输血科常用实验及工作体会

前言

血型判定、交叉配血、抗体筛选试验是输血科当前最惯用试验，也是每个输血工作者应该熟练掌握试验，依据工作经验我们认为在试验过程中一些细节轻易被忽略，值得注意，现将工作中一些体会与大家一起探讨交流，请大家提出宝贵意见。输血科常用实验及工作体会第1页ABO血型判定1、判定原理：依据红细胞上有没有A抗原或(和)B抗原及血清中有无对应抗体将血型分为A型、B型、AB型和O型四种

正定型（细胞定型）

反定型（血清定型）2、方法：试管法、微柱凝胶法、玻片法均为凝集试验输血科常用实验及工作体会第2页ABO血型判定（试管法）1、试验材料：正定试剂：抗-A、抗-B（是否质控？质控要求？统计？）抗-AB

确认弱A、B抗原，与弱A、B抗原亲和力强,会产生较强反应。抗-H

用于检验亚型及孟买型。抗-A1

用于A亚型检测。输血科常用实验及工作体会第3页ABO血型判定（试管法）反定试剂A1细胞（为何？）、B细胞，自制细胞质控

O细胞检验是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型。本身对照用于确认正反定型结果有效性,排除本身抗体对定型干扰(如冷凝集等)。A2细胞用于A亚型判定（有些A亚型产生抗-A1抗体而不产生抗A2）。输血科常用实验及工作体会第4页ABO血型判定（试管法）2、试验方法：正定：1滴2~5%被检者红细胞+1~2滴标准血清混匀，3400转15秒（转速选择）反定：2滴受检者血清+1滴标准红细胞混匀离心输血科常用实验及工作体会第5页ABO血型判定（试管法）3、结果判定：摇动力度，细胞扣边缘情况，弱凝集判断（亚型尤其主要）正定预期结果3+~4+，假如出现弱凝集应该考虑是抗原减弱还是亚型，不能轻易错过。血型判定并统计正反不一致思索与处理？关键在于认识发觉问题输血科常用实验及工作体会第6页ABO血型判定（试管法）4、正反不一致原因分析试验人员技术操作错误红细胞标本相关问题血清标本相关问题输血科常用实验及工作体会第7页ABO血型判定（试管法）技术操作错误试剂浓度与配比，普通问题不大，不过百分比不适当可能漏检亚型忘记加试剂，试剂工作中有可能出现结果判定，尤其对溶血结果认识，假如是血清标本可能碰到，56度破坏补体验证统计错误，实际工作中对于错误汇报占很大百分比标本错误输血科常用实验及工作体会第8页ABO血型判定（试管法）红细胞问题：ABO亚型！使正定凝集较弱，也是发觉亚型关键所在白血病或其它恶性疾病使患者红细胞A、B抗原减弱！！患者近期输入了ABO不一样型红细胞，或ABO不一样型骨髓移植，可能出现混合视野。红细胞取得性或遗传性异常，如取得性B抗原、T/Tn多凝集红细胞。一些疾病（如腹腔癌）造成血浆中存在大量型物质，中和抗-A或抗-B抗体，引发正定型为假阴性或弱阳性。患者血清中高效价本身冷凝集素使红细胞发生凝集！！输血科常用实验及工作体会第9页ABO血型判定（试管法）血清标本相关问题新生儿抗体阴性或很弱、老年人抗体减弱！！白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂患者、先天丙种球蛋白缺乏患者、免疫缺点患者抗体减弱！！ABO不一样型骨髓移植患者。使用血浆或凝固不完全血清会形成很小纤维蛋白凝集红细胞凝块！！患者血清中有不规则抗体或本身冷凝集素！！一些疾病（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金淋巴瘤等）造成球蛋白水平增高，引发缗钱状凝集；纤维蛋白原水平增高，会引发缗钱状凝集；血浆增容剂（葡聚糖、PVP）也会引发缗钱状凝集造成假阳性结果。输血科常用实验及工作体会第10页ABO血型判定（试管法）5、正反不符处理程序：患者年纪患者病史患者近期输血史患者近期用药史患者是否进行了骨髓移植患者以前血型家系调查处理细胞、血清、改变试验条件增加试验（洗涤细胞、改变百分比、反应温度、吸收放散、血型物质测定）输血科常用实验及工作体会第11页ABO血型判定（试管法）常见问题处理ABO亚型正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、本身对照吸收放散唾液型物质检测有条件者可作家系调查输血科常用实验及工作体会第12页ABO血型判定（试管法）A、B抗原减弱延长孵育时间、4℃孵育酶处理红细胞吸收放散唾液型物质检测既往血型调查输血科常用实验及工作体会第13页ABO血型判定（试管法）抗体减弱延长孵育时间、4℃孵育加大血清用量（很实用)既往血型调查酶处理试剂红细胞输血科常用实验及工作体会第14页ABO血型判定（试管法）冷本身抗体将血清和红细胞分别在37孵育后再混合用37℃温盐水洗涤红细胞、45℃热放散3分钟巯基试剂(DTT)处理红细胞本身吸收去除血清中本身冷抗体输血科常用实验及工作体会第15页ABO血型判定（试管法）室温反应同种抗体用谱细胞做抗体判定选择没有对应抗原A、B细胞做反定型输血科常用实验及工作体会第16页ABO血型判定（微柱法）1、原理：是生物化学凝胶过滤技术和免疫学抗原抗体反应相结合产物，经过调整凝胶浓度来控制凝胶间隙大小。使其间隙只能允许游离RBC经过，从而使游离RBC与聚集RBC分离。假如经过离心RBC沉积在凝胶管底部，则表明RBC未发生凝聚凝集，是阴性反应，若RBC聚集在凝胶带上部，则表明RBC发生凝集，呈阳性反应。其本质仍是凝集试验（凝胶可能不一样，长春为葡聚糖。）基本概念：特异性胶、中性胶、抗人球蛋白试剂胶输血科常用实验及工作体会第17页ABO血型判定（微柱法）2、试验材料：比较单一，都是商品化，定量加样，注意细胞浓度0.8%3、操作：正定反定（加样次序）4、结果判定：按说明，凝集强度判断，注意混合视野判定，弱凝集判定5、注意事项：细胞浓度，试剂一定室温平衡，最好室温反应15分钟再离心以增强弱反强度（卫生部第1批质控出现问题，有2个标本反定正确率60%）输血科常用实验及工作体会第18页ABO血型判定（微柱法）6、假阳性反应可见于：

（1）未完全除去纤维蛋白原不完全血清标本，残余纤维蛋白原在凝胶中成为纤维蛋白，妨碍红细胞沉淀而浮于胶中或胶表面。（我们收到卫生部2、3批质控标本有此现象）（２）被检标本染菌也使红细胞浮于胶中或胶表面。

（3）被检红细胞破碎，常管底及近底部一侧，而不是在管底尖部。此为离心时微柱管离心力方向和该微管轴向方向不一致，本应为阴性结果沉淀位置偏离而呈似弱阳性是因为红细胞陈旧，此时即使应该是阴性结果，但破碎红细胞膜沉于胶中或胶面呈弱阳性。

（4）试验室温度低时，因凝胶颗粒活动性降低，单个细胞穿过时困难，轻易出现假阳性结果。

输血科常用实验及工作体会第19页ABO血型判定（微柱法）（5）镰刀形红细胞贫血病人在做血型配血时易出现假阳性：

正常红细胞有一定变形性，能够经过小于其直径凝胶间隙，而镰形红细胞贫血病人红细胞变形能力降低，刚性增大，不能透过凝胶间隙，故出现假阳性。（6）严重感染病人易出现假阳性：

病人血清或血浆中白细胞过多，堵塞了凝胶间隙，从而影响了红细胞沉降，造成假阳性。（曾碰到一例）

输血科常用实验及工作体会第20页ABO血型判定（微柱法）7、假阴性反应：

（1）抗体过少、弱。

（2）抗原、抗体百分比不适当。

注意：不是一个试验方法能够检测出全部抗原抗体反应。输血科常用实验及工作体会第21页ABO血型判定总结注意弱反应（尤其是正定，普通应该很强）发觉正反不一致，不能轻易错过，慎用假阳性解释，可重复试验有问题做好统计，处理方案，不停总结不一样试验方法结合，试管与微柱各有优缺点发觉问题是关键，因为每个医院情况不一样，大部分医院试剂不全，不能准确判断其亚型，不过应该具备发觉亚型能力.输血科常用实验及工作体会第22页RH血型判定1、原理：依据是否含有D抗原区分Rh阴阳性2、试剂：IgM;IgG+IgM3、操作及结果解释试剂选择及阴性确认问题！！试剂选择：输血科能够选择IgM试剂Rh阴性确认：输血科与血站对阴性标本处理不一样，输血科对阴性标本无须再深入确认，以防弱D或部分D患者输入Rh阳性血；血站必须对RH阴性标本确认，以防弱D过部分D血液输给Rh阴性患者。输血科常用实验及工作体会第23页交叉配血惯用方法盐水：发觉IgM抗体凝聚胺、微柱凝胶、酶法：发觉IgG型不规则抗体输血科常用实验及工作体会第24页交叉配血（凝聚胺）原理：（略）操作：（是否质控？统计？）试剂用量:假凝集消除液不能轻易多加，可能会造成假阴性反应时间：加凝聚胺试剂后不可马上离心，应使其充分反应观察时间：一分钟之内观察结果影响原因：抗凝剂影响（反定凝集较差可能受到抗凝剂影响，能够多加凝聚胺试剂凝集很好）、细胞浓度不可太浓输血科常用实验及工作体会第25页交叉配血（微柱凝胶）原理：属于经典抗人球蛋白试验操作：50微升0.8%红细胞+25微升血清或血浆（依据厂家说明）结果判断：不能错过弱凝集，假如有怀疑能够重复试验，注意：标本最好抗凝、离心以消除纤维蛋白带来干扰输血科常用实验及工作体会第26页交叉配血（微柱凝胶）凝聚胺与微柱凝胶法两种方法差异：微柱法相对敏感，但不是万能，有些抗体可能凝聚胺更敏感（如Rh抗体），实际工作极难发觉此现象，可能与工作人员熟练程度相关，不论任何一个方法配血不合均不能发血。输血科常用实验及工作体会第27页抗体筛选（微柱法）操作及结果判断（略）抗体筛选阳性结果处理：最好作抗体判定，有些稀有抗体配血成功率极低能够寻求帮助，普通医院可能无此条件用微柱法和凝聚胺两种方法同时配血或者用微柱凝胶法配血，绝对不能够单纯用凝聚胺配血（方法差异可能漏检）输血科常用实验及工作体会第28页问题讨论：1、微柱法抗体筛选弱阳性，遇配血不合标本是否也应为弱阳性？（剂量效应以及红细胞新鲜度影响）2、微柱法抗体筛选阳性，选择3袋微柱法配血均相合是否说明抗体筛选为假阳性？3、微柱法抗体筛选阳性，是否可用凝聚胺法直接配血选择相合血液？输血科常用实验及工作体会第29页发觉B(A)血型1例试管法正定AB，A抗原弱于B抗原，不过结果显著微柱法正反定型，正反定型相符为B型，抗A抗体很强与正常抗A无差异，怀疑初检血型错误试管法正反定型复检：正定AB，反定B型，怀疑特殊血型或标本问题保险起见重抽标本，结果相同怀疑A亚型B，产生抗A（以上试验我科完成）省血液中心送检，汇报A2B输血科常用实验及工作体会第30页发觉B(A)血型1例我科随即进行以下试验：父母血型判定：父亲：O母亲：与女儿血型表现一致，初步判为cisAB依据资料普通cisAB为A强B弱，产生抗B，而此例A弱B强产生抗A，与B(A)血型表现一致，高度怀疑B(A)无法确认，送上海血液中心进行血清血及分子生物学确认输血科常用实验及工作体会第31页上海血液中心判定结果ABO正定抗-A抗B抗A1人源抗A人源抗B2+4+W-1+4+W说明确实存在A、B抗原ABO反定：A1细胞B细胞O细胞A2细胞（6滴）

3+S--1+W说明确实存在抗-A，且与A1、A2细胞同时凝集抗-H：O细胞B细胞患者细胞

2+S1+W2+说明抗H增强输血科常用实验及工作体会第32页上海血液中心判定结果结论：患者存在AB抗原，且A弱B强；血清中存在抗A，同时和A1、A2细胞凝集；抗-H增强，符合B(A)特点判定为：B（A）血型为了深入证实进行基因测序结论为640碱基变异，A被G取代为B（A）*04型输血科常用实验及工作体会第33页B(A)血型血清学特点B(A)血型血清学特点：同时存在AB抗原，A弱B强普通判定为A亚型B，不过存