疟原虫形态及镜检技术

关于疟原虫形态及镜检技术一、疟原虫形态及分期1、疟原虫构造三要素：核、胞浆、疟色素核：正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状胞浆：被染成浅蓝色或深蓝色，随着虫体发育，胞浆逐渐增多疟色素：由未被利用的血红蛋白分解成正铁血红素颗粒蓄积在原浆内，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。核疟色素胞浆第2页,共35页，2024年2月25日，星期天2、分期：环状体、大滋养体、裂殖体、配子体☻红外期裂殖子侵入红细胞内，初期似戒指状，红色的核点，兰色环状的胞浆。称为环状体即小滋养体。☻环状体发育长大，胞浆可伸出不规则的伪足，以吞噬血红蛋白，此为大滋养体。第3页,共35页，2024年2月25日，星期天☻大滋养体继续发育，其核与胞浆进行分裂，形成裂殖体。原虫的不同裂殖体中裂殖子的数目也不一样，成熟后裂殖子数一般间日疟为12—24个，恶性疟为18—36个。☻成熟的裂殖体破裂，裂殖子逸出，一部分被吞噬细胞吞噬，一部分再侵入正常红细胞开始新一轮的红内期发育，经过数次裂体增殖后，部分侵入红细胞的裂殖子不再进行核分裂，而逐渐发育成雌雄配子体。第4页,共35页，2024年2月25日，星期天二、厚薄血膜中疟原虫的主要形态特征薄血膜：疟原虫寄生于红细胞中，结构清晰，形态典型，一般用于鉴别虫种。厚血膜：红细胞被溶解，虫体皱缩，形态发生较大变化，但只要掌握疟原虫的核，胞浆，疟色素三大基本构造也是不难鉴别的，一般用于定性。第5页,共35页，2024年2月25日，星期天三、薄血膜中间日疟和恶性疟各期疟原虫形态鉴别第6页,共35页，2024年2月25日，星期天间日疟环状体恶性疟环状体虫体约占红细胞1/3，环较粗；核1个，较少见2个核及一个红细胞内寄生2个环状体。虫体约为红细胞的1/6，环纤细；核1-2个，一个红细胞内寄生两个环状体较为常见，虫体常趋边。第7页,共35页，2024年2月25日，星期天间日疟大滋养体恶性疟大滋养体虫体不规则，较大，阿米巴样，常含空泡，疟色素细小，黄褐色，散在分布。寄生的红细胞胀大，变浅。虫体较小，圆形，空泡不显著，疟色素细小结成团块，呈黑褐色。寄生的红细胞正常或略缩小。第8页,共35页，2024年2月25日，星期天恶性疟未成熟裂殖体间日疟未成熟裂殖体较大，核2个以上，圆形或不规则，空泡消失，疟色素黄褐色，分布不均较小，核2个以上，疟色素黑褐色团块状第9页,共35页，2024年2月25日，星期天间日疟成熟裂殖体恶性疟成熟裂殖体大于正常红细胞，裂殖子12~24个，排列不规则，疟色素黄褐色，常集于一侧。小于正常红细胞，裂殖子8~32个，排列不规则，疟色素黑褐色呈团块状。第10页,共35页，2024年2月25日，星期天间日疟雌（大）配子体间日疟雄（小）配子体☻如何区分间日疟雌雄配子体：雌：核较小，致密，常偏一侧，胞浆深蓝雄：核较大，疏松，常位中央，胞浆浅蓝第11页,共35页，2024年2月25日，星期天恶性疟雌（大）配子体恶性疟雄（小）配子体☻如何区分间日疟雌雄配子体：雌：两端尖，核小，致密，深红，胞浆深蓝雄：两端圆，核大，疏松，浅红，胞浆浅蓝第12页,共35页，2024年2月25日，星期天间日疟晚期大滋养体与雌配子体的区别大小：不超过被寄生红细胞的3/4核：较小，不规则胞质：边缘不规则，多有空泡疟色素：颗粒少且细，分布不均匀大滋养体雌配子体大小：几乎充满被寄生的红细胞核：较大且致密，周围有不染色带胞质：边缘清楚，不含空泡疟色素：颗粒多且粗，均与分布第13页,共35页，2024年2月25日，星期天四、厚血膜中间日疟和恶性疟各期疟原虫形态鉴别

厚血膜由于用血量多，涂布面积小，红细胞重叠且干燥慢，致使虫体皱缩，空泡消失，胞浆变形，各期疟原虫的体积都有所缩小，其中环状体和大滋养体的形态会产生较大变化，难于辨认，而裂殖体和配子体形态与薄血膜中相比无明显变化。第14页,共35页，2024年2月25日，星期天（一）厚血膜中环状体形态间日疟原虫环较大，胞浆较厚，常呈“！”或“；”状恶性疟原虫环纤细，常呈“：”、飞鸟状、“v”状和断环状等第15页,共35页，2024年2月25日，星期天

厚血膜中间日疟大滋养体胞浆可皱缩断裂成几个块状，大小不一，核位于胞浆之中或外边，疟色素分布不均，有些仅见胞浆和疟色素而核看不清。（二）厚血膜中滋养体、裂殖体及配子体形态

厚血膜中间日疟裂殖体、配子体以及恶性疟配子体除虫体略缩小而着色较深外，形态与薄血膜中相似。

由于恶性疟的滋养体和裂殖体是在内脏毛细血管中发育，故在外周血涂片中较难见到。第16页,共35页，2024年2月25日，星期天厚血膜中间日疟原虫第17页,共35页，2024年2月25日，星期天厚血膜中恶性疟原虫环状体、配子体第18页,共35页，2024年2月25日，星期天五、疟原虫与其它物体的鉴别（一）白细胞残骸

白细胞破裂后散出的颗粒，易被误认为是环状体的核，但看不到胞浆；白细胞残骸常为蓝色，与疟原虫胞浆相似，有时与其它红点和血小板巧合在一起，常被误认为是疟原虫。鉴别时如果形同大滋养体，可根据有无疟色素来鉴别；如果形同环状体，可根据虫体大小，折光是否均匀、核与胞浆是否在同一平面上，其它视野内有无疟原虫等仔细分析判断。第19页,共35页，2024年2月25日，星期天(二）灰尘和染色液的色素沉着

灰尘和染色液的色素沉着在血膜的表面上时，往往会被误认为是疟色素，可根据其颗粒的形状、大小、色泽以及有无核和胞浆等结构来鉴别，也可转动显微镜，看其是否在同一水平面上。第20页,共35页，2024年2月25日，星期天（三）细菌

细菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成红色小点，与疟原虫的核相似，最易混淆。球菌形体较大，边缘光滑，且与红细胞不在同一平面上。（四）水中原虫

水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养体相似，但无疟色素，且空泡多如网眼。第21页,共35页，2024年2月25日，星期天（一）镜检的重要性

疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，虽然现在分子生物学、血清学技术迅猛发展，但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。六、镜检技术第22页,共35页，2024年2月25日，星期天（二）血片的制作1、厚、薄血膜的形状与位置一张玻片上同时制作厚薄血膜。将玻片划分为六等分，第一、二格供记录姓名、编号或贴标签之用。厚血膜位于第三格中央（直径约0.8~1cm），薄血膜则从第四格前缘至第六格中部（长度约2.5cm）。如下图所示。第23页,共35页，2024年2月25日，星期天2、采血

采血部位为无名指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟采血。消毒取血部位皮肤后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，以一次性采血针迅速刺入采血部位，不宜过深或过浅，用右手中指轻轻挤出1~2滴血，滴于玻片上以备涂制厚薄血膜。第24页,共35页，2024年2月25日，星期天3、涂制血膜（1）厚血膜血量约4~5ul，用推片的左下角由里向外一个方向旋转几圈，涂成边缘光滑之圆形，直径约0.8~1cm左右。厚血膜的厚度以一个油镜视野可以看到5~10个白细胞为佳。（2）薄血膜血量约1~1.5ul，用推片的下缘置载玻片的中央处，当血液在推片和载玻片之间向两侧扩展至2cm宽时，使两玻片保持25°~35°角，从右向左迅速推成舌状，长约2.5cm。薄血膜的厚度要以红细胞之间相互接触而不相互重叠为佳（直观上指透过玻片能清晰看到报纸上的字）第25页,共35页，2024年2月25日，星期天（三）固定

薄血膜固定：待薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醛平铺于薄血膜上，起固定薄血膜的作用。☻注意不可固定厚血膜。第26页,共35页，2024年2月25日，星期天（四）染色

染色方法有吉氏染色法和瑞氏染色法两种，因吉氏染色法染色效果稳定，保存时间长，一般采用吉氏染色法。

（1）快染：配置10%-20%左右浓度，染色时间短，一般为15分钟左右。但染色效果不稳定。

（2）慢染：配置5%浓度，染色30分钟~40分钟，染色效果稳定，可保存较长时间。(加水8ML加染液2ML混合)第27页,共35页，2024年2月25日，星期天影响染色效果的因素血片染色好坏除了与玻片的清洁度、血片制作质量和染色技术等有关外，还受以下因素影响：（1）染剂、溶剂的质量：染料、甲醇和甘油必须用分析纯，且在配置时使用的器具要干净且无水分。（2）染液的新旧：染液存放时间越久，染色力越强。新配置的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱，因此，通常在染液配置1~2周后才开始使用，盛装染液的瓶子要加塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。第28页,共35页，2024年2月25日，星期天（3）染液稀释后使用时间：吉氏染液的主要成分是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，这三者能在酒精溶液中溶解，但再水溶液中伊红遇到美蓝和天青会产生沉淀。因此，稀释液要现染现配，且在半小时内染色力最强。（4）染色时间：染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。第29页,共35页，2024年2月25日，星期天☻染液浓度过低着色慢而浅，常偏酸，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆着色较差。☻染液浓度高着色快而深，常偏碱，红细胞被染成蓝紫色，不易于观察。☻染液浓度适中，红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞和疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色，白细胞的核呈紫蓝色，疟原虫的核呈红色。

（4）染液的稀释浓度：第30页,共35页，2024年2月25日，星期天吉氏染色血片外观偏酸标准偏碱第31页,共35页，2024年2月25日，星期天

染色后不要将玻片上残余染液直接迅速倒掉，应将玻片连同玻片上的染液一起平放入水中后，将玻片向下倾斜后轻轻左右摆动漂洗。这样可以有效的避免染色素颗粒沾污血膜。（五）冲洗第32页,共35页，2024年2月25日，星期天（六）镜检1、血膜上滴加镜油，查找疟原虫目镜用5x或10x，物镜须用油镜（100x）。2、观察血膜的方法：镜检时从血膜的一端开始，自上而下，自左而右，逐个视野顺序查看。镜检疟原虫一般是查厚血膜，薄血膜作为疟原虫的分类定种。3、结果报告：分阳性和阴性。阳性者至少要查见一个典型疟原虫（需鉴别虫种）方可确定；以查完整个厚血膜或至少检查200个视野未见疟原虫者判为阴性。第3