金樱子总有机酸的超声提取工艺研究

金樱子总有机酸的超声提取工艺研究【摘要】目的：研究金樱子总有机酸的最佳超声提取工艺。方法：采用超声提取法，以总有机酸提取率为指标，考察超声功率、超声时间、乙醇体积分数三个因素，并利用正交试验法优化得到最佳提取工艺。结果：金樱子总有机酸的平均加样回收率为100.58%，RSD为2.42%；最佳超声提取工艺为超声功率为450W、超声时间60min、乙醇体积分数50%，在此条件下金樱子总有机酸平均提取率为0.76%。结论：正交试验法优化得到的金樱子总有机酸最佳超声提取工艺稳定，可行。【关键词】金樱子；总有机酸；超声提取法；正交试验法；提取工艺

StudyonUltrasonicExtractionTechnologyofTotalOrganicAcidsfromRosaLaevigata[Abstract]Objective:TostudytheoptimalultrasonicextractiontechnologyoftotalorganicacidsfromRosalaevigata.Methods:Theextractionrateoftotalorganicacidswastakenastheindexbyultrasonicextractionmethod.Theultrasonicpower,ultrasonictimeandethanolvolumefractionwereinvestigated,andtheoptimalextractionprocesswasobtainedbyorthogonaltest.Results:Theaveragerecoveryoftotalorganicacidswas100.58%,RSDwere2.42%.Theoptimalextractionconditionswereultrasonicpowerof450W,ultrasonictimeof60minandethanolvolumefractionof50%.Undertheseconditions,theaverageextractionrateoftotalorganicacidswas0.76%.Conclusion:TheoptimalultrasonicextractiontechnologyoftotalorganicacidsfromRosalaevigataisstableandfeasible.[Keywords]RosalaevigataTotalorganicacidUltrasonicextractionOrthogonaltestmethodExtractiontechnology目录TOC\o"1-3"\h\u1前言 前言金樱子是蔷薇科植物金樱子的干燥成熟果实，《雷公炮炙论》对金樱子的记载，是众多文献记载里面最早的一个。金樱子在不同的文献记载中有着许多不同的别称，如在《蜀本草》中记载，五代后蜀时期人们称为“\o"中药：刺榆"刺榆子”；在宋代的《开宝本草》中称为“刺\o"中药汇集：梨子"梨子”；在极具岭南特色的地方本草书籍《生草药性备要》中称为“糖莺子”，等等。我国中部地区、华南地区、华东地区等都有药用植物金樱子的分布，其生长环境多为荒山多石的地方，正是金樱子分布地域广，而不同地区的叫法又各不相同，导致其别名很多，但细究会发现众多古籍都有对这味药的记载。金樱子功效有固崩止带，涩肠止泻，固精缩尿等，主治崩漏带下，遗尿尿频，遗精滑精，久泻久痢REF_Ref19329\r\h[1]。在现代的研究报告中发现，金樱子主要化学成分包含黄酮类、苯丙素类、有机酸类以及多糖类、鞣质类等化合物。它的药理作用十分广泛，不仅具有收敛止泻的作用、而且能增强及调节免疫机能、还能抗氧化、降血脂、抗炎抗菌抗病毒，对神经、肝脏、肾脏也有保护作用REF_Ref19485\r\h[2]。有机酸类化合物是中药中的一类重要活性成分，但在过去的研究中，有机酸类物质并不受科研人员的重视，有关于有机酸类的课题和文献较少，专家和科学技术人员们更多偏向于研究黄酮类、萜类、生物碱类等活性成分，正是随着天然药物学和药理学这些新兴学科的设立和发展，较为小众化的有机酸类化合物及其药理活性才受到关注，并越发得到重视和研究，发掘它的作用功效和药理作用机制以及研究其临床综合应用等。报道中特别常见的包括没食子酸、绿原酸、熊果酸、齐墩果酸、枸橼酸等等REF_Ref19528\r\h[3]。随着深入研究，有机酸诸多潜在的药理作用被挖掘，例如，阿魏酸具有对抗血小板聚集的功效；琥珀酸、水杨酸、丁香酸等有助于冠心病的防治；三萜类有机酸则被发现具有拮抗疱疹病毒的活性REF_Ref19580\r\h[4]；有的熊果酸还是潜在的抗炎和抗关节炎成分REF_Ref19613\r\h[5]。所以，有机酸的研究是大势所趋，而有机酸的提取是首要工作，鉴于蔷薇科植物金樱子的果实酸味较重，且目前对金樱子总有机酸提取工艺的研究少之又少，因此可以对此展开深入的探究。随着时代的发展，提取有机酸的方法技术愈发先进。传统的方法有煎煮、渗漉、回流提取、水蒸汽蒸馏法等等。虽然传统溶剂萃取技术具有介质成本低、设备简单、易于工业化生产等优点，但存在耗时长、药材量消耗大、耗能多、劳动强度较大、收率不高、长时间高温下会损坏热敏元件和残留有害物质等诸多不足的地方。现如今，高新提取技术也在不断的发展和创新，超声波提取技术、超临界流体萃取技术、微波萃取技术、酶解技术、联用技术、半仿生提取技术等各有优势REF_Ref19668\r\h[6]。例如，植物细胞存在细胞壁，细胞内有效成分被包裹于植物细胞壁内，乙醇很难渗透使之脱离溶解出来，而超声提取法中，超声波具有超强的穿透力，在超声波高速和强烈振动的作用下，大量的金樱子肉细胞的细胞壁破裂，加快了提取溶剂渗入药材细胞内部的速率，有效成分充分溶解于提取溶剂中，极大地增强了中药材的提取效果REF_Ref19724\r\h[7]，除此之外，超声提取一般在常温左右下进行，避免了有效成分的化学结构被高温破坏。但是在提取不同药物的特定有效成分时，并不是说使用高新提取技术就一定比传统的提取工艺要好，在实际生产中需要根据每种有机酸独特的理化性质来选择合适的提取工艺。例如，超声波提取技术与传统技术相比确实能加快提取效率，但超声波会助推一些氧化还原反应向正方向进行，也能降解和解聚一些大分子化合物，或形成更复杂的化合物，影响我们特定成分的提取率。因此，在采用超声提取技术时，应探究超声功率、提取溶剂、提取时间等因素相互影响后的最优提取条件，致力于将所需有效成分提取率提升至最高。通过查阅文献可知，测定中药材中总有机酸的方法有很多，如直接电位法测定提取物的pH值、电位滴定法REF_Ref19825\r\h[8，REF_Ref19831\r\h9]、紫外光谱法REF_Ref19933\r\h[10，REF_Ref19939\r\h11]、近红外光谱法REF_Ref20044\r\h[12]等。而电位滴定法准确度较高、操作相对便捷，受到科研和技术人员的青睐，是应用相对较多的一种。虽然酸碱滴定法也有被用来测定中药材总有机酸的含量，但多数的中药提取物溶液的颜色较深，难以通过观察颜色的变化来确定滴定终点，这会对滴定终点的准确性有所影响甚至无法得出实验结果。相比之下，选择利用电动势的变化来判定滴定终点的电位滴定法测定中药材总有机酸的含量，可以弥补酸碱滴定法的不足，用此方法来测定金樱子总有机酸的含量更为可靠REF_Ref20089\r\h[13]。本实验基于蔷薇科植物的果实类药材金樱子含有多种有机酸成分，且药用植物金樱子分布广泛，获取中药材原料的途径便捷容易，以此为对象开展有机酸提取工作，具有应用价值和可行意义。通过采用超声提取法，以金樱子总有机酸提取率为指标，进行单因素分析，并利用正交试验法优化得到金樱子总有机酸最佳超声提取工艺。2材料与仪器2.1材料金樱子药材（批号：201101301、220700981，产地：广东，生产厂家：康美药业股份有限公司），枸橼酸对照品（批号：200107-190301，纯度：99%，生产厂家：江苏永健医药科技有限公司），其余试剂见表1。表SEQ表\*ARABIC1主要试剂名称规格生产厂家氢氧化钠标准溶液0.1002mol/L广州臻萃质检技术服务有限公司磷酸盐标准缓冲溶液PH=6.86广检（广州）检测科技有限公司邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液PH=4.00广检（广州）检测科技有限公司四硼酸钠标准缓冲溶液PH=9.18广检（广州）检测科技有限公司95%乙醇分析纯广东广式试剂科技有限公司2.2仪器表SEQ表\*ARABIC2主要实验仪器设备仪器名称型号生产厂家数控超声波清洗器KH-500DE昆山禾创超声仪器有限公司酸度计PHS-3C上海佑科仪器仪表有限公司万分之一电子天平BSA224S赛多利斯科学仪器公司六两装高速万能粉碎机QE-300浙江屹立工贸有限公司超薄磁力搅拌器labdiscwhite德国IKA集团

3方法与结果3.1对照品溶液制备精密称取枸橼酸对照品25mg，放入50mL容量瓶，以70%乙醇定容，得到枸橼酸对照品溶液（0.5mg/mL），并将其放在4℃的环境下冷藏备用。3.2供试品溶液制备精密称取金樱子粉末2.0g，放入100mL具塞锥形瓶，加入70%乙醇100mL，设置超声功率为400W，温度为40℃，提取时间为30min，过滤得到供试品溶液。3.3电位滴定法的测定精密称取金樱子粉末2.0g，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液30mL置于100mL烧杯中，加入10mL的蒸馏水，再加入搅拌子，用0.01002mol/L浓度的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图。图中D2pH/D2V等于0的点所对应的体积即为滴定终点所消耗NaOH的体积。3.4电位滴定的可行性研究3.4.1枸橼酸对照品溶液突跃范围试验精密吸取10mL枸橼酸对照品溶液，置于100mL烧杯，加入蒸馏水20mL，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线，见图1。结果显示，枸橼酸对照品溶液二阶导数曲线突跃明显，D2pH/D2V等于0的点便是滴定终点，实际消耗7.75mLNaOH滴定液，与理论所需消耗NaOH体积（7.7969mL）的相对偏差为0.43%。图SEQ图\*ARABIC1枸橼酸对照品溶液的D2pH/D2V滴定曲线3.4.2金樱子供试品溶液突跃范围试验精密称取金樱子粉末2.0g，放入100mL具塞锥形瓶，加入70%乙醇100mL，按“3.2”项下方法制备金樱子供试品溶液。精密吸取供试品溶液30mL放入100mL烧杯中，加入10mL蒸馏水，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，见图2。结果显示，金樱子供试品溶液二阶导数曲线突跃明显，D2pH/D2V等于0的点便是滴定终点，滴定终点对应消耗NaOH滴定液5.25mL。图SEQ图\*ARABIC2金樱子供试品溶液的D2pH/D2v滴定曲线3.5方法学考察3.5.1精密度试验精密吸取6份枸橼酸对照品溶液10mL，分别放入100mL烧杯中，各加入20mL蒸馏水，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算RSD为1.91%，见表3。结果表明该仪器精密度良好。表SEQ表\*ARABIC3精密度试验结果序号消耗NaOH体积（mL）平均值（mL）RSD（%）17.507.731.9127.6037.7547.9057.8067.803.5.2稳定性试验精密称取金樱子粉末4.0g，放入250mL具塞锥形瓶，加入70%乙醇200mL，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液各30mL，分别放入100mL烧杯中，加入蒸馏水10mL，于0、2、4、6、8、10h按照“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算RSD为2.00%，见表4。结果表明该金樱子供试品溶液在10h内基本稳定。表SEQ表\*ARABIC4稳定性试验结果序号放置时长（h）消耗NaOH体积（mL）平均值（mL）RSD（%）0225.20345.25465.25585.106105.003.5.3重复性试验精密称取金樱子粉末（批号：201101301）2.0g，平行6份，置于100mL具塞锥形瓶，按“3.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液30mL，放入100mL烧杯中，加入蒸馏水10mL，按照“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算总有机酸平均提取率为0.55%，RSD为2.18%，见表5。结果表明该方法重复性良好。表SEQ表\*ARABIC5重复性试验结果序号消耗NaOH体积（mL）总有机酸提取率（%）平均提取率（%）RSD（%）15.250.560.552.1825.200.5535.100.5445.250.5655.300.5765.000.533.5.4加样回收率试验精密称取6份已知总有机酸含量的金樱子粉末（批号：201101301）1.0g，按1:1加入枸橼酸对照品，置于100mL具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50mL，按“3.2”项方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液50mL，放入100mL烧杯中，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算平均加样回收率为100.58%，RSD为2.42%，见表6。结果表明该方法准确度良好。表SEQ表\*ARABIC6加样回收率试验结果序号总有机酸含量（mg）对照品加入量（mg）实际测定值（mg）加样回收率（%）平均加样回收率（%）RSD（%）15.526.0011.59101.16100.582.4225.526.0011.68102.6635.526.0011.59101.1645.526.0011.5099.6655.526.0011.68102.6665.526.0011.2996.163.6单因素试验3.6.1乙醇体积分数精密称取5份金樱子粉末各2.0g，置于100mL具塞锥形瓶，分别加入不同体积分数的乙醇100mL（50%，60%，70%，80%，90%），摇匀，放入数控超声波清洗器，调节超声功率400W，初始温度40℃，提取30min，过滤得到供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液30mL，置于100mL烧杯，加入10mL蒸馏水，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算总有机酸提取率，绘制乙醇体积分数与金樱子总有机酸提取率关系曲线图。结果见图3。图SEQ图\*ARABIC3乙醇体积分数对金樱子总有机酸提取率的影响由图3可见，乙醇体积分数在50%-70%范围内，金樱子总有机酸提取率随乙醇体积分数的增大而升高。乙醇体积分数为70%时，金樱子总有机酸提取率达到最大值，随后，金樱子总有机酸得率随乙醇体积分数的增大而降低。究其原因，乙醇作为超声提取的溶剂介质，随着乙醇体积分数的增大，有机酸更容易溶出扩散，体积分数上升到一定程度后，用过高浓度的乙醇对有机酸进行提取，会导致部分有机酸提取不完全，如酒石酸、苹果酸、柠檬酸在高浓度乙醇中的溶解度都比在低浓度乙醇中的溶解度低REF_Ref20220\r\h[14]，又或者微量元素在不同浓度的溶剂中的溶解度不同，影响着有机组分的溶解。因此，作为提取溶剂介质的乙醇溶液浓度过高是不可行的。3.6.2超声功率精密称取6份金樱子粉末各2.0g，置于100mL具塞锥形瓶，加入70%乙醇100mL，放入数控超声波清洗器，设置初始温度40℃，分别调节超声功率250、300、350、400、450、500W，超声提取30min，过滤得到供试品溶液，分别精密吸取30mL供试品溶液，置于100mL烧杯中，加入10mL蒸馏水，按“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算总有机酸提取率，绘制超声功率与金樱子总有机酸提取率关系曲线图。结果见图4。图SEQ图\*ARABIC4超声功率对金樱子总有机酸提取率的影响由图4可见，超声功率在250W-450W的范围内，金樱子总有机酸提取率随超声功率的增大而升高。超声功率在450W时，金樱子总有机酸提取率达到最大值，随后，总有机酸提取率随超声功率的增大而降低。一般来说，超声仪的功率越大，提取得越完全；增大超声功率，提取率上升到一定程度后反而开始降低，可能因为功率过大使空化作用过强，空化作用过大破坏了有机酸的分子结构，使溶液中的总有机酸含量降低。3.6.3超声时间精密称取5份金樱子肉粉末2.0g，置于100mL具塞锥形瓶，加入70%乙醇100mL，置于数控超声波清洗器中，设置超声功率400W，初始温度40℃，分别超声提取20、40、60、80、100min，过滤得到供试品溶液，分别精密吸取30mL供试品溶液，置于100mL烧杯，加入10mL的蒸馏水，摇匀，按照“3.3”项下的方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算总有机酸提取率，绘制超声时间与金樱子总有机酸得率关系曲线图。结果见图5。图SEQ图\*ARABIC5超声时间对金樱子总有机酸提取率的影响由图5可知，超声时间在20-40min时，金樱子总有机酸提取率随超声时间的增加而升高。超声时间在40min时，金樱子总有机酸提取率达到最大值，随后，总有机酸提取率随超声时间的增加而降低。分析其原因可能为超声作用时间过长，使其他杂质的提取率加大，如一些脂溶性物质成分的析出，使有机酸在溶液中的溶解度降低，从而影响了有机酸的提取工作。超声时间的延长，还会使温度升高，温度的变化可能会导致其他成分的溶解度加大而影响有机酸的提取。3.7正交试验优化在单因素试验的结果基础上，设计3因素3水平的正交试验（见表7），按照L9(3表SEQ表\*ARABIC7三因素三水平水平因素超声时间A（min）超声功率B（W）乙醇体积分数C（%）120400502404507036050090表SEQ表\*ARABIC8正交试验优化结果试验号超声时间A超声功率B乙醇体积分数C总有机酸提取率（%）11110.6621220.6031330.4842120.4952230.5662310.6173130.5483210.7393320.52K11.741.692.00—K21.661.891.61—K31.791.611.58—k10.580.560.67—k20.550.630.54—k30.600.540.53—R0.050.090.14—优化水平A3B2C1—表SEQ表\*ARABIC9三因素方差分析结果方差来源自由度平方和S均方VFP超声时间20.0030.0014.9370.168超声功率20.0120.00619.7280.048*乙醇体积分数20.0360.01860.3100.016*根据正交试验优化的结果（见表8）可得，因素A（超声时间）的k3为最大值，k3=0.60；因素B（超声功率）的k2为最大值，k2=0.63；因素C（乙醇体积分数）的k1为最大值，k1=0.67。因此，可以得到金樱子总有机酸的超声提取最佳工艺为A3B2C1，即采用50%乙醇、超声功率为450W、超声提取金樱子药材粉末60min。根据方差分析的结果（见表9）可得，因素A（p=0.168）>因素B（p=0.048）>因素C（p=0.016），可以认为影响金樱子总有机酸提取率的程度由小到大依次为超声时间、超声功率、乙醇体积分数。由于因素A的P值>0.5，认为对提取效果无显著性影响，而因素B和因素C的P值<0.5，可以认为该因素对提取效果有显著性影响，即超声功率和乙醇体积分数对金樱子总有机酸超声提取效果有着显著性影响。3.8最佳工艺验证精密称取3份金樱子粉末（批号：220700981）各1.0g，置于100mL具塞锥形瓶，加入50%乙醇50mL，放入数控超声波清洗器，调节超声功率450W，初始温度40℃，提取60min，过滤得到供试品溶液，分别精密吸取30mL供试品溶液，置于100mL烧杯，加入10mL蒸馏水，按照“3.3”项下方法用0.01002mol/L的NaOH溶液进行电位滴定，绘制D2pH/D2V对V的二阶导数曲线图，测得消耗NaOH溶液体积，计算总有机酸平均提取率为0.76%，RSD为1.89%。结果见表10。表SEQ表\*ARABIC10最佳工艺试验结果序号称样量（g）消耗NaOH体积（mL）总有机酸提取率（%）平均提取率（%）RSD（%）11.00016.950.740.761.8921.00037.200.7731.00027.150.76

4讨论4.1提取溶剂的选择提取工艺研究中，提取溶剂的选择十分重要。大部分低分子质量的天然有机酸，易溶于水，而难溶或不溶于石油醚。而提取植物中的有机酸通常采用水、甲醇、乙醇等溶剂或混合溶剂作为提取溶剂。经过查阅文献发现，采用水做提取溶剂不合适，陆敏REF_Ref20409\r\h[15]等利用高效液相色谱法测定常见水果中的有机酸，发现只用水作为提取溶剂时，制备好的提取液中苹果酸和柠檬酸的含量下降速度很快，在提取后2h、4h和24h上机测得柠檬酸的含量分别降低了19.3%、22.7%和96.3%，在2h、4h的苹果酸含量分别降低27.4%、31.1%甚至在提取后24h，苹果酸已基本检测不出。有鉴于此，只用水作为提取溶剂时，有机酸极其不稳定，所以选用醇溶液做提取溶剂，但基于甲醇溶液存在毒性，因此优先选择了乙醇溶液进行金樱子总有机酸的提取。4.2NaOH溶液浓度的选择预实验中，在摸索枸橼酸对照品溶液的突跃范围时，首先使用了浓度为0.01002mol/L的氢氧化钠溶液进行电位滴定，为了使枸橼酸对照品溶液所消耗的NaOH溶液体积尽量在6-8mL，通过计算枸橼酸对照品质量的范围应需在3.84-5.12mg，因此精密吸取制备好的0.5mg/mL的枸橼酸对照品溶液10mL进行电位滴定，测得所消耗的NaOH体积在7-8mL，符合要求，因此确定用浓度为0.01002mol/L的氢氧化钠溶液作为枸橼酸对照品溶液的滴定液。在金樱子供试品溶液的突跃范围试验时，对金樱子总有机酸的含量是未知的，所以第一次吸取制备好的金樱子供试品溶液10mL，使用了浓度为0.1002mol/L的NaOH溶液对供试品溶液进行滴定，突跃点不明显；此后尝试把NaOH溶液的浓度降低，通过使用0.05mol/L、0.025mol/L和0.01mol/L的NaOH溶液对金樱子供试品溶液进行滴定，发现使用0.05mol/L的NaOH溶液作为滴定液，突跃点依旧不明显，而0.025mol/L的氢氧化钠溶液滴定时突跃点靠前，不利于滴定曲线的绘制，最后决定使用0.01mol/L的氢氧化钠溶液作为金樱子供试品溶液的滴定液，除此之外为了使消耗的NaOH体积增大、绘制的滴定曲线美观，把金樱子供试品溶液取样量由10mL变为30mL。4.3超声温度的控制在预实验中发现即便设定超声仪温度为40℃，但温度会在43-45℃范围内浮动，可能是由于提取过程中会放热，以及超声功率过高或者超声时间过长的影响，温度随之有所变化。虽然变化程度不大，但也是难以控制在一个稳定值，因此没有选择温度作为单因素分析试验的考察对象，对于温度不稳定现象采取设定相同水位线的办法，尽量控制每次的初始水位线相等，使得提取过程中温度即便变化也是在一定范围内升高。而最终选择设置超声仪初始温度统一为40℃，因为超声仪的温度必须超过室温才会开始运作，而且温度的选择尽可能低，需要给予提取过程中温度升高的空间，过高的温度会破坏某些有机酸结构，降低有机酸提取效果，所以温度选择设置为仅比室温高一点。4.4实验操作的注意事项过滤的效果直接影响着滴定曲线结果的观察。而以下因素均有可能影响着过滤操作，一是中药材金樱子在预处理时，金樱子粉碎成粉末这一步骤中，要注意粉末的粗细程度，使用粉碎机时要留意操作时间不宜过长，次数不宜过多；而且金樱子粉末需要进行过筛，使用40目和80目的筛网除去过粗和过细的药材粉末，防止过细的粉末透过滤纸流进滤液以及过粗的粉末影响总有机酸提取不完全；二是超声时间过长或者超声功率过大，会使药材细胞破裂程度过大，造成溶液中残渣多而不易过滤，滤液中所含杂质成分多，会影响滴定结果的观察；三是选用定量分析滤纸，定量分析滤纸在制造过程中经过特殊处理，除去了纤维中的大部分杂质，从而减少了滤纸在过滤时给待测液带来的杂质影响。在预实验中，第一天制备的对照品溶液有剩余，未存放至低温环境冷藏，第二天继续用此对照品溶液再一次进行枸橼酸对照品溶液突跃范围试验，两次小试验之间的时间间隔相差超过了12小时，结果发现精密吸取相同体积的枸橼酸对照品溶液所测得的含量与前一天相比，第二天的含量降低了，且与理论值偏差较大。所以枸橼酸对照品溶液需放置较长时间时，均应低温环境冷藏。电位滴定法解决了酸碱滴定法中药材提取液的滴定终点颜色变化不明显或者溶液浑浊不易观察的问题，但本次实验使用的是非全自动电位滴定仪，过程中仍发现存在一些不足的地方，滴加氢氧化钠滴定液的操作较为不方便，需要一边操作滴定管，一边观察记录数据，且手动滴定在体积读数方面存在一定的误差，实验结果准确度取决于操作者的水平。有文献记载，电位滴定法选用自动电位滴定仪，加入标准溶液的量可准确到0.0001毫升,而人工滴定只能准确到0.01毫升REF_Ref20553\r\h[16]，且自动电位滴定仪可自动输出数据，能确定滴定终点，显示滴定终点时标准液所消耗的体积并记录保存。我认为，与自动滴定相比，手动滴定确实存在一些不足。除此之外，滴定过程中，除了正确的突跃点，有时会另外存在一两个小突跃，可能导致此现象的原因一是过滤不完全，金樱子肉粉末太细以至于没有被滤纸完全阻挡而流至滤液中，因此滤液中存在其他成分杂质，使滴定曲线出现本不该有的小突跃，因为枸橼酸对照品溶液的滴定曲线并不会出现此现象；二是金樱子总有机酸中可能存在个别二元弱酸，如果二元弱酸的两级解离常数相差较大，会分级被中和而出现两个滴定突跃；三是有机酸的成分强弱不一REF_Ref20592\r\h[17]，与NaOH滴定液中和的速率不同，导致滴定曲线有瑕疵。实验期间，正处冬季，11月和12月的温差较大，12月突然降温的几天时间里，浸泡pH计电极的氯化钾浸泡液有结晶现象，为避免对滴定结果有影响，每天对pH计进行校正。由于室温的影响，早晚的pH读数有所差别，同体积同浓度的金樱子供试品溶液滴定突跃点的pH数值相差较大，但所对应的消耗NaOH体积基本相同，偏差不大；因此可以认为突跃点的pH读数即便有所不同，但最终对应的消耗NaOH溶液体积是正确的。4.5展望随着天然药物学和药理学的发展，有机酸类物质的药理活性逐渐受到广泛关注，有机酸的药用价值不断得到发掘，因此中药中有机酸提取、分离纯化的方法在不断发展与创新，对其工艺的要求和技巧也越来越高。简单、快速和绿色环保的提取技术是发展趋向所需求的。在最新的2020版《中国药典》中记载，对金樱子的质量控制，是检查水分和总灰分；对金樱子成分的含量测定只制定了多糖类成分的标准，对其他的主要成分尚未制定相应含量标准，因此对金樱子总有机酸超声提取工艺的优化工作，能为金樱子总有机酸的含量测定工作提供参考意义。

5结论金樱子药用价值广，市场发展前景极具优势，备受科研和生产技术人员们的关注，成为人们研究的重要课题，本实验对金樱子总有机酸的超声提取工艺进行研究，选出最佳提取方案，致力于将金樱子总有机酸提取工作效率提升至更高，便于其他后续研究工作的进行。本实验一开始对枸橼酸对照品溶液和金樱子供试品溶液进行电位滴定突跃范围试验，并对该方法进行了方法学考察，金樱子总有机酸的平均加样回收率为100.58%，RSD为2.42%，由此可见此实验方法的可行性；通过单因素分析，金樱子总有机酸提取率最高对应的条件分别为乙醇体积分数70%、超声功率450W、超声时间40min，根据此结果设计正交试验开展优化工作，从而得到的最佳提取工艺方案为乙醇体积分数50%、超声功率为450W、超声时间60min，金樱子总有机酸