对奶牛乳房炎的病理变化、实验室鉴定及对症治疗的讨论

对奶牛乳房炎的病理变化、实验室鉴定及对症治疗的讨论摘要在奶牛场常见疾病中，乳房炎发病频率较高，且防治有难度，因而严重阻碍着奶牛养殖业发展。目前我国的奶牛业经过多年的积累，正在以良好态势快速发展，相关技术、措施和设施与奶业发展相比出现落差，因此，乳房炎造成牧场经济较高损失。通过对乳房炎的严重程度等级评估，及实验室检验，寻找出影响乳房炎的各种因素，并对乳房炎症状及病理变化进行治疗，从而使得治疗效果达到最有效，对提高牧场经济效益有至关重要意义。奶牛出现乳房炎的病因追溯起来，会发现引发的病原菌和微生物种类不特定。各种病原微生物通过在奶牛和养殖场的环境中寄生，成为致病隐患。截止目前所发现的病原微生物达到150种左右，最常成为致病因素的共23种。诊断乳房炎需要实验室检验、现场检查两类方式共同采取。临床上，通过对牛奶的变化和乳房所出现的症状不难诊断乳房炎；但是隐性乳房炎则由于不出现临床表现而只能通过实验室检验的手段来做出诊断。关键词：奶牛乳房炎检测

目录1前言 -14-1前言1.1乳房炎的概念从症状的角度看，奶牛乳房炎临床表现为乳房实质或间质的炎症，引发原因包括病原微生物、机械性刺激，也有物理损伤或化学损伤引发的[1]。通常会导致奶牛的乳腺组织僵硬、乳汁变化、乳房红、痛、发热、肿大，并伴随机能障碍，这类症状突出的乳腺炎被称为临床型乳腺炎，在这种病例中，乳腺组织发生病理变化，乳中的体细胞增多且性状异常，品质下降。1.2乳房炎的危害如今，中国已成为世界第三大奶业国，万头牧场数量在国际上处于首位，截至目前奶牛的存栏总数高达1400多万头，各类乳品、奶类的产量分别高达2600、3800万吨以上。乳房炎会造成牧场泌乳牛产量减少、牛只体细胞升高；牛只产奶效率降低，生奶质量下降并跟随价值降低；繁殖率降低等影响整个牧场健康状况；隐性乳房炎则感染率极高，治疗困难，对泌乳牛产奶量有很大影响[2]。据统计，每年每个牧场由于奶牛乳房炎造成的损失达到将近20万元。1.3影响乳房炎的因素根据在牧场实践了解了影响牛只乳房炎发病原因有三类：1、牛床垫料细菌感染；2、员工挤奶操作不规范影响；3、设备保养影响。牛床垫料目前分细沙和木屑。牛床铺细沙比铺木屑牛只乳房炎发病率低，但是考虑成本及排污问题大多牧场选择木屑。牛床垫料木屑如果干物质太少湿气高，牛棚通风效果差，导致细菌生长快，这是牛只乳房炎发病是主要原因[3]。人为影响主要在挤奶操作上，如头三把奶奶量不足、药浴浓度不够、脱杯时牛只奶盘剩奶量多、后药浴不完全，每一环节对牛只引发乳房炎都有影响。挤奶操作对牛只所用毛巾需要分类，奶衬挤奶后需要消毒水浸泡，防止交叉感染，挤奶结束奶衬清洗干净[4]。未按照规定时间检查及更换挤奶设备，发生奶衬气管漏气、集乳器气孔堵塞、奶管麻花状态，真空压力不平衡等环节导致牛只乳房炎发病原因。2按种类划分乳房炎及相应症状2.1乳房炎种类2.1.1浆液性乳房炎浆液性乳房炎的发病时间常常在母牛生产之后，症状表现为叶间、皮下结缔组织产生白细胞和浆液性渗出物，常常是因为细菌如大肠杆菌所感染而导致，低血钙也易于发病。在感染的区域会发现发红、肿大的情况，用手触摸会发现有硬固存在，乳房中的淋巴结肿大，同时产奶会降低[5]。一般发病初期症状轻微，不会有肿痛和发热的情况，乳汁量也无明显改变，但随着病情加重，乳房就会不断肿大，奶牛体温随之升高，精神不振，饮食减少，此时的乳汁质量下降，乳汁非常稀薄，其中还有一些絮状物。2.1.2卡他性乳房炎卡他性乳房炎的症状表现为乳池的腺状上皮、输乳管、腺管、其他上皮细胞、腺泡出现变形和剥脱，产生较多白细胞，并伴随剥脱下来的上皮一同堆积在上皮细胞的表面。而腺泡卡他表现为部分小叶发生局限性的炎症，会造成此部位的乳汁异常，表现为清水样，奶汁变稀，出现絮状凝块[6]。乳池或者输乳管卡他，会出现肿大和局部充血，产生的乳也变为含絮状凝块的异常乳汁。而凝块会使输乳堵塞而引发管腔的增大，临床判断时能摸到波动或者面团状的结节，而凝块很难挤出，会持续阻塞。2.1.3化脓性乳房炎化脓性乳房炎的病因为化脓性放线菌，会导致乳腺化脓，有时还会伴随非接触性、脓肿性、感染性、慢性疾病。而这种致病菌存在很广泛，不仅在饮水、饲料或者土壤中可能存在，而且还很容易在奶牛的呼吸道、口腔和皮肤中寄生[7]。一旦乳头被带有病菌的昆虫叮咬，或者奶牛本身有伤口，就很容易遭到感染，这类乳房炎常常在干乳期或夏季出现。临床的症状包括肿胀、发热、疼痛，一旦病情加重，还会导致皮肤破溃流脓，乳房淋巴结肿大，奶牛还会出现体温变高的症状，此时奶牛精神不振，食欲降低。2.1.4纤维蛋白性乳房炎纤维蛋白性乳房炎是由于纤维蛋白不断渗出，堆积在输乳管、乳池的黏膜表面，有时堆积于乳腺实质深处而引起的。这种炎症还引发乳汁的异常，导致其中产生条状物或者絮状物。临床诊断中，通过对乳池基部进行触诊能够产生捻发音。奶牛体温也会随着症状的加重而升高，精神不振，食欲下降甚至绝食[8]。2.2乳房炎临床图乳房炎乳汁临床图：奶汁变稀（左上）与正常乳汁奶汁变稀，夹有微粒坏奶奶汁变稀，夹有微粒坏奶絮状坏奶块糊状坏奶（似豆腐脑）血清样坏奶图2-1乳房炎乳汁临床图牛只乳房炎奶泡外观临床图如下：挤奶后的正常乳房发病乳房：肿大、组织僵硬发病乳房：红肿、发烫发病乳区：乳房坏死乳房上有肿块乳房上有肿块乳腺组织有局限性小硬块乳腺瘘管流脓图2-2牛只乳房炎奶泡外观临床图3乳房炎等级评估一般按三个等级对乳房炎的严重程度进行划分：一级轻度乳腺炎：仅牛奶有变化，在挤奶开始时，挤出头几把（3-5把以内）牛奶有变质，能发现有较少絮状物，乳汁异常，颜色发淡或不变，有时还会有凝块出现。不会引发乳房组织的改变，也不会导致全身症状[9]。二级重度乳腺炎：牛奶异常更加严重，乳汁会比正常牛奶色淡许多，且伴随凝块，乳房组织有轻度发红、肿胀和乳腺组织有变僵，但奶牛未出现全身症状或仅为有低热，39.5℃以下，其他良好。三级急性乳腺炎：乳汁异常进一步加重，乳汁呈现水样，变质，且会有凝块，甚而阻滞，乳房会变硬，肿大且发热，疼痛，全身症状也随之出现，精神不济，浑身无力而卧地，食欲不振，体温升高，有腹泻及脱水情况，心率加快等。4乳房炎牛的发现与处理4.1发现转盘挤奶员在挤奶中，发现牛只有上述乳房炎症状，及操作面板灯光闪烁，应对牛只做标识，采集奶样，报奶台主管，其他人员发现有乳房炎症状牛只的，及时报奶台主管。4.2隔离与检查挤奶员对所报的乳房炎牛只，均需在第一时间内予以隔离，奶台主管对所报乳房炎牛只进行检查与核实，包括隐检（或PH试纸检测）、体温测量等。4.3鉴定评判奶台主管对隔离出的乳房炎牛只落实检查，主要包括观察发病牛只的临床表现状况，检查奶汁与乳房组织变化、测量体温等，并根据检查的情况，做出乳房炎等级判定，在必要时间实施预处理。4.4标识与交接奶台主管对所报乳房炎牛只进行核实与检查后，在发病乳区上做上标识，及时安排有关人员将下台牛只移入指定治疗区，并将记录单同时移交治疗区兽医。4.5预处理主要是指在诊疗区兽医下班后，对检出二级、三级乳房炎牛的治疗，阻隔病情严重。4.5.1二级乳房炎乳房组织有轻度僵硬，体温在39.5℃以下的，及时肌注消炎药，药物为美达佳12.5-15ml或福乃达（以2ml/50kg体重）肌注，并选用抗生素庆大50ml肌注。4.5.2三级乳房炎对临床表现为急性乳房炎症状，乳房有明显红、肿的，体温在39.5℃以上的，有脱水、腹泻等全身症状的，需做静脉注射，药物除使用美达佳12.5-15ml或福乃达（以2ml/50kg）肌注外，需结合静注，5%葡萄糖氯化钠500ml/瓶×4，5%VC10ml/支×5支，氢化可的松100ml，5%碳酸氢钠500ml/瓶×1，静脉注射。同时应用抗生素静注，并将病牛安置到指定的诊疗区。4.6记录记录内容有区号、牛号、发病潮次、发病乳区，挤奶位、检测内容、预处理措施等。4.7注意事项二级和三级乳房炎牛只如果不尽早进行治疗，病情通常会进一步发展，产生慢性乳腺炎，症状包括乳腺坚实，硬质，纤维化增生，甚至有时发生化脓性瘘管或乳腺炎脓肿，更会引发交叉感染[10]。坏疽性乳腺炎：这类乳腺炎是急性而且是全身性的，致病菌为金黄色葡萄球菌或者厌氧性细菌。疾病急性，会短期突然出现乳腺的弥漫性肿胀，并且会产生剧烈的热痛，在仅仅24小时后，就会发现乳腺处发紫，颜色深，发病处的皮肤会坏死，触摸温度变凉，且会有捻发音，乳汁的异常表现为有气泡，伴随颜色变为深红，容导致败血症死亡。因这类疾病急性且后果严重，所以一旦出现类似的症状就要在第一时间予以上报和采取隔离，对相关触及到的物具与场所，用3%烧碱或0.5%过氧乙酸溶液实施喷洒消毒处理[11]。5进行实验室检测分析并对牛只做相应处理5.1仪器、药品5.1.1仪器恒温培养箱、二氧化碳培养箱、霉菌培养箱等、电子显微镜、立体显微镜、净化工作台、高压灭菌锅、磁力混匀器、磁力震荡器、酒精灯、接种棒等。5.1.2培养基血平板培养基、麦康凯培养基等。5.1.3试剂革兰氏染色液、兔血浆凝固酶检测试剂盒、其他。5.2方法步骤（1）准备待检样和提前准备的培养基，于37℃培养箱（或室温）恢复温度10-20分钟，微生物活性逐渐恢复。（2）对待检样和对应的培养基上的接种区域进行编号，确保编号匹配，并做记录。（3）将待检样按一个方向（顺时针或逆时针）进行混匀，然后使用一次性无菌棉签蘸取小量奶样进行接种，按顺序涂至血平板、麦康凯、支原体培养基所匹配区域。如果奶样不慎蘸取过多，应轻柔挤压多余奶汁于采样瓶口，而不能直接进行接种，防止接种后污染其他区域样品或者不慎滴落至其他区域，影响接下来的检测。接种时切忌不可将培养皿盖完全打开，以免污染培养基。严格按规定顺序接种。若忘记或已发错误操作，须更换棉签。（4）接种完毕后把培养基置于培养箱。同时应把检测样置于37±1℃的恒温培养箱中作为备用留样。将麦康凯和血平板培养基置于37±1℃的恒温培养箱中，初次观察在18-24小时后。支原体培养基则在37±1℃且含5-10%二氧化碳的二氧化碳培养箱中进行培养，首次观察支原体的生长应在48小时后，总培养时间为10天。如果首次观察麦康凯和血平板培养基发现并未出现明显菌落，则留取样品准备二次接种。并对已经进行过首次观察的培养基样品保持原有培养条件48小时，进一步观察。（5）菌落观察菌落大小：以菌落直径判定。形态：圆形、椭圆形，是否有突起等。颜色：白色、黄色、粉色、蓝绿色等。圆润性（光滑性）：光滑型、粗糙型。溶血性：α——不完全溶血、β——完全溶血、γ——不溶血。其他：对在麦康凯培养基生长粉红色菌落，初步判断为肠杆菌。通常金黄色葡萄球菌培养与血平板时表现为β溶血，不过若有其他因素影响或培养不充分时，此特性并不体现。沙门氏菌由于生长慢且培养后形成的菌落小，因而在培养后出现了菌苔也很难肉眼观察到。如果培养产生的菌落达到3种以上，表明操作或者采样的步骤发生了污染，无需继续监测，而应重新采样和培养。（6）染色、镜检、分类对不同细菌进行分别涂片，并革兰氏染色，接着在显微镜下进行观察。通过镜检分析，对细菌分为两大类：（1）呈现粉红色的细菌为革兰氏阴性菌，乳房炎产生的乳中这类细菌主要是大肠杆菌。（2）呈现蓝紫色的革兰氏阳性菌，乳房炎产生的乳中这类细菌主要是链球菌和葡萄球菌。（7）细菌的纯化。对于鉴别到的各种细菌按照其种类的不同进行菌落挑取，并接种于血平板培养，这一步能够实现细菌的纯化，在培养到没有杂菌时说明纯化已经成功。纯化的目的是确保接下来的生化鉴定结果更精准，无杂菌影响。（8）3%过氧化氢试验。这一步的目的是区分链球菌属和葡萄球菌属两类细菌。检验方法：分种类挑取1-2个在镜检中表现为革兰氏阳性的球菌菌落，涂于载玻片上并将一滴3%过氧化氢滴于其上，镜检观察。镜检结果的判断：（1）观察到气泡的产生，触酶试验阳性，说明所涂菌落是葡萄球菌属。（2）未观察到气泡，触酶试验阴性，说明所涂菌落是链球菌属。5.3金色葡萄球菌鉴定针对上述检测中判定为葡萄球菌的样品进行5.3.1兔血浆凝固酶试验检测方法：取检测试剂盒标准对照液、检测液各滴加一滴于检测板上，并在液体内各挑取1-2个待检菌落，用无菌棒轻轻搅动，混合均匀后，观察结果。判定方法：（1）对照液不发生凝固，检测液凝固，则判断为阳性，是金黄色葡萄球菌。（2）二者均不凝固，则判断为阴性。5.3.2甘露醇盐培养基选择性培养检测方法：挑取上述兔血浆凝固酶试验中的阳性细菌，将其接种到甘露醇盐培养基上，并在37℃的恒温培养箱恒温保持24小时，培养完成后进行观察判定：（1）如果生长的菌落颜色金黄，并能观察到甘露醇盐培养基的颜色也从原本的粉红转变到金黄，则证明所培养的细菌的产酸的，是金黄色葡萄球菌。（2）如果生长的菌落颜色金黄，却没有观察到甘露醇盐培养基的颜色改变，说明所培养的细菌属于其它葡萄球菌。（3）不是（1）的其他情况都说明所培养的细菌是非金黄色葡萄球菌。如图所示：图5-1葡萄球菌血平板生长完全溶血葡萄球菌完全溶血图5-2纯化培养葡图5-3葡萄球菌干甘露醇培养基生长黄色（图片来源：百度文库）5.4细菌鉴定实际应用乳房炎细菌鉴定分两类：1、致病菌：传染性病原菌。如无乳链球菌，停乳链乳球菌，金黄色葡萄球菌和支原体。2、环境性病菌原菌。如大肠杆菌，环境链球菌，肺炎克雷伯菌，产气肠杆菌，沙雷氏菌，变形杆菌。根据实验操作步骤，如下为海丰牧场6月份乳房炎细菌鉴定结果数据：表5-1海丰牧场6月乳房炎细菌检测月度汇总表（5.29-6.28）区域检测头数G+比率（%）G-比率（%）无菌生长比率比率（%）金黄色葡萄球菌比例（%）本月上月A1321321712.887959.853627.271B606323.334575.001321.67C555547.273869.091323.641D1391252417.277856.123726.624A63761219.053250.791930.16C1894892412.7012063.494523.813临床合计6386408313.0139261.4416325.5591.41链球菌比例（%）无乳链球菌比例（%）酵母菌比例（%）大肠杆菌比例（%）克雷伯氏菌比例（%）213611231123434394323121.8871.1000.0015724.6100.00如图反应：1、大肠杆菌比例较高。由于大肠杆菌及克雷伯氏菌均是环境型致病菌，防控要点：对垫料定期更换，尤其是现在使用烘干牛粪，需保证烘干牛粪的干物质达标。对牛床上牛粪的及时清理，保持卧床垫料的干燥性。2、该月临床乳房炎无菌生长总的比例为25.55%,比正常范围偏高。结合日常细菌培养结果，部分样品存在污染，需关注采样规范。3、该月临床乳房炎中致病菌是金黄色葡萄球菌,链球菌是传染性菌，防控要点：关注人员操作，设备清洗情况。保持人员操作规范，清洗设备卫生干净。5.5隐性乳房炎检测、判定：隐检1：加测定液。【检测液：奶样=1：1】隐检2：摇匀。【须让混合液旋转】隐检3：判定为+++。【反应呈胶冻状】隐检4：判定为+++图5-4图隐性乳房炎检测、判定以上为乳房炎外观症状，实验室针对乳房炎检测牛奶样，做细菌分离鉴定试验。5.6乳房炎牛的相应处理治疗区必须设置有相关区域，高致病菌隔离区、治疗区、停针区、缓冲观察区等。（2）实验室及时收集乳房炎牛只的奶样，落实检测，并及时将检测结果（报告），告知治疗区兽医。治疗区兽医根据奶台或其他部门所报乳房炎牛只（反馈表），认真核实牛只，及时、主动的跟踪实验室检测结果，并根据实验室检测结果，对牛只实施区域安置。一般致病菌牛只，安置在常规治疗区，实施日常治疗。高传染致病菌牛只必须安置到固定的隔离区，牛只禁止调出。（3）对于乳房炎康复牛只再次复发病情，需要具体分析牧场实际情况，同时实验检测时，需多次检测通过结果综合确定该牛只复发为何种致病菌。6乳房炎的治疗程序与疗程控制6.1总则（1）挤奶顺序是先给健康的奶牛挤奶，然后是可疑的奶牛，最后是给生病的奶牛挤奶。对有病的挤奶应妥善处理，严禁随意倾倒。受污染的手指、工具和田地应进行清洁和消毒。奶牛和组织不应混合以防止交叉感染。挤奶完毕后，对发病乳区必须将奶挤净。牛奶挤入集乳器内，集中处理[12]。（2）若作乳头管内注射药物时，必须使用专用消毒纸或酒精棉球消毒乳头。（3）在对牛只治疗时，必须实行一牛一针，并对注射部位用75°酒精棉球予以消毒。（4）抗生素选用，应结合实验室检测结果（和药敏试验）选择敏感药物进行治疗。（5）应用一种抗生素治疗2天后，对病症无任何改观时，应考虑选用其他抗生素，或重新采样做药敏试验。（6）在未作实验室检测的情况下，对仅为少量坏奶，而乳房组织及体温无变化的，谨用抗生素。（7）结合发病牛只的临床症状，对评定为二、三级的重症乳房炎牛，须选择抗炎镇痛解热类药（美达佳、福乃达）和抗生素，以及补液疗法。6.2治疗程序（1）“一级”乳房炎用药程序。对“一级”乳房炎牛只，先采用症状观察与实验室检测等待法。即该类牛只暂不予以用抗生素治疗，主要是在每潮挤奶时，加强对临床坏奶转变程度、乳房的变化观察，并等待实验室细菌培养检测结果，再用药敏敏感度高的抗生素实施治疗。有明显特征性症状的，可尽早使用抗生素[13]。治疗疗程：根据所选抗生素要求使用，连用3—5天。（2）“二级”乳房炎用药程序。在实验室检测结果未出来之前，需先进行注射抗炎镇痛解热药予以治疗，主要是肌注15ml美达佳或福乃达（氟尼辛葡甲胺），同时肌注庆大50ml。也可配以输液处理，取复方糖盐水500ml/瓶×3，5%碳酸氢钠500ml/瓶×1，VC10ml/支×5。根据实验室检测结果，选择相关药敏敏感度高的光谱抗生素治疗。治疗疗程根据所选抗生素使用要求，连用3—5天。（3）“三级”乳房炎用药程序。诊区兽医接到此类牛只，应及时对牛只进行全面检查，采用对症治疗，并及时安排人员予以输液和防继发感染处理。结合实验室检测结果，选择相关药敏敏感度抗生素治疗。全身用药：5%葡萄糖氯化钠500ml/瓶×4，5%VC10ml/支×5，氢化可的松20ml×5，美达佳或福乃达15ml，10%葡萄糖酸钙500ml/瓶×1，5%碳酸氢钠500ml/瓶×1，静脉注射，1次/天。实验室检测结果出来后选择相关药敏敏感度高的抗生素治疗，连用3—5天。必要时，可乳头管内注射治疗，使用一次性注射器，如泌乳通或乳炎康等。若3—4天用药后，已明显好转的，须继续治疗用药2—3天即可。治疗疗程：根据抗生素使用要求，连用5天。必要时延长2天。（4）对于本月内（或近期内）再次发病的牛只，用药治疗疗程，可延长1-2天。（5）久治不愈牛：正常以3-5天为一个治疗疗程，（特殊重症病例以一周为一个治疗疗程）。凡经2个疗程未能治愈的，判定为乳房炎久治不愈。兽医每周对乳房炎治疗牛进行梳理一次，凡经2个疗程以上用药未治愈的牛只，通报主管处理，对单乳区发病的，应视奶量、产犊、发病次数、乳房性状及致病菌状况，可实施永久性干奶处理（剪除发病乳区的乳头）。（6）乳房炎的牛只处理：急性坏疽性乳腺炎牛、慢性乳腺化脓性瘘管牛，乳腺巨大脓肿牛，2个乳区以上瞎奶，乳房炎久治不愈牛均应及时报牧场相关领导审核，列入计划淘汰范围。7其他乳房状况的处理7.1血乳的处理操作规程对血奶的评判：牛奶仅有微红的，为轻度血奶；若牛奶有明显的血红色，且呈鲜红色的，为严重血奶。轻度血乳的牛只，观察挤奶1-2潮，过后如果还未好的牛要肌注止血药30-40ml，严重血乳的牛只，应肌注止血敏30~50ml，静脉注射10%葡糖酸钙500ml，并做跟踪观察[14]。7.2乳头外伤处理方法（1）凡发现乳头或乳房有撕裂伤的，应视创面程度予以不同处理：（2）创面较小，浅表性的，对新鲜创用生理盐水、棉球清洗（可结合双氧水）干净，然后用2%碘酊涂敷即可[15]。（3）创面大于1cm，创口较深的，须做清创缝合处理。对新鲜创首先用生理盐水棉球清洗，结合双氧水将创面、及创缘污染物、血凝块进行认真清理，干净之后在进行酒精消毒，利用75%酒精进行擦拭，然后使用4-7号线系弯三角针缝合撕裂的创口，最后2%碘酊对缝合处进行涂敷。（4）术后应当确保乳头维持干燥，谨防微生物感染，如有需要可以利用导乳针对产乳牛进行放乳。如果牛只创面大，更应做好感染预防，可肌注青霉素3天，每天早晚两次。8结论奶牛出现乳房炎的致病微生物追溯起来，会发现致病的病原菌和微生物种类不特定。各种