豆芽中氯苯氧乙酸氟苯氧乙酸等简要编制说明

DB北京市食品安全地方标准DB11/XXXXX—XXXX食品安全地方标准4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、7种植物生长调整剂及福美双的测定XXXX-XX-XX公布 XXXX-XX-XX实施北京市卫生和计划生育委员会 发布DB11/DB11/XXXXX—XXXX前 言本标准代替DB11/T379-2023《豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定》。本标准与DB11/T379-2023相比，主要变化如下：——对原标准方法进展构造调整，删除了2,4-滴的检测方法；——增加了4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、异戊烯腺嘌呤6种植物生长调整剂的液相色谱-质谱联用检测方法；——修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品安全地方标准豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7种植物生长调整剂及福美双的测定》。〔国家食品质量安全监视检验中心〕。本标准主要起草人：第一法〔仲裁法〕：刘平、范赛、吴国华、赵榕、刘伟、赵旭东；其次法：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。原标准于2023年首次公布，本次为第一次修订。IDB11/DB11/XXXXX—XXXX14食品安全地方标准豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7种植物生长调整剂及福美双测定范围本标准规定了豆芽中4-氯苯氧乙酸〔4-CPA〕、4-氟苯氧乙酸(4-FPA)、6-苄基腺嘌呤(6-BAP)、异戊烯腺嘌呤(z-IP)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、赤霉素〔GA〕7种植物生长调整剂及福美双的测定方法。本标准适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7种植物生长调整剂及福美双残留量的测定。原理试样经乙腈提取，在酸性条件下盐析脱水，离心后，分散固相萃取管净化进液相色谱-串联质谱系统分析，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。试剂乙腈：色谱纯。甲醇：色谱纯。QuEChERS4gMgSO4、1gNaCl、1g0.5g十八烷基硅烷〔C18〕。标准品44-6->99.0%。标准溶液配制标准储藏液：分别准确称取植物生长调整剂标准品0.01g(准确到0.0001g)，用甲醇溶解并移入10mL1.00mg4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤、吲哚丁酸单标储藏液100μL10mL0.01mg200μL10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.02mg植物生长调整剂。上述储藏液存放于-20℃冰箱冷冻备用。6100μL，4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸单标储藏液1mL10mL0.1μg61μg44-2μg100μL10mL0.01μg60.1μg44-0.2μg-20℃冰箱冷冻备用。5.1试样处理方法提取，必要时使用LC-MS/MS标准工作溶液系列配制：准确吸取标准使用液10μL、20μL、50μL、80μL、100μL离心管中，加空白豆芽萃取液〔3.3.3〕1mL，涡旋混匀。配制成浓度依次为6-苄基腺嘌呤、异戊烯腺嘌呤0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、0.8ng/mL、1.0ng/mL；4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、吲哚1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL；吲哚乙酸2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、16.0ng/mL、20.0ng/mLLC-MS/MS仪器和设备本章内容要用常规字体WatersXevoTQ-S〔LC-ESI-MS/MS〕。4.2天平〔0.001g0.0001g〕。涡旋振荡器。高速冷冻离心机(最高转速:15,000RPM)。组织捣碎机。分析步骤试样制备10g〔0.001g〕50mL10mL乙腈，涡2min4.0gMgSO4、1.0gNaCl、1.0g0.5g柠檬酸二钠盐,涡旋1min，10000rap/min5min2mL15ml100mgC18，涡旋混匀，10000rap/min离心5min，准确吸取上清液100μ L，用超纯水定容至1mL，涡旋混匀，供LC-MS/MS分析。仪器参考条件色谱参考条件色谱柱：WATERSACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)。流淌相A：正离子模式：甲醇；负离子模式：乙腈。流淌相B：正离子模式：0.1%甲酸水；负离子模式：0.1%氨水。流速：0.35mL/min。进样量：5uL。柱温：30℃。表1梯度洗脱条件时间A〔%〕B〔%〕变化曲线029865703065.5100066.5100067298682986质谱参考条件6ESI〔MRM〕,毛细管电压：3.17kV；脱溶剂气流：N1000L/h；脱溶剂温度：450℃；锥孔气流：N150L/h；离子源温度：150℃；碰撞室压2 2力：3.1×10-3mbar；碰撞气体:氩气。吲哚乙酸、吲哚丁酸、对氟苯氧乙酸、对氯苯氧乙酸承受EST负离子扫描模式〔MRM〕，毛细管电压：3.0kV；脱溶剂气流：N1000L/h；脱溶剂温度：500℃；锥孔气流：N150L/h；离子2 2源温度：150℃；碰撞室压力：3.1×10-3mbar6种植物生长调整剂的质谱参数见表2。标准曲线的制作将标准系列工作液(3.3.4度，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵座标，绘制标准曲线。吲哚丁酸1.88202.14-氯苯氧乙酸1.84185.0116.1158.1*111.020吲哚丁酸1.88202.14-氯苯氧乙酸1.84185.0116.1158.1*111.0202020171517名称保存时间〔min〕母离子子离子锥孔电压碰撞能量91.1*25206-苄基腺嘌呤3.90226．5148.0252069.22510异戊烯腺嘌呤3.83204.4136.0*2520148.13114128.01915吲哚乙酸1.37174.1130.0*198174.1193127.0*20144-氟苯氧乙酸1.48169.1111.1*2014125.0125.02015*为定量离子,全部质谱参数均在WatersXevoTQ-S上完成，承受离子阱质谱采集时，子离子碎片或碰撞能量有可能消灭差异，以各自仪器为准。试样溶液的测定将试样溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪中，得到样品中相应植物生长调整剂的峰面积，依据标准曲线得到待测液中相应植物生长调整剂的浓度，平行测定次数不少于两次。分析结果的表述试样中植物生长调整剂含量按式〔1〕计算：Af1000Xm

………….…(1)式中：X——试样中植物生长调整剂的含量，单位为μg/kg；A——试样中定量子离子面积对应的植物生长调整剂的质量，μg；f10；m——试样的取样量，g。计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保存两位有效数字。周密度分析方法的牢靠性。取不少于3份基质与实际试样相像的空白样品，分别参加标准溶液。将制备好的加标试样按上述方法进展分析，各目标化合物的回收率应在75-125%范围内，相对标准偏差〔RSD〕小于20%。其他方法空白每个批次最多15个样品，需做一次方法空白试验。质控样品每个批次最多15样品。目标化合物的测定值依据加标浓度应在标准值的75%～125%范围之内。方法检出限与定量限试样中目标化合物色谱峰的保存时间与相应标准色谱峰的保存时间全都，变化范围应在±2.5%之内。待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于3〔S/N≥3〕，定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于10〔S/N≥10〕。所得的方法检出限与定量限见表3。化合物检出限定量限表3方法的检出限和定量限〔化合物检出限定量限6-苄基腺嘌呤ug/kg0.03ug/kg0.1异戊烯腺嘌呤0.030.14-氯苯氧乙酸0.31.04-氟苯氧乙酸0.31.0吲哚乙酸3.010.0吲哚丁酸0.31.026-Jul-202312:44:33Jul-202311:44:2220230724_11 MRMof9ChannelsES-100 185>127(4-CPA)3.84e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 169.1>111.1(4-FPA)3.66e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 202.1>158.1(IBA)2.85e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 174.1>130(IAA)1.35e40Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6016MRM26-Jul-202313:20:2220230726_16 MRMof5ChannelsES+100 226.5>91.1(6-BAP)2.90e600.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230726_16 MRMof5ChannelsES+100 204.4>136(Z-IP)1.65e4

0 Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6024-Jul-202312:11:0920230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.52 185>127(4-CPA)0.660.71

0.84 1.54

4.01e31.50

2.582.761.65

1.78

2.262.320.29

0.54

1.11.20

2.46

3.09

3.33

3.56

3.790.39

1.00

1.231.41

2.95

3.233.34

3.74

4.324.434.604.70

4.94.930 4.740.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.35 169.1>111.1(4-FPA)4.81e30.640.620.570.45

2.061.232.06

1.36

1.85 2.112.19

3.250.350

0.921.18

1.511.591.771.89

2.32.422.62.702.96

3.283.47

3.75 3

4.870.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.35 202.1>158.1(IBA)4.97e41.381.461.590.48

1.61.781.94

2.482.162.232.160

3.03.020.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 0.60 174.1>130(IAA)1.53e4% 0.64 1.330.40.46 0.60.85

2.700.81.050

1.71

2.46 2.883.06 4.40 Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.602样品空白的MRMsample1-5sample1-520230726_313.9327-Jul-202311:38:07MRMof5ChannelsES+226.5>91.1(6-BAP)1.36e6%02.803.003.203.403.603.804.0020230726_311003.854.20MRMof5ChannelsES+204.4>136(Z-IP)3.861.22e4%3.873.893.834.122.822.712.852.893.683.823.933.944.084.184.264.363.003.113.293.303.423.433.553.583.784.030 Time2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20711-SHUANGHUANG20230828_5711-SHUANGHUANG20230828_51001.8428-Aug-202312:00:08MRMof9ChannelsES-3.12e5%00.250.500.751.001.251.501.752.00 2.252.502.753.003.253.503.754.004.254.504.755.0020230828_51002.022.04MRMof9ChannelsES-169.1>111.1(4-FPA)4.17e3%0.460.650.670.910.941.821.8901.491.541.470.250.500.751.081.00 1.251.501.752.002.232.252.272.572.722.773.093.133.582.50 2.75 3.00 3.25 3.503.783.754.034.004.254.504.755.0020230828_51001.501.43MRMof9ChannelsES-202.1>158.1(IBA)1.08e41.55%1.680.620.740.781.060.2400.251.281.251.771.811.932.142.252.482.520.500.751.001.50 1.752.002.252.502.792.753.053.003.283.403.573.253.503.853.754.084.104.384.774.825.084.004.254.504.755.0020230828_51003.16MRMof9ChannelsES-174.1>130(IAA)5.74e30.550.59%0.160.390.470.710.891.561.111.231.311.481.581.681.9501.972.342.362.392.662.683.023.103.203.333.523.763.843.884.274.57 4.77Time3MRM其次法豆芽中其次法豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定原理试样中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将样品中的4-氯苯氧乙酸吸量。试剂与材料氢氧化钠〔AR〕。盐酸〔AR〕。磷酸〔AR〕。冰醋酸〔AR〕。甲醇〔HPLC〕。氢氧化钠溶液〔0.01mol/L〕：称取0.40g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。10.6g亚铁氰化钾[KFe(CN)·3HO]100mL。4 6 2乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CHCOO)3mL冰醋酸并加水稀释至3 2100mL。磷酸盐缓冲液〔0.01mol/L〕：称取1.56g的磷酸二氢钠〔NaH2PO4·2H2O〕加水溶解，并定容至1000mL，用50%的磷酸溶液调整pH值至4.0。44-氯苯氧乙酸〔含量≥99%〕0.1000g，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.00mg4-氯苯氧乙酸。临用时甲醇稀释浓度为每毫升相当于0.10mg4-氯苯氧乙酸。固相萃取小柱〔3ml/500mg〕：ODS-C18小柱，用时先经10mL甲醇洗脱活化，再用10mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。仪器与设备高效液相色谱仪〔带紫外检测器，配ZORBAXSBC18色谱柱〕。超声波仪。酸度计。组织捣碎机。Milli-Q纯水制备系统。分析步骤试样制备称取捣碎混匀的豆芽样品20g〔准确至0.1g〕于100mL容量瓶中，参加40ml氢氧化钠溶液振摇，然后分别参加亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5mL，混匀，超声提取30min，用氢氧化钠溶液稀释至刻50.0mLpH至2.5，然后以3mL/min的流速通过活化的ODS-C18小柱。先用3.0mL3.0mL，过0.45μm滤膜后，供液相色谱分析。标准曲线的制备准确吸取每毫升相当于0.10mg的4-氯苯氧乙酸0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。制成浓度依次为0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L的标准使用液，供液相色谱分析。色谱条件色谱柱：ZORBAXSBC18柱〔4.6mm×250mm×5μm〕〔或相当型号色谱柱〕。检测波长：228nm。流淌相：甲醇+0.01mol/L磷酸盐缓冲液〔50+50〕(V/V)。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。测定吸取10.0μL2.4.3性，标准曲线法定量。标样及试样图谱见图4及图5。计算按式〔2〕计算。A×f×1000X= ×1.12 〔2〕m×1000式中：X—试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量，单位为毫克每千克〔mg/kg〕；A—从标准曲线上求出的试样液中4-氯苯氧乙酸的质量，单位为微克〔μg〕；f—试样的稀释倍数；m—试样的取样量，单位为克〔g〕；1.12—4-氯苯氧乙酸转换为4-氯苯氧乙酸钠的系数。计算结果保存两位有效数字。周密度10%。检测限在本试验条件下，豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的定量检测限为0.10mg/kg。图4 4－氯苯氧乙酸标样色谱图54－氯苯氧乙酸色谱图6-苄基腺嘌呤残留量的测定原理豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取后，高效液相色谱法测定，以保存时间定性，外标法峰面积定量。试剂与材料乙酸〔AR)〕。1%乙酸溶液。乙腈〔HPLC〕。甲醇〔HPLC〕。100ml〔60+40〕(V/V50μL，混匀。660.1000g〔含量≥99.0%〕100mL用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相当于1.00mg6-苄基腺嘌呤。临用时用甲醇稀释浓度为每毫0.010mg6-苄基腺嘌呤。固相萃取小柱〔3ml/500mg〕：ODS-C小柱，用时先经10mL10mL18洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。仪器与设备高效液相色谱仪〔带紫外检测器，配ZORBAXSBC18

色谱柱〕。Ultra-Turrax离心机〔4500r/min〕。旋转蒸发仪。组织捣碎机。Milli-Q分析步骤试样制备10g〔0.1g〕50mL15mLUltra-Turrax3min,4500r/min10min100mL15mL3mL/minODS-C小柱，先用3.0mL185.0mL0.2μm有机膜滤过后，供液相色谱分析。标准溶液系列的配制0.010mg6-0mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL5.0mL25mL0mg/L0.08mg/L0.16mg/L、0.32mg/L、0.40mg/L、0.80mg/L、2.00mg/L的标准溶液系列，供液相色谱分析。色谱条件色谱柱：ZORBAXSBC18

柱〔4.6mm×250mm×5μm〕〔或相当型号色谱柱〕。检测波长：267nm。流淌相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液〔60+5+35〕(V/V)。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。测定10.0μL3.4.3以保存时间定性，峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图67。计算按式〔3〕计算。式中：

A×f×1000X=m×1000

………………〔3〕X—试样中6-苄基腺嘌呤的含量，单位为毫克每千克〔mg/kg〕；A—从标准曲线上求出的试样溶液中6-苄基腺嘌呤的质量，单位为微克〔μg〕；f—试样的稀释倍数；m—试样的取样量，单位为克〔g〕。计算结果保存两位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10%。检测限60.02mg/kg。6-benzylaminopurine50403020100012345 6 7minmAU60161mAU60161.4mAU140 enirp120 upon100 imaz80 yzne-60 b-6402000 1 2 3 4 5 6 7 min76－苄基腺嘌呤色谱图2,4-滴〔2,4-二氯苯氧乙酸〕残留量的测定原理试样中2,42,4-滴衍生成2,4-滴甲酯，液-液萃取，面积定量。试剂与材料乙腈〔AR〕。甲醇〔AR〕。正己烷〔AR〕。环己烷〔AR〕。乙酸乙酯〔AR〕。pH250％稀硫酸调整水的pH2。氯化钠〔AR〕。50g/L无水硫酸钠：6504h三氟化硼乙醚溶液：47％(V/V)。衍生剂(1429.5mL100mL。2,4-1mL2,4-滴的甲醇标准溶液〔100μg/L〕，用甲醇溶解并100ml1.00μg2,4-滴。本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。仪器与设备气相色谱仪：配有电子捕获检测器。凝胶渗透色谱净化系统。组织捣碎机。恒温水浴锅。旋转蒸发器。电动振荡器。20mL〔或密封严密的密封瓶〕。分析步骤提取50.0g〔0.1g〕于具塞锥形瓶内，参加20mL50mL30min20mL250mL15g40min，分层，提取乙腈层，用旋转蒸发器除去乙腈，5mL20mL衍生化5mL6545min出玻璃瓶快速置于冰浴中冷却，将衍生反响液转移至盛有10mL50g/L50mL5mL，合并有机相，经无水硫酸钠脱水，旋转蒸发器挥至近干，用乙酸乙酯:环己烷〔1:1，V/V〕10mL。2,4-滴甲酯标准工作液的制备5mL2,44.4.22,4-滴甲酯标准工作液，经无水硫酸钠脱水，旋转蒸发器挥至近干后，用正己烷准确定容至5mL。此溶液浓度为每毫升相当于1.00μg2,4-滴。凝胶渗透色谱净化选择凝胶渗透色谱柱规格〔200mm×22mmi.d.〕，柱填料为BioBeadsS-X3200-400相乙酸乙酯:环己烷〔1:1，V:V〕，4.7mL/min5mL11min～15min。衍生化后样品依据上述条件净化，将约20mL5mL。气相色谱条件气相色谱仪：附电子捕获检测器〔ECD，Ni63〕。色谱柱：HP-1MSφ30m×250μm×0.25mm。载气:高纯氮,纯度＞99.99％。载气流速：1.0mL/min。进样方式：不分流。301min25℃/min22020min。进样口温度:250℃。检测器温度:300℃。测定2,4-滴经衍生化的标准工作液、试液各1.0μL4.4.5检测，以保存时间定性，色谱峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图89。计算按式〔4〕计算。A×C×V×2×1000X＝A×A×C×V×2×1000X＝A×m×10000式中:X——2,4-滴残留量,单位为毫克每千克〔mg/kg〕；A2,4-滴(衍生物)峰面积；A2,4-滴(衍生物)峰面积；、0C2,4-滴(衍生物)浓度,单位为微克每毫升〔μg/mL〕；m——取样量，单位为克〔g〕；2——样液稀释倍数；V——样液的定容体积，单位为毫升〔mL〕。11.6周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10％。11.7检测限2,4-0.002mg/kg。1——溶剂峰2——2,4-滴峰3——未知峰82,4-滴标样色谱图1——溶剂峰2——2,4-滴峰3——未知峰92,4-滴色谱图赤霉素残留量的测定原理豆芽中赤霉素经提取后，先经乙酸乙酯液液萃取初步净化，再利用凝胶渗透色谱〔GPC〕使目标化合物与基体干扰物分别，到达分别和净化的目的。用反相高效液相色谱法—DAD检测器进展色谱分析，计算定量。试剂与材料甲醇〔AR〕。丙酮〔AR〕。乙酸乙酯〔AR〕。50％硫酸溶液。(V/V)pH2.550％稀硫酸调整水的pH2.5。无水硫酸钠〔AR〕。冰乙酸〔AR〕。固相萃取小柱：WatersSEP-PAK10mL10mL保持萃取柱润湿状态待用。赤霉素标准储藏液：周密称取赤霉素〔含量≥99.0%〕0.1g〔准确到0.0001g〕，用甲醇溶解100mL。此溶液浓度为每毫升相当于1.00mg本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。仪器与设备本章内容要用常规字体高效液相色谱仪〔配DAD检测器〕。旋转蒸发仪。组织捣碎机。电动振荡器。凝胶渗透色谱仪〔GPC〕。分析步骤试样制备50g〔0.1g〕20mL100mL30min100mL15min，用布氏漏斗抽50mL1000mL30℃水浴上，用旋转蒸发器减压蒸发除去丙酮。剩下的试样水溶液用滤纸过滤，用50mL蒸馏水洗涤烧瓶并通过同一滤器过滤，用20mL50pH2.5±0.2。将250mL150mL315g250mL30℃水浴中旋转蒸发至干。15mL环己烷+乙酸乙脂〔1：1〕(V/V)混合液充分溶解，预备待分析样品溶液10mL，进入渗透色谱13min4.7mL/min6～13min〔GPC〕流302mL0.45μm析。标准溶液系列的配制0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、5.00mL100mL用甲醇稀释定容至刻度。制成浓度依次为0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、500μg/mL色谱条件色谱柱：ZORBAXSB-C18柱：5μm，4.6mm×250mm〔或相当型号色谱柱〕。流淌相：甲醇＋水〔55＋45〕