病毒与细胞的相互作用

关于病毒与细胞的相互作用第四章病毒与细胞间的相互作用第一节病毒的细胞培养第二节病毒与细胞的相互作用第2页,共46页，2024年2月25日，星期天第一节病毒的细胞培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。第3页,共46页，2024年2月25日，星期天一、动物接种接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。第4页,共46页，2024年2月25日，星期天动物接种的优缺点：优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍第5页,共46页，2024年2月25日，星期天二、鸡胚接种一种比较经济简便的方法。卵壳壳膜第6页,共46页，2024年2月25日，星期天接种途径

绒毛尿囊膜接种9-13日龄

尿囊腔接种9-10日龄卵黄囊接种6-8日龄羊膜腔接种10日龄脑内接种10日龄第7页,共46页，2024年2月25日，星期天

1气室2卵壳3卵黄囊4卵白5尿囊腔

6绒毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8页,共46页，2024年2月25日，星期天第9页,共46页，2024年2月25日，星期天第10页,共46页，2024年2月25日，星期天鸡胚接种的优缺点：优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备

缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。第11页,共46页，2024年2月25日，星期天

细胞培养(cellculture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。

三、细胞培养第12页,共46页，2024年2月25日，星期天每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等无个体差异，准确性和重复性好可严格执行无菌操作细胞培养本身就能显示病毒的生长特征应用空斑技术可进行病毒的克隆化优点：第13页,共46页，2024年2月25日，星期天根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型：原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。（一）细胞的类型第14页,共46页，2024年2月25日，星期天（二）细胞培养的方法静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。悬浮培养微载体培养：悬浮、微载体第15页,共46页，2024年2月25日，星期天第二节病毒与细胞的相互作用杀细胞感染非杀细胞感染

引致持续感染，对细胞代谢无影响。RNA干扰产生干扰素

第16页,共46页，2024年2月25日，星期天生产性感染（productive）：病毒感染后能产生完整的子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化。非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染（abortiveinfection）:病毒感染后不形成完整的病毒颗粒。持续性感染（persistentinfection）:持续长时间的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒。第17页,共46页，2024年2月25日，星期天第18页,共46页，2024年2月25日，星期天病毒在宿主易感细胞内增殖造成细胞损伤与死亡，这种感染称为杀细胞性变化。

一、病毒引致的杀细胞变化杀细胞变化第19页,共46页，2024年2月25日，星期天由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。①细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等；②细胞聚合，如腺病毒；③细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒；④有些病毒能形成包涵体。（一）细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)第20页,共46页，2024年2月25日，星期天CPE观察第21页,共46页，2024年2月25日，星期天CPE观察第22页,共46页，2024年2月25日，星期天CPE观察第23页,共46页，2024年2月25日，星期天正常细胞CPECPE观察第24页,共46页，2024年2月25日，星期天正常单层A72细胞接种CCV后出现细胞拉网的的单层A72细胞CPE观察第25页,共46页，2024年2月25日，星期天CPE观察正常单层A72细胞接种犬冠状病毒（CCV）后形成合胞体的的单层A72细胞第26页,共46页，2024年2月25日，星期天合胞体（syncytia）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。可以使病毒从感染的细胞直接进入相邻的正常细胞，有利于病毒在细胞间的扩散。第27页,共46页，2024年2月25日，星期天病毒引致的细胞凋亡和坏死细胞死亡（celldeath）:病毒的繁殖、产物等直接引起细胞的死亡。细胞凋亡（cellapoptosis）是病毒感染引起细胞的生理性死亡，即程序性死亡。由于病毒的杀细胞感染导致的死亡，总是发生在病毒复制完成之后。病毒抗凋亡，以延长细胞生命，直至完成子代病毒的复制周期。细胞总是在子代病毒产出之前自行死亡；是宿主细胞的重要防御机制。可及早清除感染病毒的细胞，延缓病毒在体内蔓延。第28页,共46页，2024年2月25日，星期天第29页,共46页，2024年2月25日，星期天病毒感染抗体依赖的增强作用（antibody-dependentenhancementofviralinfection,ADEsyncytia）:在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病毒结合，非但未能阻断病毒吸附宿主细胞，反而增强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。第30页,共46页，2024年2月25日，星期天能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%组织细胞感染量（TCID50）第31页,共46页，2024年2月25日，星期天（二）空斑试验

plaqueassay细胞单层接种病毒后再覆盖一层含营养液的琼脂层。这样病毒自然感染释放后不能悬浮于液体中，只能感染邻近与之接触的细胞，以致感染区由原始病灶向四周扩大，形成类似细菌的菌落，此即空斑试验。第32页,共46页，2024年2月25日，星期天第33页,共46页，2024年2月25日，星期天第34页,共46页，2024年2月25日，星期天第35页,共46页，2024年2月25日，星期天第36页,共46页，2024年2月25日，星期天空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。

CELLS第37页,共46页，2024年2月25日，星期天第38页,共46页，2024年2月25日，星期天空斑试验的用途：1.测定病毒数量2.纯化病毒

单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，可获得病毒克隆。3.鉴定病毒

不同病毒的空斑具有不同的特征。第39页,共46页，2024年2月25日，星期天（三）包涵体（inclusionbody)定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，称为包涵体，又称为内基氏小体（Negribody）。第40页,共46页，2024年2月25日，星期天包涵体的性质病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体第41页,共46页，2024年2月25日，星期天狂犬病毒包涵体（Negribody）第42页,共46页，2024年2月25日，星期天定义：细胞利用內源或外源的小分子双股RNA片段，特异性地降解同源基因的mRNA，从而导致靶基因转录后基因沉默（posttranslationalgenesilence,PTGS）的现象。

二、RNA干扰（RNAinterference,RNAi）第43页,共46页，2024年2月25日，星期天定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。

种类：α、