1.2.3 三 灭菌与无菌操作

药物制剂生产中山火炬职业技术学院健康产业学院－吴旖中山火炬职业技术学院健康产业学院－吴旖灭菌与无菌操作法三灭菌与无菌操作生物医药系引言官方报道的原因：未按批准的工艺参数灭菌!欣弗事件(导入）三灭菌与无菌操作生物医药系主要内容制药卫生的概述（拓展）2灭菌方法与无菌操作3331三灭菌与无菌操作生物医药系一、污染药物的常见微生物沙门氏菌大肠杆菌金色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉菌三灭菌与无菌操作生物医药系黑曲霉菌破伤风杆菌铜绿假单胞菌螨虫破伤风杆菌一、污染药物的常见微生物三灭菌与无菌操作生物医药系二、药物制剂的卫生标准口服药品：

1.不得检出大肠杆菌，含动物药及脏器的药品同时不得检出沙门氏菌；

外用制剂：不得检出绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌；阴道、创伤、溃疡用制剂：不得检出破伤风杆菌。1.致病菌注：活螨、霉变者以不合格论处《中国药典》2010年版附录规定：三灭菌与无菌操作生物医药系二、药物制剂的卫生标准（1）细菌

①固体制剂：细菌数：每1g含细菌数不得过1000个。

②液体制剂：细菌数：每1ml含细菌数不得过100个。（2）霉菌、酵母菌

每1g或1ml含霉菌、酵母菌数不得过100个。2.细菌、霉菌、酵母菌三灭菌与无菌操作生物医药系二、药物制剂的卫生标准（1）口服固体制剂①不含药材原粉：每1g含细菌数不得过1000个，含霉菌、酵母菌数不得过1OO个。②含药材原粉：每1g含细菌数不得过10000个（丸剂不得过30000个）含霉菌数和酵母菌数均不得过100个。

（2）口服液体制剂①不含药材原粉：每1ml含细菌数、霉菌数和酵母菌数均不得过100个。

②含药材原粉：每1ml含细菌数不得过500个、霉菌数和酵母菌数均不得过100个。

（3）含六神曲等发酵成分制剂

细菌：每1g不得过100000个，每1ml不得过1000个。

霉菌、酵母菌：每1g不得过500个、每1ml不得过100个。

2.细菌、霉菌、酵母菌三灭菌与无菌操作生物医药系二、药物制剂的卫生标准（4）局部用药①眼科用药：每1g或1ml含细菌数不得过10个，不得检出霉菌和酵母菌。②阴道、创伤、溃疡用制剂：每1g、1ml或10c㎡含细菌数不得过100个，霉菌、酵母菌数不得过10个。③用于表皮、粘膜不完整的含药材原粉制剂：含细菌数每1g或10c㎡不得过1000个，1ml不得过100个；霉菌、酵母菌数每

1g、1ml或10c㎡不得过100个。④用于表皮、粘膜完整的含药材原粉制剂：含细菌数每1g或10c㎡不得过10000个，1ml不得过100个。⑤直肠给药制剂：含细菌数每1g不得过1000个，1ml不得过100个；酵母菌数均不得过100个。⑥其他局部制剂：每1g、1ml或10c㎡含细菌、霉菌、酵母菌数均不得过100个。2.细菌、霉菌、酵母菌第四节灭菌与无菌操作生物医药系三灭菌与无菌操作生物医药系三、药剂可能被污染的途径1.原料药；2.药用辅料；3.制药设备；4.制药环境空气

5.操作人员；6.包装材料

可能途径

三灭菌与无菌操作生物医药系四、制药环境的基本要求（一）生产厂区的环境（位置的选择）三灭菌与无菌操作生物医药系（二）厂区的合理布局（生产区与非生产区要严格分开）四、制药环境的基本要求三灭菌与无菌操作生物医药系（三）厂房设计和设施装备要求四、制药环境的基本要求三灭菌与无菌操作生物医药系四、制药环境的基本要求三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作1.灭菌与灭菌法

（1）灭菌(sterilization)

：

是指用物理或化学方法将所有致病和非致病的微生物繁殖体和细菌的芽胞全部杀灭或除去。

（2）灭菌法(thetechniquesterilization)：

是指杀灭或除去所有致病和非致病的微生物繁殖体和芽胞的方法或技术。三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作2.无菌与无菌操作法

（1）无菌(sterility)：在任一指定物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。

（2）无菌操作法（aseptictechnique）：在整个操作过程中利用或控制一定条件，使产品避免被微生物污染的一种操作方法或技术。三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作3.防腐和消毒

（1）防腐(antisepsis)：是指用物理或化学方法抑制微生物的生长与繁殖的手段，亦称抑菌。

（2）消毒(disinfection)：是指用物理和化学方法将病原微生物杀灭或除去。三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作二.灭菌法的分类三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作一、物理灭菌法：系指采用加热、干燥、辐射、声波等物理手段达到灭菌目的的方法。┌火焰灭菌法

┌

干热灭菌法┤

│

└空气干热灭菌法

┌

热力灭菌法

┤

├

滤过除菌法

│

┌热压灭菌法

物理灭菌法┼紫外线灭菌法

└

湿热灭菌法┤流通蒸汽灭菌法与煮沸灭菌法

├

微波灭菌法

└低温间歇灭菌法

└

辐射灭菌法

三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（1）干热灭菌法：利用干热空气杀灭微生物或消除热原。

特点：热穿透能力差，微生物的耐热性强，所需灭菌时间长。

灭菌条件：160～170℃120min以上、170～180℃60min以上或250℃45min以上。

适用范围：耐高温但不能用湿热灭菌法的物品，如玻璃制品、金属制品、油脂类、耐高温的固体药品等。

粉针剂用的无菌瓶的干燥就采用干热灭菌法。

1.热灭菌法三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（2）湿热灭菌法：是在饱和蒸气或沸水或

流通蒸气中进行灭菌的方法。

特点：由于蒸气潜热大，穿透力强，容易使蛋白质

变性或凝固，所以灭菌效率比干热灭菌法高。

①热压灭菌：115℃(68.6kPa)，30分；121.5℃(98kPa)，20分；126.5℃(137.2kPa)，15分。

适用范围：凡能耐高压蒸气的药物制剂、玻璃容器、金属容器、瓷器、橡胶塞、膜滤过器等均能采用，尤其适用于大输液。

注意事项：A.必须使用饱和蒸气，B.须将灭菌器内的空气排除，C灭菌时间由全部药液温度真正达到所要求的温度时算起

1.热灭菌法三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（2）湿热灭菌法：②流通蒸气灭菌

：是在常压下100℃流通蒸气加热杀灭微生物的方法，通常灭菌时间为30~60分钟。

③煮沸灭菌：沸水中加热灭菌的方法．通常煮沸30～60分钟。注意事项：不能保证杀灭所有的芽胞，系非可靠的灭菌法，可适用于消毒及不耐高热的制剂的灭菌。

常用于注射器、注射针等器皿的消毒。④低温间歇灭菌：用60～80℃水或流通蒸气加热1小时，将其中的细菌繁殖体杀死，然后在室温中放置24小时。让其中的芽胞发育成为繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复进行3～5次，直至消灭芽胞为止。特点：适用于不耐高温的制剂的灭菌，费时，工效低。

三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（1）辐射灭菌法：以放射性同位素(60Co或137Cs)放射的

或β射线杀菌的方法。

特点：是不升高灭菌产品的温度，穿透性强。但设备费用高。

适用范围：适合于不耐热药物的灭菌，特别适合于很厚的固体药物

原包装。

2.射线灭菌法三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（2）紫外线灭菌法：指用紫外线照射杀灭微生物的方法．一般用于灭菌的紫外线波长是220~290nm，灭菌力最强的波长是254nm。

原理：紫外线作用于核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。特点：穿透力微弱

。

适用范围：物体表面、空气及蒸馏水。

2.射线灭菌法

三灭菌与无菌操作生物医药系物理灭菌法（3）微波灭菌法：频率在300兆赫到300千兆赫之间的电磁波

。

特点：微波能穿透到介质的深部，通常可使介质表里一致地加热。

适用范围：适用于水性药液、水性注射液的灭菌、含水的固体药物

。

除菌滤器：一般选用孔径0.22

m微孔薄膜滤器，G6号垂熔玻璃漏斗。

适用范围：主要适用于对热不稳定的药物溶液、气体、水等的灭菌。

2.射线灭菌法

3.过滤除菌法

三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作二、化学灭菌法：指用化学药品来杀灭微生物的方法，同时不应损害制品的质量。

二.常用的灭菌方法

（1）气体灭菌法

常用气体：①环氧乙烷；②甲醛等。

（2）药液灭菌法

常用杀菌剂：①醇类：75%的乙醇等；②酚类；③表面活性剂类：新洁尔灭、洁尔灭；④氧化剂：过氧乙酸、过氧化氢等。

三灭菌与无菌操作生物医药系五灭菌方法和无菌操作

用无菌操作法制备的注射液，一般需加入适量抑菌剂；按无菌操作法制备的产品，一般不再灭菌。三、无菌操作层流洁净工作台

定义

整个过程在无菌条件

条件

在无菌操作室或无菌柜内一切用具、材料以及环境，均需灭菌。采用层流洁净工作台适用物质

不耐热的药物注射剂、眼用溶液、眼用软膏或皮试液等。三灭菌与无菌操作生物医药系小结概述中药制剂的卫生标准

了解药剂污染的主要环节及预防措施

熟悉GMP车间洁净级别划分及适应范围

熟悉灭菌方法与无菌操作灭菌、消毒、防腐的概念

掌握常用的物理灭菌法的操作及适应范围

掌握常用的化学灭菌方法

熟悉无菌操作

了解三灭菌与无菌操作生物医药系作业1、归纳常用的物理灭菌方法及各种方法的特点三灭菌与无菌操