRGreenI实时定量PCR

《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猪圆环病毒病Porcinecircovirusdisease,PCVD

又称猪圆环病毒相关性疾病，是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染引起的具有多种临床表现的疾病，

主要包括：断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍和肉

芽肿性肠炎。

3.2

猪圆环病毒2型感染Porcinecircovirustype2infection

PCV2侵染猪体，并在一定部位定居、生长、繁殖，引起猪体一系列病理反应和免疫反应的过程，

包括亚临床感染和隐性感染。

4诊断

4.1流行病学

4.1.1PCV2可以感染各种年龄、不同性别的猪，多呈亚临床感染。传播途径有水平传播和垂直传播。

临床疾病多伴存在其他病原混合感染或继发感染。

1

DB32/T3777—2020

4.1.2断奶仔猪多系统衰竭综合征一般发生于5周龄~12周龄，发病率一般为10%~30%，有时高达

50%~60%，死淘率在5%~20%范围内。

4.1.3猪皮炎与肾病综合征主要发生于保育猪、育肥猪和成年猪，发病率通常低于1%，饲养管理差

的猪场可以达到10%或更高，高温季节发病率高。

4.1.4猪呼吸道病综合征主要出现于8周龄~26周龄猪群，发病率和死亡率随混合感染的病原性质和

饲养管理条件差异较大。

4.1.5母猪繁殖障碍主要见于后备母猪和第一和第二胎生产母猪。

4.1.6肉芽肿性肠炎主要发生于8周龄～16周龄的猪。

4.2临床症状

4.2.1断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）

患猪主要表现皮肤苍白、被毛粗乱、呼吸困难、腹泻，呈现进行性消瘦，猪群长势不均，偶尔出现

黄疸症状，易继发其他病原感染，保育猪群死淘率约10%~20%。

4.2.2猪皮炎与肾病综合征（PDNS）

患猪主要表现厌食和精神沉郁，后肢到会阴处皮肤或全身皮肤出现不规则、红色或紫色的斑疹或丘

疹，形成黑痂脱落，表皮损伤消退或留下疤痕，病程一般7d~10d。严重的急性感染，可致死亡。

4.2.3猪呼吸道疾病综合征

患猪主要表现生长缓慢、厌食、精神沉郁、发热、咳嗽和呼吸困难,如与猪繁殖与呼吸综合征病毒

和猪肺炎支原体等病原混合感染，呼吸道症状表现会更加明显。

4.2.4母猪繁殖障碍

本病主要见于后备母猪群和新侵猪群，主要表现妊娠后期流产和木乃伊胎、死胎和弱仔数增多。木

乃伊胎可见于妊娠的各个阶段。

4.2.5肉芽肿性肠炎

患猪主要表现皮肤苍白、生长缓慢、腹泻，粪便呈灰色，部分猪粪便带血。

4.3病理变化

4.3.1肉眼病变

4.3.1.1断奶仔猪多系统衰竭综合征：消瘦、贫血、苍白，偶有黄疸。肺脏肿大，间质增宽，呈间质性

肺炎变化，肺质度坚硬或似橡皮。全身淋巴结肿大约2倍~5倍，特别是腹股沟、纵膈、肺门和肠系膜

淋巴结，切面为苍白呈灰黄色，混合感染时有出血。肾脏显著肿大，有白色坏死斑。脾脏肿大，部分发

病猪脾头出现折叠。

4.3.1.2猪皮炎肾病综合征：以皮肤病变和肾脏白色坏死斑为主，皮炎主要见于猪的后肢和会阴部，有

时全身出现。

4.3.1.3猪呼吸道病综合征：多有其它病原继发或混合感染，可出现相应疾病的病理变化，如胸膜炎、

心包炎、腹膜炎和关节炎等。

2

DB32/T3777—2020

4.3.1.4母猪繁殖障碍：流产胎儿可能出现心肌肥大和肝脏充血。

4.3.1.5肉芽肿性肠炎：肠黏膜增厚，肠系膜淋巴结肿大，小肠壁剪开后自动外翻。

4.3.2组织病变

不同临床表现的猪圆环病毒病，患猪的组织学病变有一定共性，主要包括：

淋巴结：淋巴细胞减少，淋巴滤泡消失，出现多核巨噬细胞侵润及包涵体。

脾脏和扁桃体：B细胞滤泡消失，出现包涵体。

肺脏：坏死性和溃疡性细支气管炎，肺泡隔膜的肉芽肿性炎症和细支气管周边的肉芽肿性增生和混

合性炎症。

4.4实验室诊断

4.4.1样品采集、保存与运输

4.4.1.1基本要求

按照NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范标准的要求进行。

4.4.1.2组织样品采集与运送

采取发病猪或死亡猪的淋巴结、脾脏、肺脏和肾脏组织样品，于2℃~8℃条件下24h内送往实验室，

或置-20℃冻存，并在冻结状态下送往实验室。同时，取患猪或病死猪的相同组织样品，用4%甲醛溶液

固定，送往实验室。

4.4.1.3血液样品采集与运送

采用消毒注射器经患猪颈静脉采集血液2mL，凝固后24h内于2℃~8℃条件下送到实验室。

4.4.2病原学诊断

4.4.2.1病毒分离与鉴定

按照SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范进行。将待检样品无菌处理，接种PK15细胞，盲传1

代~3代，采用聚合酶链式反应（PCR）和间接免疫荧光试验（IFA）等方法进行鉴定。

4.4.2.2间接免疫荧光试验（IFA）

采用PCV2Cap的单克隆抗体或PCV2阳性血清，检测细胞培养物中的PCV2抗原（参见附录A.1）。

4.4.2.3聚合酶链式反应

采用针对PCV2基因的特异性引物，通过PCR方法或荧光定量PCR方法检测组织病料中的PCV2

核酸。按照GB/T21674或DB32/T1457方法进行。

4.4.2.4免疫组化试验

肺脏、淋巴结或肠道组织经固定后，用PCV2特异性抗体检测组织中的病毒抗原（参见附录A.2）。

4.4.3血清学诊断

4.4.3.1间接酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测方法

采用商品化的PCV2间接ELISA抗体检测试剂盒进行检测。

3

DB32/T3777—2020

4.4.3.2阻断ELISA抗体检测方法

按照GB/T35910猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测方法的标准要求进行。

4.4.3.3IFA抗体检测方法

采用PCV2感染的PK-15细胞，异硫氰酸荧光素（FITC）标记的羊（鼠或兔亦可行）抗猪IgG或

FITC-SPA（FITC标记的葡萄球菌A蛋白），通过IFA抗体检测方法，检测PCV2抗体（参见附录A.3）。

4.5结果判定

4.5.1同时符合4.1、4.2和4.3中对应疾病条件，判定疑似猪圆环病毒病。

4.5.2符合4.5.1，并符合4.4.2中的任何一条，确诊猪圆环病毒病。

4.5.3符合4.4.3中的任何一条，判定PCV2感染（疫苗免疫猪群除外)。

5疫情报告与处置

按《中华人民共和国动物防疫法》和《动物疫情报告管理办法》中相关规定执行。发现疑似疫情，

畜主应对疑似患病动物进行隔离，对病猪污染的场所、用具、物品严格进行消毒。病死猪、淘汰猪及废

弃物按照《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）进行无害化处理。

6预防与控制

6.1免疫接种

目前，商品化的猪圆环病毒病疫苗有全病毒灭活苗和基因工程亚单位疫苗，可用于免疫母猪和仔猪。

免疫程序一般为：母猪产前45d左右首次免疫，间隔3周~4周加强免疫。仔猪2周~3周龄免疫，间隔

3周~4周可以再免疫一次。

6.2饲养管理

完善日常饲养管理制度，严格实施全进全出和分群饲养制度，保持合适的饲养密度。尽量减少对猪

群的应激。注意环境清洁，改善空气质量，控制猪舍温度。改善饲料的质量，提高猪群的营养水平。保

育舍内设立独立的饮水加药设施。

产房、保育舍、配种怀孕舍、育肥舍和公猪舍应定期做好带猪消毒。生产区内，出入猪舍的各种器

具、推车和饲喂工具应每天刷洗干净，定期消毒。母猪产前1周和产后1周、保育仔猪断奶后第2周和

第4周，饲料中可添加抗菌药物、免疫增强类药物或饲料添加剂等。

4

DB32/T3777—2020

AA

附录A

（规范性附录）

检测方法

A.1免疫荧光试验检测PCV2

A.1.1主要仪器、材料和试剂

荧光倒置显微镜、操净工作台、高速台式冷冻离心机和微量移液器（规格0.5µL~10µL、20µL~

200µL、100µL~1000µL）。

96孔细胞板、1.5mL微量离心管和移液器配套的吸头等。

PK15细胞、PCV2单克隆抗体、PCV2病毒液和荧光标记二抗（羊抗鼠-FITC、SPA-FITC或抗猪

IgG-FITC）。

A.1.2操作方法

A.1.2.1细胞制备用含10%小牛血清的RMPI-1640营养液培养PK15细胞，长满单层后，弃营养液，

用Hank’s液洗涤单层2次~3次后，用0.025%胰酶消化，铺在96孔板上，37℃5%CO2培养36h~48h，细

胞长满单层。

A.1.2.2接种样品将细胞培养物接种96孔细胞单层板上，50µL/孔，37℃吸附1h，弃培养液，加入

维持液（含2%血清的RMPI-1640营养液），50µL/孔，同时，设PCV2病毒液和PBS缓冲液的接种，分别

作为阳性对照和阴性对照，37℃5%CO2培养36h~48h。弃培养液，每孔加入浓度为300mmol/L的D-

氨基葡萄糖液50µL，37℃培养30min，弃去D-氨基葡萄糖液换细胞维持液，37℃继续培养24h~36h。

A.1.2.3固定弃维持液，用PBS缓冲液（参见附录B.1）洗涤细胞一次，充分晾干后，加入100µL

预冷的无水乙醇，4℃固定45min，用PBS缓冲液洗涤3次，每次5min。

A.1.2.4加PCV2抗体孵育将抗PCV2单克隆抗体（或PCV2阳性猪血清）用PBS缓冲液适当稀释后，

每孔加入100µL，37℃孵育1h。

A.1.2.5漂洗用PBS洗涤3次，每次5min。

A.1.2.6加荧光二抗孵育将荧光二抗如羊抗鼠-FITC或SPA-FITC，用PBS缓冲液1:100稀释后，每孔

加入50µL，37℃孵育1h

A.1.2.7漂洗同A.1.2.5。

A.1.2.8观察于荧光显微镜下，观察细胞形态及有无绿色荧光的细胞。

A.1.3结果判定

细胞形态规则，且PCV2阳性对照孔内细胞核内含有大量特异性绿色荧光，而阴性对照孔内无特异

绿色荧光时，则试验成立。样品孔细胞核内有荧光着染，则判PCV2检测阳性。

5

DB32/T3777—2020

A.2免疫组化法检测PCV2抗原

A.2.1主要仪器、材料和试剂

石蜡组织切片机、显微镜、微量移液器（规格0.5µL~10µL、20µL~200µL、100µL~1000µL）。

病理组织染色缸、载玻片、盖玻片和移液器配套的吸头等。

4%中性福尔马林、4%多聚甲醛、3%H2O2甲醇溶液、1.5%的牛血清白蛋白、二甲苯、乙醇、石蜡、

PCV2Cap单克隆抗体、PCV2阳性对照血清和阴性对照血清、HRP标记羊抗鼠IgG（或HRP标记羊抗猪

IgG）和苏木精染色液等。

A.2.2操作方法

A.2.2.1组织固定与修块采集待检猪淋巴结、肺脏、肾脏、脾脏、肝脏、肠道、心脏等组织，大小1

cm3~2cm3，置4%缓冲福尔马林中固定8h~12h后，将组织修成5mm×5mm×2mm~3mm的

小块，再置4%多聚甲醛中固定8h~12h。

A.2.2.2脱水、透明与包埋将固定好的组织取出，可稍作修整后，置于脱水筐中，用梯度酒精脱水。

75%乙醇浸泡45min~1h，重复一次；85%乙醇浸泡45min~1h，重复一次；95%乙醇浸泡1h~2h，

重复一次；无水乙醇浸泡1h~2h，重复一次。将脱水完全的组织浸泡于二甲苯中3min左右（肺脏透

明时间要控制好，不要超过1min），取出后，置于60℃石蜡中透蜡2次，各1h~1.5h。透蜡后，将组织

包埋于石蜡中。

A.2.2.3载玻片及盖玻片的处理将新的载玻片浸泡酸中过夜，用自来水充分冲洗后，去离子水清洗

干净，并在温箱中烘干。如有必要，可用0.1mg/mL的多聚甲醛浸泡10min后烘干。

A.2.2.4切片、贴片与烤片将蜡块修整到比组织块略大，在切片机上5µm厚度连续切片。将切好的

组织在42℃水浴中充分展平后，贴于载玻片上。贴片后平放一段时间，防止组织滑落，然后置于染色

架上60℃烤片过夜。处理好的组织切片可置于2℃~8℃保存。

A.2.2.5脱蜡和水化将组织片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；无水乙醇中

浸泡5min，重复一次；95%乙醇中浸泡5min，重复一次；85%乙醇中浸泡5min，重复一次；75%乙

醇中浸泡5min，重复一次；PBS清洗5min，复洗3次。

A.2.2.6抗原修复在微波炉中将柠檬酸盐缓冲液（附录B）加热至沸腾后，将组织切片置于缓冲液，

继续在微波炉中维持15min，取出后自然冷却至室温，然后用PBS清洗5min，复洗3次。

A.2.2.7封闭内源性过氧化物酶将清洗好的组织切片擦干或自然干燥后，滴加3%H2O2甲醇溶液100

µL，于室温中孵育15min，以封闭内源性过氧化物酶，防止非特异性染色。然后用PBS清洗3次，每次5

min。

A.2.2.8封闭用浓度为1.5%的牛血清白蛋白(BSA)作为封闭液，滴加在组织上，每块组织滴加50µL，

于室温封闭15min，用PBS清洗3次，每次5min。

A.2.2.9加PCV2抗体孵育将PCV2单克隆抗体或PCV2阳性猪血清作适当稀释后，滴加在组织切片

上，每片组织滴加100µL，置于湿盒内，37℃孵育1h。孵育后，用PBS清洗5min，重复3次。

A.2.2.10加二抗孵育将HRP标记羊抗鼠IgG（或HRP标记羊抗猪IgG）用PBS作1:3000稀释后，每组

织片滴加100µL，37℃孵育1h。用PBS清洗5min，重复3次。

6

DB32/T3777—2020

A.2.2.11DAB显色将组织片擦干，滴加DAB显色液50µL，于室温显色5min~10min（可在显微镜

下掌握染色程度），PBS清洗5min，重复3次。

A.2.2.12苏木精复染、脱水、透明和封片苏木精染色1min，水洗蓝化（在显微镜下掌握染色程度，

过度可用盐酸酒精分化）。梯度酒精脱水：75%，5min，2次；85%，5min，2次；95%，5min，2次；

100%，5min，2次。二甲苯透明：5min~10min，2次。取出，待二甲苯尚未挥发完全时，中性树胶封

片。

A.2.2.13观察将染色处理后的切片置显微镜下，观察组织细胞形态结构、淋巴细胞数量，尤其是有

无细胞着染情况。

A.2.3结果判定

在高倍显微镜下观察，切片组织中出现棕黄色着染细胞，判为PCV2抗原检出阳性。

A.3免疫荧光试验检测PCV2抗体

A.3.1主要仪器、材料和试剂

荧光倒置显微镜、操净工作台、高速台式冷冻离心机和微量移液器（规格0.5µL~10µL、20µL~

200µL、100µL~1000µL）。

96孔细胞板、1.5mL微量离心管和移液器配套的吸头等。

PK15细胞、PCV2病毒液、PCV2阳性对照血清和阴性对照血清、荧光标记二抗（羊抗鼠-FITC、

SPA-FITC或抗猪IgG-FITC）。

A.3.2操作方法

A.3.2.1细胞制备用含10%小牛血清的RMPI-1640营养液培养PK15细胞，长满单层后，弃营养液，

用Hank’s液洗涤单层2次~3次后，用0.025%胰酶消化，铺在96孔板上，37℃5%CO2培养36h~48h，细

胞长满单层。

4

A.3.2.2接种病毒将PCV2（10TCID50/mL）接种96孔细胞单层板上，50μL/孔，37℃吸附1h，弃

培养液，加入2%血清的RMPI-1640维持液，50μL/孔，37℃5%CO2培养36h~48h。弃培养液，每孔

加入浓度为300mmol/L的D-氨基葡萄糖液50μL，37℃培养30min，弃去D-氨基葡萄糖液换入细胞维持

液，37℃继续培养24h。

A.3.2.3固定弃维持液，用PBS缓冲液洗涤细胞一次，充分干燥后，加入100μL预冷的无水乙醇，2℃

~8℃固定45min，用PBS缓冲液洗涤3次，每次5min。

A.3.2.4加血清样品孵育取无菌处理的猪血清样品，用PBS缓冲液做2倍梯度稀释至1:128，每个稀

释度样品加2个孔，每孔加入100μL。同时，设1:8稀释的PCV2阳性对照血清和阴性对照血清，各加2

个孔，每孔加入100μL，37℃孵育1h。

A.3.2.5漂洗用PBS洗涤3次，每次5min。

A.3.2.6加荧光二抗孵育加入用PBS缓冲液作1:100稀释的荧光二抗，如羊抗猪-FITC或SPA-FITC，每

孔50μL，37℃孵育1h。

7

DB32/T3777—2020

A.3.2.7漂洗同A.4.2.5。

A.3.2.8观察于荧光显微镜下，仔细观察细胞形态及有无绿色荧光的细胞。

A.3.3结果判定

细胞形态规则，且PCV2对照孔内细胞核内含有大量特异性绿色荧光，阴性血清对照孔内无特异绿

色荧光时，则试验成立。样品孔细胞核内有荧光着染，则判PCV2检测为阳性。以荧光着染阳性细胞孔

的最高血清稀释倍数作为血清抗体的检测效价。

8

DB32/T3777—2020

BB

附录B

（规范性附录）

试剂配制

B.1PBS缓冲液

取NaCl8g、KH2PO4·2H2O0.2g、Na2HPO4·2H2O2.9g和KCl0.2g，溶于灭菌去离子水中，定容至

1000mL，分装；100mL/瓶。2℃~8℃保存。

B.2抗原包被液（pH9.6，0.05mol/L）

称取Na2CO31.59g、NaHCO32.93g，加去离子水800mL，用1mol/L的NaOH调pH值至9.6，加

去离子水定容至1000mL。

B.3封闭液

称取BSA1g，溶解于100mLPBST洗涤液中，0.22μm滤膜过滤，分装后4℃保存。

B.4血清样品稀释液

取NaCl8g、KH2PO4·2H2O0.2g、Na2HPO4·2H2O2.9g、KCl0.2g和Tween-200.5mL，溶于灭菌去

离子水中，定容至1000mL，0.22μm滤膜过滤，分装；20mL/瓶。2℃~8℃保存。

B.5PBST洗涤液

10×PBST洗涤液配制：取NaCl80g、KH2PO4·2H2O2g、Na2HPO4·12H2O29g、KCl2g、Tween-20

5mL，加入灭菌去离子水充分溶解，定容至1000mL，0.22μm滤膜过滤，分装，80mL/瓶。2℃~8℃保

存。

洗涤液配制：将10倍浓缩洗涤液恢复至室温，并摇动使沉淀溶解（或于37℃水浴锅中加热5min～

10min），然后用去离子水作10倍稀释，混匀，稀释好的洗涤液在2℃~8℃可以存放7d。

B.6显色液

A液配制：取Na2HPO414.6g、柠檬酸9.33g、30%H2O22mL，加蒸馏水至1000mL，调pH至5.2。

B液配制：取3,3,5,5-四甲基联苯二胺（TMB）20mg、无水乙醇10mL，加蒸馏水至1000mL。

使用前将A液和B液等量混合，分装于棕色瓶内，20mL/瓶，2℃~8℃避光保存。

B.7终止液（2mol/LH2SO4）

取去离子水177.8mL，缓慢加入H2SO4(96%)22.2mL，10mL/瓶，2℃~8℃保存。

B.8柠檬酸盐缓冲液（pH5.0，0.01mol/L）

0.1mol/L柠檬酸：取21.01g柠檬酸，加蒸馏水至1000mL。

0.1mol/L柠檬酸钠：取29.41g柠檬酸钠，加蒸馏水至1000mL。

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DB32/T3777—2020

取9mL0.1mol/L柠檬酸和41mL0.1mol/L柠檬酸钠，用1mol/L的NaOH调pH值至5.0，加蒸馏水

定容至5000mL，混匀，100mL/瓶，2℃~8℃保存。

B.94%缓冲福尔马林

取40%甲醛溶液4mL，加蒸馏水定容至100mL，混匀，2℃~8℃保存。

B.104%多聚甲醛

取20g多聚甲醛粉末，加蒸馏水定容至500mL，混匀，100mL/瓶，2℃~8℃保存。

B.113%H2O2甲醇溶液

取1.5mLH2O2，加甲醇溶液定容至50mL，混匀，2℃~8℃保存。

B.121.5%的牛血清白蛋白

取1.5mL新生牛血清，加1×PBS缓冲液定容至100mL，混匀，2℃~8℃保存。

________________________

10

DB32/T3777—2020

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4诊断..............................................................................1

5疫情报告与处置....................................................................4

6预防与控制........................................................................4

附录A（规范性附录）..................................................................6

附录B（规范性附录）.................................................................10

I

DB32/T3777—2020

规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范

1范围

本标准规定了猪圆环病毒病的诊断、疫情报告、疫情处置、预防与控制等技术规范。

本标准适用于规模化猪场猪圆环病毒病的诊断、疫情报告和确认、疫情处置、预防与控制。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链式反应试验方法

GB/T35910猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范

DB32/T1457猪圆环病毒2型检测方法SYBRGreenI实时定量PCR

《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猪圆环病毒病Porcinecircovirusdisease,PCVD

又称猪圆环病毒相关性疾病，是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染引起的具有多种临床表现的疾病，

主要包括：断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍和肉

芽肿性肠炎。

3.2

猪圆环病毒2型感染Porcinecircovirustype2infection

PCV2侵染猪体，并在一定部位定居、生长、繁殖，引起猪体一系列病理反应和免疫反应的过程，

包括亚临床感染和隐性感染。

4诊断

4.1流行病学

4.1.1PCV2可以感染各种年龄、不同性别的猪，多呈亚临床感染。传播途径有水平传播和垂直传播。

临床疾病多伴存在其他病原混合感染或继发感染。

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4.1.2断奶仔猪多系统衰竭综合征一般发生于5周龄~12周龄，发病率一般为10%~30%，有时高达

50%~60%，死淘率在5%~20%范围内。

4.1.3猪皮炎与肾病综合征主要发生于保育猪、育肥猪和成年猪，发病率通常低于1%，饲养管理差

的猪场可以达到10%或更高，高温季节发病率高。

4.1.4猪呼吸道病综合征主要出现于8周龄~26周龄猪群，发病率和死亡率随混合感染的病原性质和

饲养管理条件差异较大。

4.1.5母猪繁殖障碍主要见于后备母猪和第一和第二胎生产母猪。

4.1.6肉芽肿性肠炎主要发生于8周龄～16周龄的猪。

4.2临床症状

4.2.1断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）

患猪主要表现皮肤苍白、被毛粗乱、呼吸困难、腹泻，呈现进行性消瘦，猪群长势不均，偶尔出现

黄疸症状，易继发其他病原感染，保育猪群死淘率约10%~20%。

4.2.2猪皮炎与肾病综合征（PDNS）

患猪主要表现厌食和精神沉郁，后肢到会阴处皮肤或全身皮肤出现不规则、红色或紫色的斑疹或丘

疹，形成黑痂脱落，表皮损伤消退或留下疤痕，病程一般7d~10d。严重的急性感染，可致死亡。

4.2.3猪呼吸道疾病综合征

患猪主要表现生长缓慢、厌食、精神沉郁、发热、咳嗽和呼吸困难,如与猪繁殖与呼吸综合征病毒

和猪肺炎支原体等病原混合感染，呼吸道症状表现会更加明显。

4.2.4母猪繁殖障碍

本病主要见于后备母猪群和新侵猪群，主要表现妊娠后期流产和木乃伊胎、死胎和弱仔数增多。木

乃伊胎可见于妊娠的各个阶段。

4.2.5肉芽肿性肠炎

患猪主要表现皮肤苍白、生长缓慢、腹泻，粪便呈灰色，部分猪粪便带血。

4.3病理变化

4.3.1肉眼病变

4.3.1.1断奶仔猪多系统衰竭综合征：消瘦、贫血、苍白，偶有黄疸。肺脏肿大，间质增宽，呈间质性

肺炎变化，肺质度坚硬或似橡皮。全身淋巴结肿大约2倍~5倍，特别是腹股沟、纵膈、肺门和肠系膜

淋巴结，切面为苍白呈灰黄色，混合感染时有出血。肾脏显著肿大，有白色坏死斑。脾脏肿大，部分发

病猪脾头出现折叠。

4.3.1.2猪皮炎肾病综合征：以皮肤病变和肾脏白色坏死斑为主，皮炎主要见于猪的后肢和会阴部，有

时全身出现。

4.3.1.3猪呼吸道病综合征：多有其它病原继发或混合感染，可出现相应疾病的病理变化，如胸膜炎、

心包炎、腹膜炎和关节炎等。

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4.3.1.4母猪繁殖障碍：流产胎儿可能出现心肌肥大和肝脏充血。

4.3.1.5肉芽肿性肠炎：肠黏膜增厚，肠系膜淋巴结肿大，小肠壁剪开后自动外翻。

4.3.2组织病变

不同临床表现的猪圆环病毒病，患猪的组织学病变有一定共性，主要包括：

淋巴结：淋巴细胞减少，淋巴滤泡消失，出现多核巨噬细胞侵润及包涵体。

脾脏和扁桃体：B细胞滤泡消失，出现包涵体。

肺脏：坏死性和溃疡性细支气管炎，肺泡隔膜的肉芽肿性炎症和细支气管周边的肉芽肿性增生和混

合性炎症。

4.4实验室诊断

4.4.1样品采集、保存与运输

4.4.1.1基本要求

按照NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范标准的要求进行。

4.4.1.2组织样品采集与运送

采取发病猪或死亡猪的淋巴结、脾脏、肺脏和肾脏组织样品，于2℃~8℃条件下24h内送往实验室，

或置-20℃冻存，并在冻结状态下送往实验室。同时，取患猪或病死猪的相同组织样品，用4%甲醛溶液

固定，送往实验室。

4.4.1.3血液样品采集与运送

采用消毒注射器经患猪颈静脉采集血液2mL，凝固后24h内于2℃~8℃条件下送到实验室。

4.4.2病原学诊断

4.4.2.1病毒分离与鉴定

按照SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范进行。将待检样品无菌处理，接种PK15细胞，盲传1

代~3代，采用聚合酶链式反应（PCR）和间接免疫荧光试验（IFA）等方法进行鉴定。

4.4.2.2间接免疫荧光试验（IFA）

采用PCV2Cap的单克隆抗体或PCV2阳性血清，检测细胞培养物中的PCV2抗原（参见附录A.1）。

4.4.2.3聚合酶链式反应

采用针对PCV2基因的特异性引物，通过PCR方法或荧光定量PCR方法检测组织病料中的PCV2

核酸。按照GB/T21674或DB32/T1457方法进行。

4.4.2.4免疫组化试验

肺脏、淋巴结或肠道组织经固定后，用PCV2特异性抗体检测组织中的病毒抗原（参见附录A.2）。

4.4.3血清学诊断

4.4.3.1间接酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测方法

采用商品化的PCV2间接ELISA抗体检测试剂盒进行检测。

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4.4.3.2阻断ELISA抗体检测方法

按照GB/T35910猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测方法的标准要求进行。

4.4.3.3IFA抗体检测方法

采用PCV2感染的PK-15细胞，异硫氰酸荧光素（FITC）标记的羊（鼠或兔亦可行）抗猪IgG或

FITC-SPA（FITC标记的葡萄球菌A蛋白），通过IFA抗体检测方法，检测PCV2抗体（参见附录A.3）。

4.5结果判定

4.5.1同时符合4.1、4.2和4.3中对应疾病条件，判定疑似猪圆环病毒病。

4.5.2符合4.5.1，并符合4.4.2中的任何一条，确诊猪圆环病毒病。

4.5.3符合4.4.3中的任何一条，判定PCV2感染（疫苗免疫猪群除外)。

5疫情报告与处置

按《中华人民共和国动物防疫法》和《动物疫情报告管理办法》中相关规定执行。发现疑似疫情，

畜主应对疑似患病动物进行隔离，对病猪污染的场所、用具、物品严格进行消毒。病死猪、淘汰猪及废

弃物按照《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）进行无害化处理。

6预防与控制

6.1免疫接种

目前，商品化的猪圆环病毒病疫苗有全病毒灭活苗和基因工程亚单位疫苗，可用于免疫母猪和仔猪。

免疫程序一般为：母猪产前45d左右首次免疫，间隔3周~4周加强免疫。仔猪2周~3周龄免疫，间隔

3周~4周可以再免疫一次。

6.2饲养管理

完善日常饲养管理制度，严格实施全进全出和分群饲养制度，保持合适的饲养密度。尽量减少对猪

群的应激。注意环境清洁，改善空气质量，控制猪舍温度。改善饲料的质量，提高猪群的营养水平。保

育舍内设立独立的饮水加药设施。

产房、保育舍、配种怀孕舍、育肥舍和公猪舍应定期做好带猪消毒。生产区内，出入猪舍的各种器

具、推车和饲喂工具应每天刷洗干净，定期消毒。母猪产前1周和产后1周、保育仔猪断奶后第2周和

第4周，饲料中可添加抗菌药物、免疫增强类药物或饲料添加剂等。

4

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AA

附录A

（规范性附录）

检测方法

A.1免疫荧光试验检测PCV2

A.1.1主要仪器、材料和试剂

荧光倒置显微镜、操净工作台、高速台式冷冻离心机和微量移液器（规格0.5µL~10µL、20µL~

200µL、100µL~1000µL）。

96孔细胞板、1.5mL微量离心管和移液器配套的吸头等。

PK15细胞、PCV2单克隆抗体、PCV2病毒液和荧光标记二抗（羊抗鼠-FITC、SPA-FITC或抗猪

IgG-FITC）。

A.1.2操作方法

A.1.2.1细胞制备用含10%小牛血清的RMPI-1640营养液培养PK15细胞，长满单层后，弃营养液，

用Hank’s液洗涤单层2次~3次后，用0.025%胰酶消化，铺在96孔板上，37℃5%CO2培养36h~48h，细

胞长满单层。

A.1.2.2接种样品将细胞培养物接种96孔细胞单层板上，50µL/孔，37℃吸附1h，弃培养液，加入

维持液（含2%血清的RMPI-1640营养液），50µL/孔，同时，设PCV2病毒液和PBS缓冲液的接种，分别

作为阳性对照和阴性对照，37℃5%CO2培养36h~48h。弃培养液，每孔加入浓度为300mmol/L的D-

氨基葡萄糖液50µL，37℃培养30min，弃去D-氨基葡萄糖液换细胞维持液，37℃继续培养24h~36h。

A.1.2.3固定弃维持液，用PBS缓冲液（参见附录B.1）洗涤细胞一次，充分晾干后，加入100µL

预冷的无水乙醇，4℃固定45min，用PBS缓冲液洗涤3次，每次5min。

A.1.2.4加PCV2抗体孵育将抗PCV2单克隆抗体（或PCV2阳性猪血清）用PBS缓冲液适当稀释后，

每孔加入100µL，37℃孵育1h。

A.1.2.5漂洗用PBS洗涤3次，每次5min。

A.1.2.6加荧光二抗孵育将荧光二抗如羊抗鼠-FITC或SPA-FITC，用PBS缓冲液1:100稀释后，每孔

加入50µL，37℃孵育1h

A.1.2.7漂洗同A.1.2.5。

A.1.2.8观察于荧光显微镜下，观察细胞形态及有无绿色荧光的细胞。

A.1.3结果判定

细胞形态规则，且PCV2阳性对照孔内细胞核内含有大量特异性绿色荧光，而阴性对照孔内无特异

绿色荧光时，则试验成立。样品孔细胞核内有荧光着染，则判PCV2检测阳性。

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A.2免疫组化法检测PCV2抗原

A.2.1主要仪器、材料和试剂

石蜡组织切片机、显微镜、微量移液器（规格0.5µL~10µL、20µL~200µL、100µL~1000µL）。

病理组织染色缸、载玻片、盖玻片和移液器配套的吸头等。

4%中性福尔马林、4%多聚甲醛、3%H2O2甲醇溶液、1.5%的牛血清白蛋白、二甲苯、乙醇、石蜡、

PCV2Cap单克隆抗体、PCV2阳性对照血清和阴性对照血清、HRP标记羊抗鼠IgG（或HRP标记羊抗猪

IgG）和苏木精染色液等。

A.2.2操作方法

A.2.2.1组织固定与修块采集待检猪淋巴结、肺脏、肾脏、脾脏、肝脏、肠道、心脏等组织，大小1

cm3~2cm3，置4%缓冲福尔马林中固定8h~12h后，将组织修成5mm×5mm×2mm~3mm的

小块，再置4%多聚甲醛中固定8h~12h。

A.2.2.2脱水、透明与包埋将固定好的组织取出，可稍作修整后，置于脱水筐中，用梯度酒精脱水。

75%乙醇浸泡45min~1h，重复一次；85%乙醇浸泡45min~1h，重复一次；95%乙醇浸泡1h~2h，

重复一次；无水乙醇浸泡1h~2h，重复一次。将脱水完全的组织浸泡于二甲苯中3min左右（肺脏透

明时间要控制好，不要超过1min），取出后，置于60℃石蜡中透蜡2次，各1h~1.5h。透蜡后，将组织

包埋于石蜡中。

A.2.2.3载玻片及盖玻片的处理将新的载玻片浸泡酸中过夜，用自来水充分冲洗后，去离子水清洗

干净，并在温箱中烘干。如有必要，可用0.1mg/mL的多聚甲醛浸泡10min后烘干。

A.2.2.4切片、贴片与烤片将蜡块修整到比组织块略大，在切片机上5µm厚度连续切片。将切好的

组织在42℃水浴中充分展平后，贴于载玻片上。贴片后平放一段时间，防止组织滑落，然后置于染色

架上60℃烤片过夜。处理好的组织切片可置于2℃~8℃保存。

A.2.2.5脱蜡和水化将组织片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；无水乙醇中

浸泡5min，重复一次；95%乙醇中浸泡5min，重复一次；85%乙醇中浸泡5min，重复一次；75%乙

醇中浸泡5min，重复一次；PBS清洗5min，复洗3次。

A.2.2.6抗原修复在微波炉中将柠檬酸盐缓冲液（附录B）加热至沸腾后，将组织切片置于缓冲液，

继续在微波炉中维持15min，取出后自然冷却至室温，然后用PBS清洗5min，复洗3次。

A.2.2.7封闭内源性过氧化物酶将清洗好的组织切片擦干或自然干燥后，滴加3%H2O2甲醇溶液100

µL，于室温中孵育15min，以封闭内源性过氧化物酶，防止非特异性染色。然后用PBS清洗3次，每次5

min。

A.2.2.8封闭用浓度为1.5%的牛血清白蛋白(BSA)作为封闭液，滴加在组织上，每块组织滴加50