猪囊尾蚴血清抗体胶体金斑点检测方法

猪囊尾蚴血清抗体胶体金斑点检测方法(资料性附录)猪囊尾蚴病概述猪囊尾蚴病(Cysticereosiscellulosae)俗称猪囊虫病，是由猪带绦虫(Taeniasolium)幼虫寄生在横纹肌、心肌、脑、眼等部位引起的一种人兽共患寄生虫病。目前，该病还广泛存在于世界各地，在我国东北、华北、西南各地流行较为广泛，不仅严重影响着养猪业的发展，而且威胁着人类身体健康。猪囊尼蚴大小为5mm×(6mm～10mm),形如米粒，为白色半透明的囊状物，囊内充满透明液体。囊壁分两层，外层为表皮层，表皮层有许多微毛，被覆一层碳水化合物和糖蛋白复合物；内层为间质层，间质层由肌肉层和疏松结筛组织组成，结缔组织疏松层内有丰富的网状小管，囊虫有一向内翻卷收缩的头节，受胆汁刺激后可翻出，形态结构与成虫的相似。猪囊尾蚴主要寄生于人和猪.其唯一终末宿主是人。感染猪囊尾蚴的病猪一般无明显症状，极严重感染的猪有营养不良、生长受阻、贫血和肌肉水肿等症状。由于病猪不同部位的肌肉水肿，或两肩显著外展，或臀部异常肥胖宽阔.或头部呈大胖脸形或前胸，后躯及四肢异常肥大，体中部窄细，整个猪体从背面观呈哑铃状或葫芦形，前面看呈狮子头形。病猪走路前肢僵硬，后肢不灵活，左右摇摆，不爱活动，反应迟钝。某些器官严重感染时可出现相应的症状，如呼吸困难，声音嘶哑与吞咽困难，视力消失及一些神经症状，有时产生急性脑炎而突然死亡。感染猪囊尾蚴的活猪生前诊断比较困难。只有当舌部浅表寄生时，触诊可发现结节，但阴性者不能排除感染。肉品卫生检验时，如在肌肉中，特别是在心肌、咬肌，舌肌及四肢肌肉中发现囊尾蚴，即可确诊，尤以前臂外侧肌肉群的检出率最高。该病的检疫方法有舌检查法和免疫学检查法。前者仅适用于舌上寄生的病猪，后者包括皮内变态反应、炭粒凝集试验、间接红细胞凝集试验、补体结合反应、琼脂扩散试验、免疫电泳和酶联免疫吸附试验等。5B.5.1.3猪囊尾蚴的收集人工感染猪囊虫3个月将猪屠宰，在肩胛外侧肌、股部内侧肌、深腰肌、心肌、咬肌、舌肌和脑等部位收集囊尾蚴。囊尾蚴椭圆形半透明的囊状，其内为透明的囊液，囊壁上向内翻转凹陷处有一个乳白色头节，大小为4mm×5mm。B.5.1.4猪囊尾蚴全虫抗原的分离与纯化将收集的囊虫，剪碎，磨细，于4℃以0.5mmel/L醋液浸提2d~3d.乙醚脱脂，先以0.86mmol/L氟化钠盐析，再以40%饱和度的硫酸铵盐析，最后以80%饱和度的硫酸铵盐析，沉淀物以pH为7.2的0.01mmol/L.PBS溶解，并对其透析，经测定，置-20℃保存，备用。B.5.2胶体金的制备B.5.2.1取经过洁净化处理的250ml.三角烧瓶，加人79ml.双蒸水和1ml.1%氯金酸，充分混匀后，将装有混合液的三角烧瓶放入水溶中预热至60℃~70℃。B.5.2.2取经过洁净化处理的25mL小烧杯，加入4ml.1%柠橡酸钠.70pL.单宁酸和70μL将混合完成的柠檬酸钠和单宁酸的烧杯置水浴锅中预热至60℃~70℃。将混合完成的柠檬酸钠和单宁酸加入到加有氟金酸的250mL.三角烧瓶中，迅速混匀。先用微波炉加热，再用电炉加热的方法，使混合完成的胶体金溶液保持沸腾10min。在沸腾的过程中，要对液体不断进行搅拌，使受热均匀，防止部分加热过度。B.5.2.710min后，使其自然冷却后，将其保存在密闭容器内，置4℃保存。得到直径为10nm的胶体金颗粒。B.5.3胶体金标记抗原的制备B.5.3.1取两个1.5ml试管，分别加人1ml.的胶体金。B.5.3.2加入适量25mmol/LK,CO把胶体金溶液的pH调整标记最住pH值(约7.5)。B.5.3.3每管接比例加入标记最佳抗原蛋白蛋白量(约为52mg/mL),混合均匀后，室温下放置B.5.3.4分别加入10pL.2%PEG20000,室温放置5tmin.B.5.3.56000r/min~10000r/min离心20min,使大部分探针形成松散沉淀，轻轻吸除上清液。B.5.3.6用20μl.BL.溶液重悬浮松散的