T-SDYZXCP 001.2-2023 禽蛋中药物残留量的测定 第2部分：6 种喹诺酮类药物的测定液相色谱-串联质谱法（固相萃取法）

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B

45团 体 标 准T/SDYZXCP

禽蛋中药物残留量的测定第

2

部分：6

种喹诺酮类药物的测定液相色谱-串联质谱法（固相萃取法）2023-10-13

发布 2023-12-13

实施发布学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

001.2—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 本文件按照GB/T

1.1－《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。T/SDYZXCP

001《禽蛋中药物残留量的测定》分为如下部分：——第1部分：6种喹诺酮类药物的测定 液相色谱-串联质谱法（QuEChERS法）；——第2部分：6种喹诺酮类药物的测定液相色谱-串联质谱法（固相萃取法）；……本文件是

T/SDYZXCP

的第2部分。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省优质畜产品协会提出并归口。公司、国检（青岛）检测技术有限公司、阳信县综合检验检测中心、莱西市农业农村局。徐海峰。Ⅰ学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

001.2—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

部分：

液相色谱1 范围本文件规定了禽蛋中6种喹诺酮类药物残留量测定的固相萃取-液相色谱-串联质谱法。本文件适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽子蛋和鹌鹑蛋中恩诺沙星、环丙沙星、洛美沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星的测定。本文件氧氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星的检出限为

，定量限为

2μg/kg

1.2

，定量限为

4

。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，文件。。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理试样中的喹诺酮类药物用

-Mcllvaine

缓冲溶液提取，经亲水-亲脂平衡固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。5 试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1 水：GB/T

，一级。5.2 乙腈：色谱纯。5.3 甲醇：色谱纯。5.4 甲酸：色谱纯。5.5 磷酸氢二钠溶液（

）：称取

71.63

g

磷酸氢二钠，用水溶解并定容至

1

000

，混匀。5.6 柠檬酸溶液（

）：称取

21.01

g

1

，混匀。5.7 Mcllvaine

1000mL0.1

磷酸氢二钠溶液（5.5）混合，用盐酸或氢氧化钠调节

至

4.0±0.05。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

001.2—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5.8 EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（

）：称取

g

乙二胺四乙酸二钠至

1625

Mcllvaine

缓冲溶液（5.9 乙酸锌溶液（2

）：称取

36.7

g

乙酸锌，用水溶解并定容至

，混匀。5.105%甲醇水溶液：甲醇（5.3）+水=5+95。5.11 0.2%甲酸水溶液：甲酸（）+水=2+998。5.12 5mmol/L

0.1%

0.385g

1

5.4并稀释至

，混匀。5.13 标准储备溶液（1.0

）：称取

6

种喹诺酮类药物标准品（中英文名称、分子式、分子量、CAS

号和纯度按附录

A

执行）各

10

（精确至

，折算纯度和相应的含盐量之后的实际质量）分别置于

棕色容量瓶中，用甲醇（5.3）溶解并定容。-

℃以下避光保存，有效期

6

个月。5.14 混合标准中间溶液（10

）：分别准确移取标准储备溶液（5.13）各

0.1

于

10

容量瓶中，用甲醇（5.3）定容至刻度，混匀。-18

℃

1

个月。5.15 1.05.14）1

于

容量瓶中，用甲醇（4

℃

1

个月。5.16

3

CAS号和纯度按附录

A

执行）各

10

（精确至

0.01

，折算纯度和相应的含盐量之后的实际质量）分别置于

棕色容量瓶中，用甲醇（5.3）溶解并定容。-

℃以下避光保存，有效期

6

个月。5.17 混合内标标准中间溶液（

μg/mL）：准确移取内标储备溶液（5.16）各

0.1

于

10

容量瓶中，用甲醇（5.3）定容至刻度，混匀。-18

℃

1

个月。5.18 混合内标工作溶液（0.1

）：准确移取混合内标标准中间溶液（5.17）0.1

于

容量瓶中，用甲醇（4

℃

1

个月。5.19 亲水-亲脂平衡型固相萃取柱：

5.20 微孔滤膜：0.22

μm，水系。6 仪器设备6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（）。6.2分析天平：精度为

0.01

g

和

0.01

。6.3 涡旋混合器。6.4 超声波清洗机。6.5 冷冻离心机：转速≥10

，温度≤4

℃。6.6 氮吹仪。6.7 固相萃取装置。6.8均质机。6.9 pH

计。7 样品g18℃待测物保留时间处，仪器响应值小于方法定量限30%的样品，作为空白样品。2时间A%%09010390108703010703010.55951359513.19010159010兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ学兔．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

001.2—2023兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ学兔．ｃｏｍ标准下载8 试验步骤8.1 提取平行做两份试验，称取试样

5.00

g±0.05

g（精确至

0.01g），置于

离心管中，准确加入500

5.18），用

15

EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（）稀释，加入

5

乙酸锌溶液（），涡旋混合

1

min，超声提取

10

min，10

000

离心

25

容量瓶中，用

EDTA-

缓冲溶液（）定容。8.2 净化取固相萃取柱（5.19），依次用

6

甲醇（）洗涤、6

水活化。准确移取

5

提取液（8.1）过柱，用

2

甲醇水溶液（5.10

10

甲醇（）洗脱，收集洗脱液，40氮气吹干，用

1

mL0.2%甲酸水溶液（5.11）溶解，涡旋混匀，过膜（5.20），待测。8.3标准工作曲线的制备准确移取混合标准工作溶液（5.15）、混合内标工作溶液（5.18），用

0.2%甲酸水溶液（5.11）逐级稀释成

2.0

、5.0

、10.0

、20.0

、50.0

和

100.0

的混合标准系列溶液，内标浓度均为

。8.4 测定8.4.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）

色谱柱：C色谱柱，内径

，柱长

50

，粒径

1.7

μm，或性能相当者；b）

柱温：40

℃；c）

流速：0.2

；d）

进样量：2

；e）

流动相：A

相为

5

乙酸铵溶液（含

0.1%甲酸）（5.12），B

相为乙腈（）。梯度洗脱程序见表

1。表1表1 梯度洗脱程序序号组分母离子子离子锥孔电压V碰撞能量V1诺氟沙星320.2302.01621231.115392氧氟沙星362.2318.23018261.130283洛美沙星352.0265.02523308.025174培氟沙星334.0290.12518316.225215环丙沙星332.1314.12521287.824176恩诺沙星360.0316.41320342.127207D5-恩诺沙星365.1321.111198D8-环丙沙星340.3322.110219D5-诺氟沙星325.3307.21020注：

为定量离子。．ｃｏｍ标准．ｂｗｗ兔ｗ兔学ｚｆｘｗ下载T/SDYZXCP

001.2—2023．ｃｏｍ标准．ｂｗｗ兔ｗ兔学ｚｆｘｗ下载8.4.2 质谱参考条件质谱参考条件如下：a）

离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）

扫描方式：正离子扫描；c）

检测方式：多反应监测（MRM）；d）

4

V；e）

℃；f）

脱溶剂温度：250

℃；g）

℃；h）

雾化气流速：

；i）

干燥气流速：10.0

；j）

加热气流速：10.0

。6

种喹诺酮类药物和

3

种氘代同位素标准品多反应监测（MRM）离子对、锥孔电压和碰撞能量见表

2。表2 离子对、锥孔电压和碰撞能量表2 离子对、锥孔电压和碰撞能量4相对离子丰度＞50＞20～＞10～≤10允许偏差±25±30±50下准．ｂｚｆｘｗ兔兔ｗｗｗ学．ｃｏｍ标载T/SDYZXCP

001.2—2023下准．ｂｚｆｘｗ兔兔ｗｗｗ学．ｃｏｍ标载6种喹诺酮类药物和38.5 定性%系列溶液相对丰度一致，其允许偏差应符合表3的要求。表3 定性测定时相对离子丰度允许偏差

表3 定性测定时相对离子丰度允许偏差

×𝑓……………….

(1)ω

=

×𝑓………（2）30%样液中喹诺酮类药物的响应值应在标准曲线线性范围内。9 试验数据处理试样中待测物的含量以质量分数计，数值以微克每千克（μg/kg）表示。多点校准按公式（1）计算；单点校准，按公式（2）计算：ω

=

式中：——试样中待测物的含量，单位为微克每千克（）；C——由工作曲线查得的试样中待测物的浓度，单位为纳克每毫升（）；

——定容体积，单位为毫升（）；

——g）；1

000——单位换算；

——稀释倍数。式中：——试样中待测物的含量，单位为微克每千克（）；——试样溶液中待测物的峰面积；——定容的体积，单位为毫升（）；——标准工作溶液中待测物对应内标的峰面积；5学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

001.2—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载C——标准工作溶液中待测物的质量浓度，单位为纳克每毫升（）；C——试样溶液中待测物对应内标的质量浓度，单位为纳克每毫升（）；——试样质量，单位为克（g）；——试样溶液中待测物对应内标的峰面积；——标准工作溶液中待测物的峰面积；C’——标准工作溶液中待测物对应内标的质量浓度，单位为纳克每毫升（）；1

000——单位换算；——稀释倍数。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。10 检测方法准确度、精密度10.1 准确度本方法在

2

μg/kg～100

μ

60%～120%。10.2 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过该算术平均值的

20%。6序号化合物名称英文名

登录号分子式分子量纯度%1诺氟沙星70458-96-716H18FN3O3319.33≥952氧氟沙星Ofloxacin82419-36-118H20FN3O4361.37≥953洛美沙星Lomefloxacin98079-51-717H19F2N3O3351.35≥954培氟沙星Pefloxacin70458-92-317H20FN3O3333.36≥955环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-117H18FN3O3331.34≥956恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-619H22FN3O3359.39≥957D8-环丙沙星Ciprofloxacin-d81130050-35-917H18D8FN3O3339.39≥958D5-恩诺沙星Enrofloxacin-d51173021-92-519H17D5FN3O3364.37≥959D5-诺氟沙星1015856-57-116H13D5FN3O3324.37≥95下准ｏｍ标．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ载T/SDYZXCP

001.2—2023下准ｏｍ标．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ载附 录 A（规范性）6

种喹诺酮类药物和

3

种氘代同位素标准品的中英文名称、CAS

号、分子式、分子量和纯度6

种喹诺酮类药物和

3

种氘代同位素标准品的中英文名称、CAS

号、分子式、分子量和纯度见表A.1。表A.1表A.1 诺氟沙星/4.894洛美沙星/5.729ｘｗ．ｃ环丙沙星/5.272兔ｗｗｗ．ｂ恩诺沙星/6.125ｚｆ培氟沙星/5.159ｏｍ标学d8-环丙沙星/5.217d5-诺氟沙星/4.858兔准下载氧氟沙星/4.986T/SDYZXCP

001.2—2023诺氟沙星/4.894洛美沙星/5.729ｘｗ．ｃ环丙沙星/5.272兔ｗｗｗ．ｂ恩诺沙星/6.125ｚｆ培氟沙星/5.159ｏｍ标学d8-环丙沙星/5.217d5-诺氟沙星/4.858兔准下载氧氟沙星/4.986附 录 B（资料性）6种喹诺酮类化合物和3种氘代同位素标准品多反应监测（MRM）谱图6种喹诺酮类化合物和3种氘代同位素标准品多反应监测（MRM）谱图见图。2:362.20>318.20(+)2:362.20>261.10(+)9:332.10>231.00(+)2:362.20>318.20(+)2:362.20>261.10(+)9:332.10>231.00(+) 9:332.10>314.10(+)9:332.10>287.80(+) 14:325.30>307.20(+)4.25 4.755.00

4.25

4.50

4.75

5.00

5.25

5.50

5.754.5