流式细胞术讲义

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流式细胞术的血液学应用

北京协和医院血液科汪玄

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流式细胞术的概念

流式细胞术(Flowcytometry;FCM)是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪(Flowcytometer)为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速(每秒计数可达1000~10000个细胞)、准确、多参数的定量分析或分选(纯度可达99%以上),已成为现代骨髓血细胞学讨论中最先进的分析技术。

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流式细胞术与PNH的诊断

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原理

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异样的血细胞膜糖化肌醇磷脂-锚(GPI-anchor)连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性加强而产生溶血性贫血。

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样本要求：EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送检

收费：CD55/CD59

CD59

280元140元

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临床诊断值CD59阳性的红细胞大于等于95%CD59阳性的中性粒细胞大于90%

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流式细胞术与白血病免疫分型

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免疫分型原理

流式细胞术(FCM)白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体(McAb)检测相应抗原，经过多参数分析，测定白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在10000~50000个细胞之间，而且快速、特异、精确、重复性好，能区分细胞的系列，划分其分化、发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制讨论等有重要价值。

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样本要求：肝素抗凝骨髓3ml(或外周血)每天上午送检收费：

70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗)

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干/祖细胞标识：

CD34、CA133髓系标识：

CD33、CD13、CD11b、CD15、MPOB细胞相关标识：

CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、CyIg、SmIgT细胞相关标识：

CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8

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常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义管号1234567891011

三色标记McAbMouseIgG1/MouseIgG1/CD45PerCPCD5FITC/CD7PE/CD45PerCPCD10FITC/CD19PE/CD45PerCPAnti-HLA-DAFITC/CD13PE/CD45PerCPCD34FITC/CD38PE/CD45PerCPCD14FITC/CD33PE/CD45PerCPCD20FITC/CD22PE/CD45PerCPCD8FITC/CD4PE/CD45PerCPCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCPCD36FITC/GP-APE/CD45PerCPCD61FITC/CD41PE/CD45PerCP

染色细胞及目的阴性对比及设门T淋巴系细胞、部分早期髓系细胞B淋巴系细胞髓系细胞、B淋巴系细胞、部分T淋巴系细胞反映细胞分化程度髓系细胞和单核细胞B淋巴系细胞及其分化程度T淋巴系细胞及其分化程度T

淋巴系细胞、NK细胞幼红细胞巨核细胞

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B-ALLCD10+

T-ALL-

AML-

CD19CD22c/mCD3c/mCD5CD7

++---

--+++

-----

CD13CD33

--

--

++

MPO

-

-

+

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AML免疫分型FAB/CD34CD33HLA-CD13DRCD14CD15CD11b其它

M1M2M3M4M5M6M7

+---

++++++

++-+++

+++-

---++--

++

-----CD71GP-ACD41CD61CD38CD9

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T-ALL免疫分型CD2CD3CD5早期T-ALL前T-ALL++

CD7+

CD4-

CD8-

TdT+

+

+

+

+

+

+

+

T-ALL

+

+

+

+

+

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B-ALL免疫分型HLADR

CD19CD10CD20

CD22

cIgM

mIgM

TdT

早B前体ALL一般型前B-ALLB-ALL

+++

+++

-+

--+

---

--+

---

++-

+

+

-

+

+

+

-

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FCM-IM诊断混合型白血病

流式细胞术测定发觉的双系列或多系列表达的结果较多，但双表型白血病不肯定就是混合型，理由如下：混合型白血病诊断：应依据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列(双克隆)?双表型(单克隆)?系列转换型？需考虑到抗原/单抗的多向性：CD4、CD7、CD10、CD38、CD56正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标识特性逐步规律化：白血病细胞的分化发育却丢失严格的规律性(lineageinfidelity)与免疫表型的阶段性(differentiationasynchrony),因而涌现异样抗原表达，或过高或过低或不表达或交叉系列表达。

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设门方案

采纳CD45/SSC设门法(优于FSC/SSC设门法)CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞单核细胞成熟粒细胞原/幼细胞，而红细胞不表达。SSC在成熟粒细胞单核细胞原/幼细胞淋巴细胞红细胞。

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临床原/幼细胞群定量根据新的WHO分型标准，对初发病者，

原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。

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白血病免疫分型病例分析病例1梁丽琴女性24岁异样表型中:

CD10+.CD34+.CD22+.CD38+.CD19+.HLA-DR+

结论：表型符合Pre-B-ALL

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白血病免疫分型病例分析病例2王丙午男性68岁异样表型中:

CD33+.CD13+.CD15+.CD11b+.HLA-DR+.CD34+.CD19+

结论：