T-WEBIO 0001-2023 人源原代细胞制备及质量控制规范

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04 T/WEBIO

0001—2023人源原代细胞制备及质量控制规范

of

primary

preparation

and

quality

control 武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会  发

布学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔下载学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/WEBIO

00012023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 II

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00012023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 本文件按照GB/T

1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定II学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/WEBIO

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GB/T

37864-2019

GB/T

38736-2020

GB/T

39767-2021

GB/T

（STR）（Human

Cell

LineAuthentication

Standardization

of

Tandem

Repeat（STR）Profiling）

3.1

3.2

primary

3.3

finite

cell

line3.4

infinite

cell

3.5

cell

strain过选法或隆形法从代培物或胞系中获具有殊性或标物的养物为细3.6

complete

medium

兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

5.2.2.2

兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

5.2.2.2

mm

～2

mm

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic

PCR：聚合酶链式反应（Polymerase

STR：短片段重复序列（Short

Tandem

PBS：磷酸盐缓冲溶液（Phosphate

Buffer

HRP：辣根过氧化物酶（Horseradish

Peroxidase）EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene

Diamine

Tetraacetic

5.1

GB/T40352.1-2021

GB/T

38736-2020

GB/T

39767-2021

离体组织的临时保存和运输时间应不超过

24

5.2

5.2.1.1

5.2.1.2

mm～2

mm5.2.1.3

37

72

5.2.1.4

72

5.2.2.1

5.2.2.3

加入组织消化液，37

0.5

5.2.2.4

5.2.2.5

胸腹水或血液样本以300

g～500

g转速离心5

min～10

min，收集细胞沉淀后直接接种培养；若红5.3

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0.5×10

80

T25

细胞培养瓶内加入

mL

0.02

EDTA

0.05

%～0.25

%的胰蛋白酶，置于

37

下进行消化

min～3

min，消化后在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，立

300

g～500

次，需要时可进行细胞计数和活性检测。

mL

37

5.4

在培养瓶背面标记目的细胞的生长区域，刮除无标记区域的杂细胞，用PBS洗去杂细胞，加入新鲜

参考步骤5.3.1～5.3.6收集细胞，接种至新的培养瓶中培养5

min～20

液，接种至新的培养瓶中培养5

min～20

min。重复数次，收集最后一次细胞悬液，接种至新培养瓶中

5.5

-80

冻存细胞时应采用合适的细胞冻存液，以长时间维持细胞活性。细胞冻存后，定期取出做活性

6.1

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40

90

%～100

当细胞形态发生异常变化，经调整适应不能恢复的，应予以身份鉴定确认，若发生身份变异，6.2

PCR6.2.1.1

操作步骤参考《中华人民共和国药典》2020

6.2.1.2

检测种属包含牛、叙利亚仓鼠、猫、狗、人、小鼠、鸡、猪、中国仓鼠、大鼠、兔、豚鼠、6.2.1.3

STR6.2.2.1

6.2.2.2

6.2.2.3

人源细胞

STR

检测至少包含

13

D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX

vWA。6.2.2.4

STR

根据细胞特性，做标记物检测，操作步骤见附录C。6.3

操作步骤参考《中华人民共和国药典》2020

6.4

操作步骤参考《中华人民共和国药典》2020

6.5

年版三部中生物制品生产检定用动物细胞基质制备

人源细胞需检测常见人源病毒，如人疱疹病毒（EBV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒

6.6

年版三部中生物制品生产检定用动物细胞基质制备

6.7

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年版三部中生物制品生产检定用动物细胞基质制备

疾病诊断开始日期是否仍存在结束日期

□是

□否

□是

□否

□是

□否

手术名称手术日期

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A.1

1.

医院及科室：2.

捐赠者住院号：3.

年龄：4.

性 别：□男 5.

民 汉族 其他，其他说明：6.

临床诊断：病理分期 eq

\o\ac(□,T) eq

\o\ac(□,N) Meq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)临床分期 Ⅰ期 eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)7.

现接受的抗癌治疗：eq

\o\ac(□,1.)放疗 eq

\o\ac(□,2.)化疗间 eq

\o\ac(□,3.)靶向治疗 eq

\o\ac(□,4.)手术eq

\o\ac(□,5.)无 eq

\o\ac(□,6.)其他8.

是否有肿瘤手术史9.

是否有过往伴随疾病史？

□否10.8.

是否有肿瘤手术史9.

是否有过往伴随疾病史？

□否10.

是否有家族遗传病史？

□是

□否

1.

2.

3.

4.5.

6.

7.PBMC

8.

9.10.

11.

12.

13.检测鉴定原代细胞保藏ｏｍ标准下ｘｗ．ｂ兔ｗｗｗ学兔ｚｆ．ｃ载T/WEBIO

2023ｏｍ标准下ｘｗ．ｂ兔ｗｗｗ学兔ｚｆ．ｃ载

B.1

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00012023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 C.1

C.2

15

min，PBS

C.3

0.5

Triton

X-100（PBS

20

min，PBS

min。C.4

%的过氧化氢滴加于玻片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育

15

min，PBS

浸洗

C.5

30

C.6

吸水纸吸掉玻片周围多余液体，每张玻片滴加足够量稀释好的一抗并放入湿盒，4

℃孵育过夜。C.7

加酶标二抗：PBS

冲洗玻片

次，每次

min，吸水纸擦干玻片后滴加

HRP

37

30

C.8

加显色剂：PBS

冲洗玻片

次，每次

min，甩去

PBS

液，吸水纸擦干玻片，每张玻片滴加新鲜

DAB

C.9

复染：Harris

min

PBS

C.10

脱水：将玻片置于水中浸洗后，将玻片依次放入

70

%酒精—80

%酒精—90

%酒精—95

%酒精—

C.11

C.12

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[1]

基1（C01）DNA（Species—Level

Identification

of

Animal

through

Cytochrome

OxidaseSubunit

1（C01）DNA

[2]

Geraghty

RJ,

Capes-Davis

A,

JM,

J,

Freshney

RI,

Knezevic

I,

R,

Masters

JR,

Meredith

J,

Stacey

GN,

Thraves

P,

Vias

M;

Cancer

UK.

Guidelines

forthe

use

of

cell

in

biomedical

Br

Cancer.

2014

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Y,

C,

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of

Cross-Contamination

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authenticating

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Gu

M,

Yang

M,

He

J,

Xia

S,

Z,

Wang

Y,

C,

Shen

C.

silver

lining

in

cellline

authentication:

tande