仪器分析高效液相色谱法

关于仪器分析高效液相色谱法2024/4/25第2页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25凝胶柱上加上中药提取物第3页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25洗脱的效果第4页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25HPLC基本组成示意图HPLC主要由色谱柱、加压泵和检测器组成第5页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25色谱柱色谱柱是液相分离的核心部件第6页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25输液泵输液泵分单元等度泵和多元梯度泵第7页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25检测器对没有紫外吸收的物质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器第8页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25进样器—手动进样器Rheodyne7725i几乎成了所有液相色谱仪的进样器第9页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25进样器—手动进样器—六通阀第10页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25进样器自动进样器可由软件完全控制Waters717Agilent第11页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25色谱工作站色谱工作站就是HPLC的控制系统外企的在数万元左右，国产的几千元。第12页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25色谱工作站工作站的两大功能1.控制仪器2.处理数据第13页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪器常见种类

highperformanceliquidchromatograph第14页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪（2）第15页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪（3）安捷伦Agilent1100第16页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪（4）第17页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪（5）上海伍丰科学仪器有限公司第18页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色谱仪（6）戴安公司Ultimate3000第19页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相色谱法的特点

特点：高压、高效、高速现代药物分析最有用的工具和方法第20页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相色谱法在药典中的使用

1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版数量8561212791327比例%0.53.25.110.441.3第21页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相图谱各成分依次流出色谱柱，从进样到出峰的时间称为保留时间第22页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25定性方法定性:确定成分归属，依据与对照品相比较时，相同的保留时间第23页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法外标法内标法归一法第24页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——外标法第25页,共42页，2024年2月25日，星期天内标法对照溶液：精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。供试品溶液：再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图。

第26页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——内标法对照品供试品内标物第27页,共42页，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——归一法第28页,共42页，2024年2月25日，星期天29（1）吸附色谱法（2）正相色谱法（3）反相色谱法①一般反相色谱法②反相离子对色谱③反相离子抑制色谱主要分离方法第29页,共42页，2024年2月25日，星期天流动相的选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)第30页,共42页，2024年2月25日，星期天31流动相的制备供试品和对照品溶液配制（各两份）系统适用性试验操作前的准备第31页,共42页，2024年2月25日，星期天32理论塔板数（n）：分离度（R）：系统适用性实验：

重复性

对照溶液连续进样5次

相对标准偏差应不大于2.0%第32页,共42页，2024年2月25日，星期天33拖尾因子（T）：

w0.05h为0.05峰高处的峰宽；

为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，T应在0.95～1.05之间第33页,共42页，2024年2月25日，星期天实例：高效液相色谱外标法测定头孢拉定含量

取含头孢拉定为94.1%和头孢氨苄为2.3%的对照品35.35mg溶解定容为50ml，取10μl注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为13842558，头孢氨苄峰面积为354934；另称取头孢拉定供试品35.88mg，溶解定容为50ml，取10μl注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为14158286，头孢氨苄峰面积为472368；按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量。第34页,共42页，2024年2月25日，星期天第35页,共42页，2024年2月25日，星期天第36页,共42页，2024年2月25日，星期天内标液

取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液

精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算供试液

精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul

注入GC仪，测定，计算维生素E含量测定对照液供试液第37页,共42页，2024年2月25日，星期天第38页,共42页，2024年2月25日，星期天按《中国药典》2015版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1μl注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736，内标物峰面积为238787，求维生素E的理论塔板数、维生素E与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E供试品22.68mg，内标物28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887，内标物峰面积为644911，计算供试品中维生素E的含量。

物质Rt/minW(1/2h)/minW/min对照品8.880.2