贫血其他检查

贫血其他检查内容网织红细胞计数红细胞比积及相关数值测定

●

红细胞比积（Hct）●平均红细胞体积（MCV）

●

平均红细胞血红蛋白含量（MCH）

●

平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）溶血性贫血

●

红细胞渗透脆性试验

●酸溶血试验(Hma,stest)

●

抗人球蛋白试验(Coomb,stest)

●尿内含铁血黄素检查(Roustest)

第2页,共76页，2024年2月25日，星期天一、网织红细胞计数

（reticulocytecount）(一)原理

网织红细胞晚幼红细胞

成熟的红细胞,

第3页,共76页，2024年2月25日，星期天网织红细胞

（reticulocytecount）

第4页,共76页，2024年2月25日，星期天(二)方法

活体染色法.近年来还可通过某些血液自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数。

★(三)参考值(活体染色法)成人0.5%~1.5%新生儿2%~6%网织红细胞绝对值(24~84)×109/L

第5页,共76页，2024年2月25日，星期天

★（四）临床意义

直接反应骨髓造血功能

疗效观察的指标

反映骨髓增生或重建情况增高●

溶血性贫血●缺铁性贫血●巨幼细胞性贫血减低

●

再生障碍性贫血第6页,共76页，2024年2月25日，星期天二、红细胞比积

（hemotocrit，HT，Hct）(一)原理

将定量的经双草酸盐抗凝全血灌注于

Wintrobe分血管中，以一定的速度和时间离心沉淀后，读取红细胞层在全血中所占体积的百分比。(二)方法

温氏法

第7页,共76页，2024年2月25日，星期天二、红细胞比积

（三）参考值

成人男性40~50％成人女性37~48％第8页,共76页，2024年2月25日，星期天（四）临床意义增加

■相对：血液浓缩

■绝对：真性红细胞增多症减少各种贫血

■Hct改变与RBC数不一定完全平行

■计算RBC各项平均值才有意义第9页,共76页，2024年2月25日，星期天三、红细胞平均数值计算(一)原理

根据红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞比积，通过公式可分别计算出下列红细胞平均数值，多参数血液自动分析仪可直接获得此类参数。

(二)计算方法及参考值

第10页,共76页，2024年2月25日，星期天平均红细胞体积（MCV：80~100fL）指每个红细胞的平均体积，以飞升(fl)为单位。

Hct（L/L）

MCV=×1015fLRBC（×1012/L）平均红细胞Hb含量（MCH：26~34pg）指每个红细胞内所含有的血红蛋白的平均量，以皮克(pg)为单位。

Hb（g/L）

MCH=pgRBC（×1012/L）第11页,共76页，2024年2月25日，星期天

平均红细胞Hb浓度（MCHC：310~70g/L）指平均每升红细胞中所含血红蛋白浓度，以克/升(g/L)表示。

Hb（g/L）

MCHC=g/L

Hct（L/L）

临床意义

根据MCV、MCH、MCHC测定可对贫血进行形态学分类，并对其鉴别诊断也有一定意义。既：有助于贫血形态学分类选择合理治疗方案第12页,共76页，2024年2月25日，星期天贫血的形态学分类鉴别表

细胞形态学MCVMCHMCHC病因

参考值

80-100fL26-34pg310-370g/L大细胞性贫血↑↑-巨幼细胞性贫血正常细胞性贫血

---急性失血、溶贫再障、白血病小细胞性贫血↓↓-感染、中毒恶性肿瘤小细胞低色素↓↓↓缺铁性贫血慢性失血第13页,共76页，2024年2月25日，星期天四、溶血性贫血的实验室检查第14页,共76页，2024年2月25日，星期天第15页,共76页，2024年2月25日，星期天(一)溶血性贫血的实验诊断步骤HA的诊断一般分为四个步骤：确定有无贫血明确溶血的存在判定溶血部位查明溶血原因★第16页,共76页，2024年2月25日，星期天(一)溶血性贫血的实验诊断步骤1.确定有无贫血若红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比积低于参考值的下限则为贫血。

第17页,共76页，2024年2月25日，星期天2.明确溶血的存在（1）红细胞破坏增加血液中网织红细胞显著增多血浆游离血红蛋白含量增高肝珠蛋白含量减低血清间接胆红素增高尿胆原含量增高

第18页,共76页，2024年2月25日，星期天2.明确溶血的存在（2）骨髓红系细胞高度代偿性增生骨髓有核细胞增生明显活跃,粒红比值明显减低或倒置，红系以中、晚幼红细胞增生为主，原红和早幼红细胞亦增多，可见染色质小体(Howell-jolly小体)、Cabot环及核分裂幼红细胞增多。血涂片中红细胞形态异常，出现嗜多色性红细胞和幼红细胞等。

第19页,共76页，2024年2月25日，星期天骨髓增生程度和粒红比成熟红细胞：有核细胞极度活跃1：1明显活跃10：1活跃20：1减低50：1极度减低200：1粒红比粒细胞各阶段细胞总和与各阶段红细胞总和之比正常3：1第20页,共76页，2024年2月25日，星期天（粒、红比）M:E正常2：1-4：1

1、粒、红比正常：M-E-正常2、M:E↑M↑E-：化脓、粒细胞白血病

M-E-ITPM-E↓：纯红再障

M↑E↑：红白血病

M↓E↓：再障↓3、M:E↓或倒置：M-E↑：各种增生性贫血、巨幼红细胞性贫血、真红；

M↓↓E-：粒细胞缺乏症。第21页,共76页，2024年2月25日，星期天各系统骨髓细胞量和质的改变1、粒系：原粒、早幼粒↑↑、形态改变—急粒早、中、晚幼↑↑、嗜酸↑--慢粒中性中、晚幼、杆状↑WBC中毒变化—感染粒系↓↓--粒缺第22页,共76页，2024年2月25日，星期天2、红系各阶段成比例↑--溶贫、失血贫↑↑伴胞浆发育落后于胞核—缺铁贫↑↑伴巨幼红细胞出现—营养性巨幼红细胞贫血↓↓伴余二系↓↓--再障第23页,共76页，2024年2月25日，星期天3、淋巴系原淋或幼淋↑↑--急淋相对↑、其他系↓↓--再障↑↑--慢淋第24页,共76页，2024年2月25日，星期天4、单核系原单/幼单↑↑--单核细胞型白血病单核C↑--慢性感染（结核）第25页,共76页，2024年2月25日，星期天巨核C系↑--ITP、脾亢↓/---再障第26页,共76页，2024年2月25日，星期天6、浆C、网C浆C系↑--再障、结核浆C系↑↑、形态改变—骨髓瘤、浆细胞性白血病网C↑↑、形态改变—恶网网C↑--感染、溶贫、再障第27页,共76页，2024年2月25日，星期天3.判定溶血部位

血管内溶血血管外溶血

第28页,共76页，2024年2月25日，星期天4.查明溶血的原因HA的原因较复杂一般先做常用的筛选试验，如红细胞形态观察红细胞渗透脆性试验抗人球蛋白试验蔗糖水溶血试验血红蛋白电泳根据筛选试验结果再选择适当的确诊试验,

绝大部分患者的HA原因可以查明。第29页,共76页，2024年2月25日，星期天（二）溶血性贫血的分类遗传性红细胞膜异常红细胞酶异常珠蛋白合成异常获得性机械性理化及生物因素免疫性单核-巨噬系统破坏按病因和发病机制分：第30页,共76页，2024年2月25日，星期天（二）溶血性贫血的分类血管内血管外按溶血的部位分：第31页,共76页，2024年2月25日，星期天按溶血发生的部位分红细胞破坏发生于血循环中—血管内溶血。临床表现明显，伴有血红蛋白血症、血红蛋白尿、含铁血黄素尿；红细胞破坏发生于单核-巨噬细胞系统—血管外溶血。主要发生于脾脏，临床表现一般较轻。第32页,共76页，2024年2月25日，星期天血管内溶血与血管外溶血的鉴别检查项目血管内溶血血管外溶血红细胞形态异常-～+++～+++血浆游离血红蛋白+～+++-～+高铁血红素白蛋白+-尿Rous试验+～++-血红蛋白尿-～+++-红细胞渗透脆性试验-++第33页,共76页，2024年2月25日，星期天(三)溶血性贫血确诊的实验室检查1.显示红细胞破坏增加的依据(1)红细胞寿命缩短、破坏增加的实验红细胞寿命测定红细胞形态改变血浆乳酸脱氢酶测定(2)血浆游离血红蛋白增高的检查血浆游离血红蛋白测定血清珠蛋白测定血浆高铁血红素白蛋白测定血红蛋白尿检验含铁血黄素尿试验(Rous试验)（3）胆红素代谢异常的表现第34页,共76页，2024年2月25日，星期天(1)红细胞寿命缩短、破坏增加的实验红细胞寿命测定：用51Cr标记红细胞测定其半衰期（T1/2）正常25～32天溶贫﹤15天第35页,共76页，2024年2月25日，星期天(1)红细胞寿命缩短、破坏增加的实验红细胞形态改变可见红细胞破坏的征象第36页,共76页，2024年2月25日，星期天(1)红细胞寿命缩短、破坏增加的实验血浆乳酸脱氢酶测定

红细胞破坏乳酸脱氢酶第37页,共76页，2024年2月25日，星期天(三)溶血性贫血确诊的实验室检查(2).血浆游离血红蛋白增高的检查血浆游离血红蛋白测定血清珠蛋白测定血浆高铁血红素白蛋白测定血红蛋白尿检验含铁血黄素尿试验(Rous试验)第38页,共76页，2024年2月25日，星期天血浆游离血红蛋白测定原理：游离血红蛋白中血红素部分有类似过氧化物酶的作用，能使邻甲苯胺氧化显色，与已知血红蛋白浓度的标准液比较而求得其含量。标本采集：用肝素或EDTA抗凝血均可。参考值：<40mg/L。第39页,共76页，2024年2月25日，星期天血浆游离血红蛋白测定临床意义

(1)增高血管内溶血如阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、阵发性寒冷性血红蛋白尿症、冷凝集素综合征、温抗体型自身免疫性溶血性贫血、行军性血红蛋白尿症、微血管病性溶血性贫血等。

(2)血管外溶血正常

如遗传性球形细胞增多症等。

第40页,共76页，2024年2月25日，星期天血清珠蛋白测定

原理：珠蛋白(haptoglobin，Hp)是肝脏合成的一种a2巨球蛋白，能与血红蛋白(Hb)结合成一稳定的Hb-Hp复合物，后者在pH4的酸性条件下，具有过氧化物酶活性，可催化H2O2分解，使愈创木酚氧化显色，其颜色的深浅与Hp含量成正比。血清中Hp的含量是以Hb的结合量来表示的，即以mgHb/L表示。

参考值：200～1900mgHb/L。第41页,共76页，2024年2月25日，星期天血清珠蛋白测定

临床意义（血管内、血管外）各种HAHp明显减低但肝细胞损伤性病变、传染性单核细胞增多症，先天性无Hp血症等Hp亦见降低。感染、创伤、肿瘤、红斑狼疮、类固酵治疗、肝外阻塞性黄疸时可增高。故在此种情况下，如Hp不减低，并不能排除溶血。

第42页,共76页，2024年2月25日，星期天血浆高铁血红素白蛋白测定

原理：当溶血较重使Hp耗尽时，可出现高铁血红素白蛋白，电泳时出现在Hb-Hp区带之前。标本采集：静脉血凝固后分离血清。参考值：正常人为阴性。临床意义：阳性表示严重血管内溶血第43页,共76页，2024年2月25日，星期天血红蛋白尿检验

临床意义：阳性表示血管内溶血第44页,共76页，2024年2月25日，星期天★含铁血黄素尿试验(Rous试验)

原理：尿中含铁血黄素在酸性条件下与亚铁氰化钾形成亚铁氰化铁而呈蓝色。标本采集：将尿液离心后取沉渣染色。参考值：正常人为阴性。第45页,共76页，2024年2月25日，星期天★含铁血黄素尿试验(Rous试验)

临床意义阳性血管内溶血特别是慢性血管内溶血时易出现，并可持续数周。

阴性并不能除外血管内溶血。因溶血初期，肾小管上皮细胞尚未充分将吸收的Hb转变为含铁血黄素，未形成足够大的颗粒(直径>1mm才能在光镜下检出)，含有含铁血黄素的上皮细胞的未完成其衰老脱落的过程等均可呈阴性反应，必要时反复检查或取晨尿、午睡后的尿液进行检查。第46页,共76页，2024年2月25日，星期天（3）胆红素代谢异常的表现血非结合胆红素尿中的尿胆原

尿胆红素（—）第47页,共76页，2024年2月25日，星期天(三)溶血性贫血确诊的实验室检查2.显示红细胞代偿增加的依据(1)外周血网织红细胞明显增高(2)外周血涂片红细胞形态改变(3)增生性贫血骨髓象第48页,共76页，2024年2月25日，星期天(四)溶血性贫血的病因诊断

第49页,共76页，2024年2月25日，星期天溶血性贫血病因红细胞内在缺陷—遗传性溶血：红细胞膜缺陷红细胞酶缺陷珠蛋白异常红细胞外部因素异常：免疫因素（患者产生红细胞抗体）非免疫因素（人工瓣膜置换术、蛇毒、疟原虫）第50页,共76页，2024年2月25日，星期天1.红细胞膜缺陷的检验红细胞膜缺陷主要是指膜成分或膜支架结构异常,导致红细胞表面积与体积比、可塑性及脆性等改变，有的还伴有红细胞形态异常而易于破裂导致溶血性贫血。膜成分异常主要是指脂质和膜支架结构的异常，常见的是收缩蛋白(区带Ⅰ、Ⅱ)、肌动蛋白(区带Ⅴ)及区带Ⅳ-1蛋白的磷酸化或相互结合障碍,不能形成牢固的膜骨骼。针对红细胞膜缺陷常用的筛选试验是测定红细胞在各种实验条件下抗溶解的能力，若通过生化方法直接测定膜成分的异常,则更为准确而特异。第51页,共76页，2024年2月25日，星期天（1）.红细胞渗透脆性试验（2）.温孵育后渗透脆性试验（3）.自身溶血试验及其纠正试验（4）.酸溶血试验（5）.蔗糖水溶血试验★1.红细胞膜缺陷的检验第52页,共76页，2024年2月25日，星期天（1）红细胞渗透脆性试验(red-cellosmoticfragilitytest,ROFT)原理：正常红细胞为双凹圆盘状,在低渗盐水中吸水膨胀的适应性较大(可增加70%的体积而不破裂)。遗传性球形细胞增多症(HS)等红细胞的表面积/体积(S/V)的比值小,对低渗盐水的适应性小(脆性增大)。本试验是测定红细胞在一系列不同浓度低渗氯化钠盐水内开始溶血和完全溶血的氯化钠浓度。标本采集：用肝素抗凝血,也可取静脉血立即测定。第53页,共76页，2024年2月25日，星期天红细胞脆性实验脆性增高开始溶血及完全溶血时氯化钠溶液的浓度均较正常对照提前两管（0.04%）或更高，即开始溶血﹥0.50%,完全溶血﹥0.38%NaCl时为脆性增高，即红细胞对低渗NaCl溶血的抵抗力减低；脆性减低即红细胞对低渗NaCl溶血的抵抗力增高；第54页,共76页，2024年2月25日，星期天参考值：开始溶血4.2~4.6g/LNaCl

完全溶血2.8~3.4g/LNaCl意义

↑：遗传性球形RBC增多症自身免疫性溶血性贫血

↓：低色素性贫血(IDA，地中海贫血)第55页,共76页，2024年2月25日，星期天温孵育渗透脆性试验红细胞孵育过程中，葡萄糖消耗增加，储备的ATP减少→红细胞对阳离子的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀→渗透脆性增加。第56页,共76页，2024年2月25日，星期天（2）温孵育后渗透脆性试验

原理略意义：正常人轻度增加轻症遗传性球形RBC增多症丙酮酸激酶缺陷症第57页,共76页，2024年2月25日，星期天自身溶血试验及纠正试验先天性非球形细胞性溶血性贫血病人，由于红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP以维持红细胞内的钠泵作用。病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48h，使ATP储备减少，钠泵作用减弱导致溶血增强。在孵育过程中分别加入葡萄糖、ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液对照，观察溶血是否被纠正。遗传球：明显纠正Ⅰ型先天型性非球（G-6PD缺陷症）加葡萄糖、ATP—均可纠正Ⅱ型先天型性非球（丙酮酸激酶缺陷症）加ATP—纠正第58页,共76页，2024年2月25日，星期天（3）.自身溶血试验及其纠正试验原理参考值：孵育48h,<4.0%;+葡萄糖orATP<0.6%意义：用于鉴别诊断遗传性球形RBC增多症和先天性非球形细胞性HA第59页,共76页，2024年2月25日，星期天阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关的检测PNH是一种获得性红细胞膜缺陷引起的溶血病，临床以间歇发作的睡眠后血红蛋白尿为特征。Ham-TPNH患者红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血液中经37℃孵育，易溶血。蔗糖溶血试验蔗糖溶液离子浓度低，经孵育可加强补体与红细胞膜的结合—PNH患者红细胞膜上形成小孔—蔗糖水进入红细胞—溶血。第60页,共76页，2024年2月25日，星期天★（4）.酸化溶血试验(Ham’stest)原理:RBC膜在酸性条件下对补体敏感参考值：正常人阴性意义：阵发性睡眠性Hb尿症(PNH)确诊第61页,共76页，2024年2月25日，星期天第62页,共76页，2024年2月25日，星期天（5）蔗糖水溶血试验原理同酸溶血试验参考值：正常人阴性意义：阵发性睡眠性Hb尿症(PNH)筛选第63页,共76页，2024年2月25日，星期天自免溶贫检测AIHA是免疫发生异常，产生抗体或（和）补体，结合在红细胞上，红细胞破坏加速所致的一组溶血性贫血。抗人球蛋白试验为检测温抗体（不完全抗体）的敏感方法，是诊断自免溶贫的重要试验（Coombs).直接：RBC表面结合不完全抗体为致敏RBC.其在盐水中不凝集，加入抗人球蛋白血清后出现凝集—RBC表面有不完全抗体；间接：先用正常RhD阳性的O型RBC吸附血清的不完全抗体，使之致敏，再按直接法操作—凝集—血清中有游离的不完全抗体。第64页,共76页，2024年2月25日，星期天2.自身免疫性溶血性贫血★（1）.抗人球蛋白试验Coombstest原理检测不完全抗体意义：阳性见于新生儿溶血自身免疫性溶血

SLE

类风湿性关节炎恶性淋巴瘤及药物性溶血等第65页,共76页，2024年2月25日，星期天Coombs新生儿溶血病本病是由于孕母和婴儿血型不和引起的溶血病，主要包括ABO和Rh溶血病。患儿的红细胞在母体子宫内被其母的免疫性抗体所致敏——Coombs直接：阳性；其间接试验用于ABO或Rh妊娠免疫性新生儿溶血病，母体血清中不完全抗体的检测。不完全抗体不完全抗体（IgG）无法架接2个邻近的RBC而只能和1个RBC抗原结合，抗人球蛋白抗体是完全抗体，可与多个不完全抗体的Fc段结合→RBC凝集第66页,共76页，2024年2月25日，星期天直接凝集－检测新生儿RBC

间接凝集－检测母亲血清多数为温抗体型(37℃,IgG)

少数为冷抗体型(4℃,IgM)大多数为IgG型，少数IgA,IgM第67页,共76页，2024年2月25日，星期天冷凝集试验冷凝集素是一种可逆性抗体，在低温时可与自身红细胞、“O”型红细胞或与患者同型红细胞发生凝集，当温度升高时，凝集块又消失。参考：效价＜1：40，反应适宜温度为4℃.某些AIHI病人冷凝集素效价很高，可达64000或更高。第68页,共76页，2024年2月25日，星期天冷热双相溶血试验阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）患者血清中有双相溶血素，在0-4℃时，溶血素与红细胞结合，