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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口食品中四种致病菌检测方法MALDI-TOF-MS法2014-01-13发布2014-08-01实施I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。1出口食品中四种致病菌检测方法MALDI-TOF-MS法1范围本标准规定了食品中四种致病菌的MALDI-TOF-MS检测方法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.7食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求SN0170出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法SN/T0173进出口食品中副溶血性弧菌检验方法NMKLNo.156食品中致病性弧菌的检测和计数下列缩略语适用于本文件。3.1MALDI-TOF-MS:Matrix-AssistedLaserDesorption/lonizationTime-of-FlightMassSpectrome3.2CHCA:a-cyano-4-hydroxy-cinnamicacid,a-氰-4-羟基肉桂酸。4方法提要2并使样品电离，经过飞行时间检测器，将不同质荷比的离子分开，形成细菌特异性的质谱图。将待测细菌质谱图与已知细菌的标准蛋白质组指纹质谱数据库进行比较，可以确定细菌的种属，进行细菌鉴定，从而对食品中的致病菌进行快速检测。5.3甲酸。5.7蛋白标准品：校准范围3000Da～25000Da。5.8基质溶液：将基质CHCA粉末加入到含有50%乙腈、2.5%三氟乙酸的水溶液中，配制成饱和溶30:0.1:69.9的溶液中，将肽溶液与蛋白溶液以1:5的比例混合后配制成标准品溶液。6主要仪器和设备6.1基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪。7检测步骤食品中致病菌MALDI-TOF-MS检测流程见图1。3MALDI-TOF-MS检测阴性结果可疑阳性结果结果报告图1MALDI-TOF-MS法检测致病菌的流程图7.2.2食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测样品的制备、增菌培养和分离步骤参照GB4789.30或7.2.3食品中副溶血性弧菌检测样品的制备、增菌培养和分离步骤参照GB/T4789.7或SN0173方法7.2.4食品中霍乱弧菌检测样品的制备、增菌培养和分离步骤参照SN/T1022或NMKLNo.156方法7.3点样样品的处理4取1μL处理后样品点到96孔靶上，待液滴干燥后，取1μL基质溶液覆盖其上；点样品的同时在靶上点标准品；干燥后进行MALDI-TOF-MS检测。8.1待检致病菌经MALDI-TOF-MS鉴定为非目标

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