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文档简介

核酸等温扩增技术同科生物培训核酸等温扩增技术主要包括：1.环介导等温扩增(Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)

2.依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequence-basedamplification，NASBA)

3.滚环扩增技术(Rollingcircleamplification，RCA)

4.单引物等温扩增技术(Singleprimerisothermalamplification，SPIA)

5.依赖解旋酶DNA等温扩增技术(Helicase-dependentisothermalDNAamplification，HDA)

6.重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)

7.链替代扩增(Stranddisplacementamplification，SDA)

环介导等温扩增(Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)

原理：基于靶基因3'和5'端的6个区域设计3对特异性引物，包括1对外引物、1对环状引物和1对内引物，3种特异引物依靠链置换BstDNA聚合酶，使得链置换DNA合成不停地自我循环，从而实现快速扩增。反应1h后可根据扩增副产物焦磷酸镁沉淀形成的浊度或者荧光染料进行判断扩增情况。此反应先形成哑铃状模板，进入循环扩增阶段，再进行伸长、循环扩增，共3个阶段。关键酶：链置换型DNA聚合酶扩增对象为双链DNA时，同时一条链解离的同时进行链延长LAMP法的引物设计LAMP法扩增所需要试剂：LAMP方法简本操作步骤依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequence-basedamplification，NASBA)

原理：它是一项以核酸序列中RNA为模板，由两个引物介导的、连续均一的特异性体外等温扩增核苷酸序列的酶促过程。整个反应由非循环相和循环相组成:首先进行非循环相，在AMV逆转录酶的作用下，引物I与模板RNA退火后合成cDNA，形成RNA/DNA杂合体，随即RNaseH降解RNA，引物Ⅱ与cDNA退火，合成第二条DNA互补链。形成的DNA双链由T7RNA聚合酶识别启动子序列，催化合成RNA，进入循环相，对模板进行大量扩增。

滚环扩增技术(Rollingcircleamplification，RCA)原理：以环状DNA为模板，通过一个短的DNA引物（与部分环状模板互补），在phi29DNA聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直接扩增DNA和RNA，还可以实现对靶核酸的信号放大，灵敏度达到一个拷贝的核酸分子，因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。因其高灵敏度、高特异性和可操作性，RCA技术在基础研究、实际检测、医疗诊断及纳米材料等方面都有很好的应用，结合细胞原位检测

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