SN 1376.1-2004牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定国家质量监督检验检疫总局I本标准的附录A是规范性附录。1牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定本标准规定了牛传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定方法。本标准适用于牛传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准中引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。4.1试验用培养基包括运输培养基、10%马血清肉汤培养基、10%马血清肉汤琼脂培养基、普通10%4.3实验用水应符合GB/T6682—1992中的二级水标准。5.1活牛的样品采集用灭菌拭子采集鼻分泌或用注射器无菌穿刺采取胸腔液。5.2死牛的样品采集样品需长途运递的应将其置于运输培养基内，于4℃条件下48h内送达实验室。采集的样品无法立即送实验室的或者实验室不能立即检验的，应将样品置—20℃保存。6病原分离培养6.1.1污染样品：将病料置于含500IU/mL青霉素及1:7000乙酸铊的肉汤中磨碎，10倍稀释后4℃26.2.1取0.1mL～0.3mL样品无菌接种于5管10%马血清肉汤培养基中，置37℃培养直至第10d。6.2.2用无菌接种环钩取样品划线接种于10%马血清肉汤琼脂培养基上，每个样品共接种5个培养6.3生长观察6.3.1接种后第3d开始每天观察接种管及培养皿细菌生长情况直至第10d。7.1.1挑取菌落接种10%马血清肉汤培养基中3d～5d后观察结果。牛传染性胸膜肺炎病原生长表现如6.3.2所述。7.1.2挑取菌落接种在普通10%马血清肉汤琼脂培养基上，3d～5d后观察结果。牛传染性胸膜肺炎病原生长表现如6.3.3所述。培养基溶解后，15磅灭菌15min。待培养基温度降至37℃以下时，将乙酸铊、青霉素及经56℃灭活30min的马血清加入其中，混匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置4℃A.2.1培养基的成分：牛心浸液1000mL、酵母浸膏100g、马血清100mL、葡萄糖5g、DNA2g、青霉素500000IU、乙酸铊0.14g。沸溶解后，15磅灭菌15min。待培养基温度降至37℃以下时，将乙酸铊、青霉素及经56℃灭活30min的马血清加入其中，混匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置4℃保存备用。A.310%马血清肉汤琼脂培养基DNA2g、青霉素500000IU、乙酸铊0.14g。混匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置4℃保存备用。A.4普通10%马血清肉汤琼脂培养基后，加入经56℃30min灭活的无菌马血清和DNA,混匀，分装至灭菌培养皿，经无菌检验后置4℃保存备用。50%葡萄糖溶液10mL。葡萄糖溶液和经56℃灭活30min无菌马血清100mL,混匀，无菌分装至无菌的生化试管中，经无菌检验后置4℃保存备用。A.6精氨酸生化培养基38%精氨酸盐溶液40mL。A.6.2培养基的配制牛心浸液中加入酚红、酵母浸膏，煮沸溶解，15磅灭菌15min,无菌加入DNA、无菌的