探究活动：培养基的配置

3/4探究活动：培养基的配置1、学生用活动器材：材料：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、NaOH、清水用具：天平、牛角勺、量筒、滴管、玻璃棒、250ml烧杯、50ml烧杯、三角架、石棉网、酒精灯、火柴、PH试纸、锥形瓶、平板培养皿、试管、棉塞、线绳、报纸、电炉子、高压灭菌锅2、牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏0.3g蛋白胨1gNaCL0.5g琼脂2gpH7.0～7.5水100ml3、配制培养基的过程称量→溶化→调节pH值→过滤→分装→塞棉塞和包扎→灭菌。①称量：按照培养基配方，准确称取各成分放入大烧杯中。技能：a.天平的使用：左物右码b.一般药品的称量：各垫一张大小相同的纸c.腐蚀性、粘稠药品的称量：用烧杯等玻璃器皿称量，先称空容器的质量②溶化：将培养基各种成分按配方称量好后，分别放入烧杯中，加入100ml水，在酒精灯上加热搅拌至完全溶化后再放琼脂。技能：a.搅拌：玻璃棒按一个方向顺序搅拌，不能碰触烧杯内壁。b.有些原料不易溶解，如牛肉膏等，可先在小烧杯中加水少许，加热溶解后倒入大烧杯中，但总水量要控制在100ml。c.琼脂的溶化：其余成分全部溶化后再放琼脂。在琼脂溶化过程中要不断搅拌，并控制火力，防止培养基溢出或烧焦。d.培养基完全溶化后要补足水分。③调酸碱度（pH值）：先用pH试纸进行测量。如果偏酸或偏碱，可用10％HCI和10％NaOH调整pH值至所需范围。技能：a.PH值的测定：用洁净干燥的玻璃棒蘸取少量，在试纸一端点一下既可。b.调PH值时，要逐滴滴入NaOH溶液，边滴边搅拌，并随时用PH试纸测量。④过滤：培养基中如有些成分没完全溶解，常需过滤。常用滤纸、纱布（叠成6层）或纱布间加脱脂棉花过滤。加琼脂的培养基要趁热过滤。⑤分装：固体培养基都要趁热分装，各容器的量如下：锥形瓶：一般不超过1/2；试管：一般装管高的1/5或1/4；倒平板一般是用时再倒。技能：分装时应避免培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞而引起污染。⑥塞棉塞和包扎：分装后试管口及瓶口都要塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，其形状、大小、松紧与管口和瓶口要吻合，棉塞1/3露于管外，2/3塞进管内。棉塞的制作和塞入的正确方法见图4-7。棉塞塞好后，外包厚纸（牛皮纸一层或用旧报纸二层），用绳捆扎。包扎的作用是避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基的水分散失或污染杂菌。⑦灭菌：经过分装、包扎的培养基应立即进行灭菌。一般采用高压蒸汽灭菌时，在15磅/英寸2蒸汽压、121℃技能：a.打开灭菌锅盖，向锅内加入适量水。b.将制备好的培养基和需要灭菌的其它用品，一起放入高压灭菌锅中（装有培养基和水的注意要立着放稳）。不要放得太挤，以免影响蒸汽流通。c.盖好锅盖，采用对角形式均匀拧紧盖上的螺旋，使锅密闭。打开放气阀，开始加热。d.当锅内产生蒸汽后，放气阀开始有热气排出，自开始产生热气后约3分钟（锅内冷空气已排尽），再关闭放气阀。此时锅内温度随蒸汽压力增高而上升。待压力上升到15磅/英寸2，温度达到120～121℃e.停止加热，待压力下降至零时，打开放气阀，排出残留蒸汽，打开锅盖，取出灭菌物品。注意：灭菌过程中，一定注意排净锅内的冷空气，冷空气排不净时，锅内温度达不到灭菌温度，会影响灭菌效果；操作时，必须严格按操作规程操作，否则容易发生意外事故，应在教师指导下操作。⑧倒平板和摆斜面：制作斜面培养基和平板培养基须趁培养基未凝固时进行。4、制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5-1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。5、制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10