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中,按4.4.2.2条中所述的方法,迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2s~4s内完全排入稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。4.4.3稀释样品匀液4.4.3.1用10mL灭菌吸管准确吸取1;10的样品匀液10ml.放入装有90ml.PT稀释液的200ml.灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法,迅速振摇,制成1:100的样品液。4.4.3.2分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品液如10-3、10-4、10-5……4.4.4酶处理的食品需要酶处理的食品取1:10PT样品匀液10mL加酶原液1mL,在灭菌试管中混合放入35℃土1℃水浴中处理20min~30min,取出过滤。对每一份试样,选用适宜的三个连续稀释度的样液,每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上,以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上,用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10ml~20mL无菌蒸馏水于滤器中,加入PT样品匀液10mL,打开真空泵,抽吸过滤,再加入10mL~15mL无菌蒸馏水,抽吸过滤,关闭真空泵。用无菌镊子将滤膜取出。4.6培养以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上,滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板,平放入36℃±1℃培养箱内培养48h。4.7.1培养后,对每个TSFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌落进行计数。25~250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0℃~4℃,但不得超过24h。4.7.2如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内,先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)(g(mL))样品中平板菌数。4.7.3如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)(g(mL))样品中平板菌落数。4.7.4当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数。计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*),表明该数系从菌落数在25~250这一范国之外的平板估计所得。4.7.5当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数。得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*)(同4.7.4)。4.7.6如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*)(同4.7.4)。4.7.7同一稀释度的两个平板中,一个有25~250个菌落,另一
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