GB-T 30388-2013辣椒及其油树脂总辣椒碱含量的测定高效液相色谱法

辣椒及其油树脂总辣椒碱含量的测定高效液相色谱法Chilliesandchillioleoresins—Determinationoftotalcapsaicinoidcontent—MethodusingHPLC中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准用翻译法等同采用ISO7543-2:1993《辣椒和辣椒油树脂辣椒素总含量的测定第2部与本标准中规范性引用的国际文件有一致性对应关系的我国文件如下：——GB/T12729.2—2008香辛料和调味品取样方法(ISO948:1980,NEQ);——GB/T12729.3—2008香辛料和调味品分析用粉末试样的制备(ISO2825:1981,MOD)。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由全国辛香料标准化技术委员会(SAC/TC408)归口。本标准起草单位：南京野生植物综合利用研究院、晨光生物科技集团股份有限公司。1辣椒及其油树脂总辣椒碱含量的测定高效液相色谱法本标准规定了辣椒及其油树脂中总辣椒碱含量的高效液相色谱测定法。本标准适用于辣椒及其油树脂中总辣椒碱含量的高效液相色谱测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。ISO948香辛料和调味品取样方法(Spicesandcondiments—Sampling)ISO2825香辛料和调味品分析用粉末试样的制备(Spicesandcondiments—Preparationofagroundsampleforanalysis)3原理3.1辣椒粉样品在索氏连续提取器中用四氢呋喃萃取，按本标准规定的方法用高效液相色谱法测定辣椒碱含量。3.2整辣椒将样品研碎处理，然后萃取粉状样品，按本标准规定的方法用高效液相色谱法测定辣椒碱含量。3.3辣椒油树脂用四氢呋喃-甲醇溶液将油树脂样品稀释，按本标准规定的方法用高效液相色谱法测定辣椒碱含量。4试剂试剂均为分析纯，水为蒸馏水、去离子水或相当纯度的水。4.1标准物质壬酸香草酰胺(合成辣椒碱),本标准条件下，测得的纯度应大于等于95%。4.2溶剂2GB/T30388—2013/ISO7543-2:19934.2.4四氢呋喃-甲醇溶液：50/50(体积分数)。4.3流动相将70体积硝酸银溶液与30体积甲醇混合。5仪器5.2容量瓶：25mL和100mL。5.3醋酸纤维滤膜：直径25mm,孔径0.45μm。5.4分离系统：5.4.1色谱系统：高效液相色谱仪。5.4.2泵系统：高压下能提供稳定流速和程序化流速。5.4.3除气系统：用于溶剂除气。5.4.4检测器系统：280nm可调波长。5.5记录仪或积分仪。5.6色谱柱：a)材质：不锈钢；d)固定相：十八烷基(Cg)键合硅胶，最大粒度为5μm。5.7进样系统：10μL进样阀或具有相同精度的进样系统。5.8连续提取装置：索氏提取器。5.9分样筛：孔径500μm。6校正方法6.1参比溶液：壬酸香草酰胺的四氢呋喃-甲醇溶液(1g/L)。6.2校正曲线用参比溶液(6.1)配制三份浓度在0.05g/L～0.2g/L之间的壬酸香草酰胺标准溶液，每份标准溶液分别进行2次平行测定，记录峰面积，若偏差大于5%应重测。以千酸香草酰胺质量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线。6.3校正因子K按式(1)计算校正因子K:式中：m——壬酸香草酰胺的质量，单位为毫克(mg);P,——壬酸香草酰胺的纯度，%;A——壬酸香草酰胺峰面积。37取样8样品处理8.1辣椒粉8.1.1样品应全部通过500μm的分样筛(5.9),否则应按ISO2825的规定再研磨至粒度符合要求。8.1.2称取10g～15g样品(8.1.1),精确至0.1g,用100mL四氢呋喃(4.2.1)在索氏提取器(5.8)中连续提取8h,蒸去部分溶剂后，将所得提取物定量移入100mL单标线容量瓶中，用四氢呋喃-甲醇溶液8.2.1按ISO2825的规定，将样品研碎至所有颗粒都能通过孔径为500μm的分样筛。8.2.2用8.2.1的样品，处理方法如8.1.2。8.3辣椒油树脂辣椒油树脂样品应完全混合均匀。9试验方法9.1试样9.1.1辣椒粉和整辣椒吸取5mL提取液(8.1.2或8.2.2),置于25mL容量瓶中，用四氢呋喃-甲醇溶液(4.2.4)稀至刻度。注：可依据试样中辣椒碱含量和检测仪器灵敏度变动。9.1.2辣椒油树脂称取1g辣椒油树脂(8.3),精确至0.1mg,置于100mL容量瓶中，用四氢呋喃-甲醇溶液稀至刻度，吸取该溶液5mL,移入25mL容量瓶中，用流动相(4.3)溶液稀至刻度。注：可依据预估的总辣椒碱含量和仪器灵敏度，由分析者自行调整。9.2色谱测定被测试液应清澈，否则应用醋酸纤维滤膜(5.3)过滤。将试液导入色谱系统(5.4.1),测得辣椒碱(C₁)、去二氢辣椒碱(C₂)和二氢辣椒碱色谱峰面积(C₃),典型色谱图参见附录A。每份样品进行2次平行测定，若偏差大于5%,应重测。10计算按式(2)计算总辣椒碱含量(wr)的质量分数，数值以%表示： (2)4wr——总辣椒碱含量(质量分数),%;Ac₁——辣椒碱峰面积；Ac₂——去二氢辣椒碱峰面积；Ac₄——二氢辣椒碱峰面积；K——校正因子(6.3)。注：式(2)中500为稀释倍数，可根据样品中辣椒碱含量进行调整。同一样品，均取3次平行测定结果的平均值作为校正因子K或被测样品含量的最后结果，平行测定的相对误差应不大于其算术平均值的5%。检验报告应包含以下信息：a)本标准的参考资料；b)所用仪器；d)检测器(可选)参数及操作条件；e)流动相参数(流