专题五单元总体总结

选修一专题5课题1DNA的粗提取与鉴定DNA提取和鉴定的实验步骤破碎细胞，获取含DNA的滤液选取实验材料去除滤液中的杂质粗提取析出DNA提纯鉴定DNA去除滤液中的杂质粗提取DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％）（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水析出DNA提纯鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色鉴定DNA（2）观察丝状物呈什么颜色？答：白色10

不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入：①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？洋葱的鳞片叶表皮细胞取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。⑧DNA的鉴定专题5DNA和蛋白质技术课题2多聚酶链式反应扩增DNA片断.PCR原理⑴.在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。⑵.当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。⑶.PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。5.TaqDNA聚合酶的应用6.需要为PCR反应提供的物质缓冲液、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。循环数变性复性延伸第一次94℃，10min－－30次94℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次94℃，1min55℃，30s72℃，1minPCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸.靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’Taq

DNA聚合酶PCR循环第三步：引物延伸选修一专题5课题3血红蛋白的提取和分离知识总结血红蛋白的提取和分离蛋白质分子的差异性凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；分离血红蛋白溶液。（2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。↓↓↓（一）样品处理及粗分离1、红细胞的洗涤：

（2）目的：是去除杂蛋白（1）步骤：血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水→缓慢搅拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色（一）样品处理及粗分离（3）注意事项：洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高或时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。在蒸馏水和甲苯作用下搅拌，红细胞破裂释放2、血红蛋白的释放：蒸馏水的作用是加入甲苯的作用是充分搅拌的目的是使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂搅拌器转子磁力搅拌器搅拌器正在工作3.分离血红蛋白分离过程红细胞混合液中速离心10min离心管滤纸过滤脂类物质烧杯红细胞破碎混合液→中速长时离心（2000r/min×10min）→滤纸过滤除去脂质→分液漏斗分离出血红蛋白，得到红色透明液体。有机溶剂无色透明的甲苯层脂类物质白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液红色透明液体红细胞破碎物沉淀暗红色沉淀物20mmol/L磷酸缓冲液1mL1mL4、透析（粗提取）：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。目的：除去样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品中的缓冲液㈠凝胶色谱法（分配色谱法）1、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法3、原理：具体过程在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动琼脂糖凝胶电泳示意图6、点燃了的火炬不是为了火炬本身，就像我们的美德应该超过自己照亮别人。15、我的生活过得像钟表的机器那样有规则，当我的生命告终时，我就会停在一处不动了。6、如果你曾经把失败当成清醒剂，就千万别让成功变成迷魂汤。9、要想成功就是不怕困难，宽心做人，舍得做事，将赢的是整个人生。10、时间是个常数，但也是个变数。勤奋的人无穷多，懒惰的人无穷少。13、用冷静的目光去看待人世间的一切，才能活得坦荡，活得超然。10、容不得懦弱只能坚强。1、如果我们想要更多的玫瑰花，就必须种植更多的玫瑰树。1、扶危周急固为美事。能不自夸，则其德厚矣!19、如果要挖井，就要挖到水出为止。18、人生如烟花，不可能永远悬挂天际;只要曾经绚烂过，便不枉此生。1、别人讲我们不好，不用生气、难过。说我们好也不用高兴，这不好中有好，好中有坏，就看你会不会用?19、男人你要记住，不管对手有多强大，你都不能倒下，要记住你身后还有个你心爱的女人。9、若能像看别人的缺点一样，如此准确的发现自己的缺点，你的生命将会变的不平凡。5、不要因为一点瑕疵而放弃一段坚持，即使没人鼓掌，也要优雅谢幕，感谢自己的付出!8、据我测算，还可以退五十