实验四血凝和血凝抑制试验

关于实验四血凝和血凝抑制试验一、实验目的

掌握血凝和血凝抑制试验的原理，以及使用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结果判定方法。第2页,共17页，2024年2月25日，星期天二、实验原理

（一）血凝试验（HA）有些病毒能够促使某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞发生凝集，这就是红细胞凝集现象，称做血凝试验。病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为病毒鉴定的一个指标。第3页,共17页，2024年2月25日，星期天HA试验的原理图第4页,共17页，2024年2月25日，星期天病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较密切，不经特殊化学方法处理不能分开。例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒，病毒游离下来后，红细胞不能再次被凝集。病毒凝集红细胞可以分为3种类型第5页,共17页，2024年2月25日，星期天病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开，血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等，凝集红细胞的条件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择，同时还要掌握反应的pH和温度等。第6页,共17页，2024年2月25日，星期天（二）血凝抑制试验（HI）当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称做红细胞凝集抑制试验，也叫血凝抑制试验。第7页,共17页，2024年2月25日，星期天HI试验的原理图第8页,共17页，2024年2月25日，星期天三、试验材料鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。0.85%生理盐水。被检血清，采自被检鸡的血清。第9页,共17页，2024年2月25日，星期天四、操作步骤

（一）血凝试验（HA）在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。在第1孔中加入50μl病毒抗原，反复吸取混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为细胞对照。第10页,共17页，2024年2月25日，星期天将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震荡，37℃静置30min后观察结果。结果观察（血凝价是1：？）。第11页,共17页，2024年2月25日，星期天1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC

以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为血凝价的终点，即一个血凝单位。第12页,共17页，2024年2月25日，星期天（二）血凝抑制试验（HI）在血凝板的1~12孔加入50μl生理盐水，最后一孔加100μl。第1孔加入待检血清50μl，混匀后吸50μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃50μl。从1~11孔，每孔加稀释好的50μl4个血凝单位的病毒悬液。如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26第13页,共17页，2024年2月25日，星期天将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震荡，在37℃静置30min后观察结果。结果判定（血凝抑制价是1：？，被检血清为阴/阳性）。第14页,共17页，2024年2月25日，星期天HA试验HI试验第15页,共17页，2024年2月25日，星