实训三 S7-300PLC与S7-200PLC的DP通信及实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应

实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。4、尿素晶体5、1%CuSO4：1gCuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。13、95%乙醇。14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。18、1%醋酸溶液。五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）

米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加Millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。（二）

双缩脲反应1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。（三）

黄色反应取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液1ml，观察颜色有什么变化。（四）

茚三酮反应取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。（二）有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。（三）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。（四）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。六、实验结果蛋白质的颜色反应（一）

米伦（Millon’s）反应 1、苯酚实验： 溶液即出现玫瑰红色。 2、蛋白质实验： 出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。（二）

双缩脲反应1、有紫色出现。2、溶液有蓝紫色出现（三）

黄色反应先有黄色沉淀生成，加入10%NaOH溶液1ml后颜色变为橘黄色。（四）

茚三酮反应有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、有蛋白析出。2、有蛋白质析出，加水后可复溶。（六）有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象（七）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。（八）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，观察现象。实验分析蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。其中米伦试剂能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应，而组成蛋白质的氨基酸中酪氨酸含苯酚基团，因此可用米伦试剂检测蛋白质中酪氨酸的存在。尿素被加热，形成双缩脲，在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，也能进行此反应。蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反应蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。向蛋白质中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等），使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。于是稳定因素被破坏，蛋白质聚集沉淀。盐析作用一般不使蛋白质变性。某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。重金属离子（如Pb2+、Cu2+等）与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。某些有机酸的酸根则与蛋白质的自由氨基结合而沉淀。植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物成为生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如鞣酸等。当溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易与生物碱试剂的负离子发生反应而沉淀。蛋白质变性（proteindenaturation）是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。如果变性条件剧烈持久，蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈，这种变性作用是可逆的。这时，如果除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性，这种现象称为蛋白质复性（renaturation）。例如胃蛋白酶加热至80～90℃时，失去溶解性，也无消化蛋白质的能力，如将温度再降低到37℃，则又可恢复溶解性和消化蛋白质的能力。蛋白质变性的应用价值医学：临床上的消毒和灭菌---使病原微生物变性注射及外伤采用75%乙醇灭菌手术器械及其它用品采用高温高压灭菌手术室用紫外线灭菌用热凝法检查尿蛋白实验室：防止蛋白质变性：在生产和保存激素、酶、抗体血清等具有生物活性的蛋白质（如酶、疫苗、免疫血清等）时，应防止其变性失活，其中在低温条件下生产与贮存以上蛋白质就是这个道理。实验室的灭菌：细胞培养室等亦用紫外线照射消毒灭菌。日常生活：熟食较生食易消化：因为蛋白质变性后，肽链构象由卷曲变为伸展，使肽健暴露，易被蛋白水解酶消化水解。其中盐析法作为一种蛋白质胶体简便的提取手段被广泛应用于工业生产。盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。如向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质。因此，盐析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。但盐析法提纯的抗原浓度不高，只能用于抗原的初步纯化。目前盐析法应用于免疫球蛋白和酶提取、分离纯化、浓缩等和中药的提取。实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。4、尿素晶体5、1%CuSO4：1gCuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。13、95%乙醇。14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。18、1%醋酸溶液。五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）

米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加Millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。（二）

双缩脲反应1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。（三）

黄色反应取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液1ml，观察颜色有什么变化。（四）

茚三酮反应取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。（二）有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。（三）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。（四）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。六、实验结果蛋白质的颜色反应（一）

米伦（Millon’s）反应 1、苯酚实验： 溶液即出现玫瑰红色。 2、蛋白质实验： 出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。（二）

双缩脲反应1、有紫色出现。2、溶液有蓝紫色出现（三）

黄色反应先有黄色沉淀生成，加入10%NaOH溶液1ml后颜色变为橘黄色。（四）

茚三酮反应有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、有蛋白析出。2、有蛋白质析出，加水后可复溶。（六）有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象（七）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。（八）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，观察现象。实验分析蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。其中米伦试剂能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应，而组成蛋白质的氨基酸中酪氨酸含苯酚基团，因此可用米伦试剂检测蛋白质中酪氨酸的存在。尿素被加热，形成双缩脲，在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，也能进行此反应。蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反应蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。向蛋白质中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等），使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。于是稳定因素被破坏，蛋白质聚集沉淀。盐析作用一般不使蛋白质变性。某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。重金属离子（如Pb2+、Cu2+等）与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。某些有机酸的酸根则与蛋白质的自由氨基结合而沉淀。植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物成为生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如鞣酸等。当溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易与生物碱试剂的负离子发生反应而沉淀。蛋白质变性（proteindenaturation）是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。如果变性条件剧烈持久，蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈，这种变性作用是可逆的。这时，如果除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性，这种现象称为蛋白质复性（renaturation）。例如胃蛋白酶加热至80～90℃时，失去溶解性，也无消化蛋白质的能力，如将温度再降低到37℃，则又可恢复溶解性和消化蛋白质的能力。蛋白质变性的应用价值医学：临床上的消毒和灭菌---使病原微生物变性注射及外伤采用75%乙醇灭菌手术器械及其它用品采用高温高压灭菌手术室用紫外线灭菌用热凝法检查尿蛋白实验室：防止蛋白质变性：在生产和保存激素、酶、抗体血清等具有生物活性的蛋白质（如酶、疫苗、免疫血清等）时，应防止其变性失活，其中在低温条件下生产与贮存以上蛋白质就是这个道理。实验室的灭菌：细胞培养室等亦用紫外线照射消毒灭菌。日常生活：熟食较生食易消化：因为蛋白质变性后，肽链构象由卷曲变为伸展，使肽健暴露，易被蛋白水解酶消化水解。其中盐析法作为一种蛋白质胶体简便的提取手段被广泛应用于工业生产。盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。如向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质。因此，盐析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。但盐析法提纯的抗原浓度不高，只能用于抗原的初步纯化。目前盐析法应用于免疫球蛋白和酶提取、分离纯化、浓缩等和中药的提取。实训三S7-300PLC与S7-200PLC的DP通信一、实训目的：1．了解网络的基本知识，了解西门子工业网络结构。2．学习现场总线通信的基本知识，了解PROFIBUS-DP技术规范。3.能正确设置S7-300、S7-200的映射区。4.能构建S7-300控制S7-200构架及编程。二、实训内容：控制要求：如下图1所示，主站（S7-300）按启动（I0.0），主站彩灯亮(Q0.0)，延时2秒后，从站（S7-200）彩灯亮(Q0.0)，2秒后主站灯灭，再经2秒后从站彩灯灭，从站彩灯灭2秒后主站彩灯亮，如此循环；主站按停止(I0.1)，主从站彩灯全停，如图2所示。图1主-从网络结构图2系统控制要求三、实训设备：THPFSF-3型实训装置、DP总线、安装有STEP7V5.5编程软件计算机、S7200PLC、EM277模拟、导线若干。四、实训步骤：（一）硬件连接1.通过S7-200扩展端口排线将S7-200CPU与PROFIBUS-DP从站模块EM277连接起来，如图3所示。同进将EM277的DP地址设置为“3”（要与后面的组态地址一致），通过图4中箭头位置所示的旋转开关设置。图3S7-200CPU与EM277连接图4EM277模块2.用制作测试完好的PROFIBUSDP总线将S7-200PLCEM277DP接口与S7-300PLC的DP接口（X2接口）连接起来，组成PROFIBUS-DP网络。如图5所示。图中主、从站下面的“2”、“3”是规划的DP网络地址号。图5构建PROFIBUS-DP网络（二）网络组态1.生成S7-300主站打开STEP7，首先执行菜单命令“文件”→“新建...”创建一个S7项目，自己可重新命名项目名，这里重命名为“300-200”。选中项目名，然后执行菜单命令“插入”→“站点”→“SIMATIC300站点”，在此项目下插入S7-300的PLC工作站。根据PLC工作站硬件实际完成组态，这里PLC用的是S7300CPU314C-2DP，订货号为：6ES7314-6CH04-0AB0。（1）选中SIMATIC管理器左边的站对象“SIMATIC300（1）”，双击右边窗口的“硬件”图标，打开硬件组态工具HWConfig。（2）放置机架。用鼠标打开硬件目录中的文件夹“\SIMATIC300\RACK-300”，选中机架Rail，可用“拖放”的方法或用鼠标双击之放置机架。（3）放置CPU。用鼠标单击选中机架2号槽，之后打开硬件目录中的文件夹“\SIMATIC300\CPU-300\CPU314C-2DP\6ES7314-6CH04-0AB0”，选中“V3.3”固件，可用“拖放”的方法或用鼠标双击之放置，在出现如图6所示的“PROFIBUS接口DP”对话框。点击图6对话框中的“新建”按钮，在出现的“新建子网PROFIBUS”对话框中选中网络设置选项卡，如图7所示。这里采用系统默认参数，点击图7中的“确定”按钮，返回图6所示对话框，这时在“子网”窗口出现了“PROFIBUS（1）1.5Mbps”网络，点击该对话框“确定”按钮。这时在硬件组态工具中出现CPU314C-2DP情况，并且在其DP接口后带有“PROFIBUS（1）”总线，如图8所示。图6“PROFIBUS接口DP”对话框图7新建子网对话框图8PROFIBUS（1）主站系统组态双击机架中的“2.2DI24/DO16”插槽，在“DI24/DO16”属性对话框，将此台PLC“DI24/DO16”的地址修改为从IB0、QB0开始。2.安装EM277的GSD文件EM277模块必须安装GSD文件（siem089d.gsd）。siem089d.gsd文件一般情况包含中名为EM277的压缩文件中，此文件可从西门子网站上下载（/download/）。安装GSD文件之前，应将EM277压缩文件解压。打开硬件组态，在“选项”菜单下选择“安装GSD文件”命令，如图9所示。在出现如图10所示“安装GSD文件”对话框中，点击“浏览…”按钮，在出现的对话框中找到EM277解压的文件夹并打开，就会出现如图11所示对话框。图9安装GSD文件菜单命令图10安装GSD文件对话框点击图11中的“安装”按钮，开始安装GSD文件，系统会提醒安装GSD文件后不能撤消，确定即可。安装结束后，关闭对话框，在HWConfig右边的硬件目录窗口中的“\PROFIBUSDP\AdditionalFieldDevices\PLC\SIMATIC”文件夹中，可以看到新安装的EM277。图11安装GSD文件对话框3.组态EM277从站安装导入GSD文件后，将HWConfig右侧窗口的设备列表中的“EM277PROFIBUS-DP”拖放到左边窗口的PROFIBUS-DP网络上。之后系统弹出如图12所示的EM277PROFIBUS-DP属性对话框，将地址栏选设为“3”，然后点击“确定”按钮。图12EM277PROFIBUS-DP属性对话框用鼠标选中生成的EM277从站，打开右边窗口设备列表中的“\EM277PROFIBUS-DP”子文件夹，根据实际系统的需要选择传送的通信字节数（本次实训所需IO不多，选择的是2字节输入/2字节输出方式）。将“\EM277PROFIBUS-DP”子文件夹下的“2BytesOut/2BytesIn”拖放到下面窗口表格中的1号槽。STEP7自动分配远程I/O的输入输出地址，这里系统分配给EM277的输入、输出字节地址分别为IB3-IB4和QB2-QB3。如图13所示。图13EM277从站加入网络双击网络上的EM277从站，打开DP从站属性对话框。点击“常规”选项卡中的“PROFIBUS…”按钮，在打开的接口属性对话框中，可设置或修改EM277的站地址。注意EM277上的拨码开关设置的站地址应与STEP7中设置的站地址相同。点击“参数赋值”选项卡，如图14所示。设置“I/OOffsetintheV-memory”（S7-200V存储区中的I/O偏移量）为100，之后点击对话框的“确定”按钮。图14DP从站属性对话框这样设置后，S7-200通过VB100～VB103与主站S7-300交换数据，如图15所示。●VB100、VB101是S7-300写到S7-200的数据，对应于S7-300的QB2、QB3；●VB102、VBl03是S7-300从S7-200读取的数据，对应于S7-300的IB3、IB4。图15交换数据区4.组态完成后，执行菜单命令“站点\保存并编译”或点击工具栏上的“保存并编译”按钮。5.执行SIMATIC管理器菜单命令“选项\组态网络”，也可以点击工具栏上的“组态网络”按钮，打开网络组态工具NetPro，如图16所示。可以看到S7-300与EM277连接到了PROFIBUS（1）网络上。图16网络组态工具NetPro执行菜单命令“网络\保存并编译”或点击工具栏上的“保存并编译”按钮，出现“保存并编译”对话框，选择“编译并检查全部”项后点击“确定”按钮。系统会完成编译，创建网络组态数据。组态结束后，将组态信息下载到S7-300