生殖激素及其临床应用意义课件

性激素简介及其常见的检测方法

——qing.Yuan

2016-08-12生殖激素Reproductivehormone生殖激素(Reproductivehormone)是直接作用于升至活动，并以调节升值过程为主要生理功能的激素。生殖激素由内分泌腺产生，又称生殖内分泌激素。人体主要生殖激素：

促性腺激素释放激素（GnRH）

促黄体生成素（LH）

垂体生成

促卵泡生成素（FSH）泌乳素（RPL）雄激素性激素

雌激素

孕激素孕酮（PGN）雌二醇（E2）雌酮（E1）睾酮（TTE）下丘脑—垂体—性腺轴下丘脑Hypothaiamus促性腺激素释放素GnRH垂体PituitaryLH、FSHLH、FSH卵巢：E2、PGN 睾丸：TTE促精子发生、促男性第二性征出现负反馈负反馈一、促性腺激素释放素(gonadotropin-relasinghormone,GnRH)促性腺激素释放素是由10个氨基酸组成的多肽。主要分布于下丘脑的视前区、弓状核和结节区，促进腺垂体促性腺细胞合成和释放卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)。二、FSH、LH的生理效应及临床应用

FSH的生理效应女性：促进卵泡的生长和卵巢颗粒细胞的增生，与LH协同促使卵泡分泌雌激素（E2）。男性：作用于睾丸的支持细胞，促进精子成熟。LH的生理效应女性：促使卵巢排卵和黄体生成，促使黄体分泌雌激素（E2）和孕激素（PGN）。男性：刺激睾丸间质细胞分泌雄激素（TTE）。青春期前成人月经中期绝经期FSH（血清）2～12mU／mL4～20mU／mLNA＞40～200mU／mLLH（血清）2～12mU／mL4～20mU／mL＞30～200mU／mL＞40～200mU／mL女性FSH、LH含量的变化LH在男性中参考值:男性儿童：2.0～2.5U/L男性成人：3～30U/LLH、FSH临床意义FSH、LH增高常见于性腺原发性病变，常见有：多囊卵巢综合征卵巢功能早衰性腺发育不全原发性闭经原发性性功能减退曲细精管发育障碍完全性（真性）性早熟。LH、FSH分泌过低垂体或下丘脑性闭经不完全性（假性）性早熟脑垂体功能障碍-席汉氏症等。泌乳素RPL导致PRL过高原因有：1、垂体障碍2、甲状腺功能减退3、胸部创伤4、下丘脑肿瘤5、作用中枢神经系统药物可抑制泌乳素抑制因子释放PRL过高临床病症女性1、PRL过高可抑制FSH及LH的分泌，导致卵泡发育不良、排卵障碍2、Forbes-Albringt综合征3、催乳素瘤prolactin-producingtumor4、功能性下丘脑性闭经5、Stein-Leventhal综合征男性下丘脑-垂体-睾丸轴功能障碍，造成LH、FSH分泌减少导致生殖功能障碍-不育。性激素Sexhormone1、雌激素Estrogen

女性卵巢

男性睾丸激素转化雌激素

肾上腺皮质雌二醇E2（活性最强）雌酮E1雌三醇E3（活性最弱）降解雌二醇E2雌二醇（血清）参考值女性：卵泡期37~330pmo/L

排卵期367~1835pmol/L

黄体期184~881pmol/L男性：50~200pmol/L雌二醇E2水平降低：1、女性发育不全2、卵巢功能障碍：卵巢功能早衰、多囊卵巢综合症、完全或部分性葡萄胎、妊娠高血压综合症等。

3、下丘脑-垂体功能障碍：席汉氏综合征4、先天性肾上腺皮质功能不全（无脑儿、唐氏儿）雌二醇E2水平升高：

E2升高可导致颗粒细胞瘤、浆液性囊腺癌，女性多见于：性早熟、OHSS（卵巢过度刺激综合症）、卵巢功能性肿瘤等。在男性中可见男性女性化，肝硬化、SLE、冠心病、吸烟者的E2水平比较高。孕激素——孕酮PRLPRL临床意义

PRL增高常见于葡萄胎、糖尿病孕妇、肾上腺癌、库欣综合征、多发性排卵、原发性高血压、先天性17α-羟化酶缺乏症、先天性肾上腺皮质增生、卵巢脂肪样瘤等患者。

降低常见于排卵障碍、卵巢功能减退症、无排卵性月经、闭经、全垂体功能减退症、胎儿发育迟缓、死胎、严重妊娠高血压综合征等患者中。雄激素Androgen性激素又称男性激素，主要促进男性生殖器官成熟以及第二性征出现并维持正常性欲及生殖功能的激素。有睾丸酮（Testo）、二轻睾丸酮(DHT)、脱氢睾酮及脱氢表雄酮等，主要以睾丸分泌的睾酮为主。睾酮是对男性女性都很重要的激素，女性雄激素主要来源于卵巢和肾上腺皮质。雄激素——睾酮(TTE)睾酮生理作用1、对下丘脑-垂体具有调控作用；2、促进男胎儿性腺结构分化；3、促进性生理的发育以及第二性征的发育；4、促进蛋白质合成，从而使尿氮减少，呈现正氮平衡；5、维持正常的性功能；6、与雌激素共同作用控制女性剃毛的生长和分布。睾酮（T）的临床意义常用激素检测方法生物活性法01免疫法（CLIA、RIA、ELISA）02受体结合法03HPLC、GC-MS、LC-MS/MS04生物活性法：反应因素受生物反应性影响较大，趋于淘汰。受体结合法：受体结合竞争因需要复杂的受体制备，在临床常规检测中难以推广。免疫法：因为其拥有很高的选择性及很低的检测限，目前广泛应用在临床常规检测中。但是由于检测方法和检测试剂盒的不同，TSH、FSH、LH之间存在交叉抗原性，所以检测结果往往差异较大。质谱联用法：由于需要专门的仪器，以及繁琐的样品预处理程序，所以未能够在临床的常规检测中推广。A免疫法测定性激素CLIA优点1、灵敏度高：其灵敏度可达10-16mol/L(RIA为10-12mol/L).2、光信号持续时间长3、分析方法简便快捷4、结果稳定、误差小5、安全性好及使用时间长Radioimmunoassayorradioimmunoassay

放射免疫测定/放射免疫分析(Radioimmunoassayorradioimmunoassay，RIA)在放射免疫分析的实验中，加入超量的标记抗原*Ag与未标记抗原Ag（即：待测抗原）与较少量的抗体（Ab）竞争性结合。如果实验结果所计量到的结合物（*Ag-Ab）放射活性较高，表示待测物的浓度较低。如果所计量到的结合物放射活性较低，则表示待测物的浓度较高。藉由标准曲线图的分析，可以推算出待测物的浓度。RIA优点与缺点优点灵敏度高检出极限≤10ng特异性强，抗原-抗体免疫反应专一强应用范围广：应用于激素、蛋白质、药物等。操作简便缺点只能检测具有免疫活性的物质受多种生物因素影响竞争反应，被测物与标准误不能全部参与反应，测得值为相对量存在放射线敷设和污染酶联免疫吸附测定法（Enzyme

Linked

ImmunoSorbent

Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。抗原抗体反应：可逆性Ag+Ab→Ag·Ab

高度特异性-不需要分离待测物最适比例-Ag/Ab比例敏感性——高度敏感ELISA类型1、双抗体夹心法测抗原2、双抗原夹心法测抗体3、间接法测抗体4、竞争法测抗体5、竞争性测抗原6、捕获包被法测抗体7、ABS-ELISA法ELISA试剂的组成常见的组成如下：

已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

酶标记的抗原或抗体（结合物）；

酶的底物；

阴性对照品或阳性对照品，参考标准品；

结合物及标本的稀释液；

洗涤液；

酶反应终止液；加样A保温B洗涤C显色D比色EELISA操作步骤结果分析肉眼观察：显色为阳性，无色为阴性仪器测定：测OD值进行计算。临界值CO的计算：临界值=N×2.1N为阴性对照孔OD均值，N大于0.1时重新试验，小雨0.05时以0.05计算。结果判定：样品OD值/临界值CO≥1阳性

样品OD值/临界值CO＜1

阴性ELISA常用的酶和底物ALC-MS/MS检测内源性激素方法

除去临床常用免疫法，现在已经有很多实验室建立色谱质谱方法对内源性激素进行定性。定量分析研究。

高相液相色谱法HPLC气相色谱-质谱法（GC-MS）液相色谱-质谱联用法（LC-MS）气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)液相色谱-串联质谱法（LC-M/MS）

其中，GC-MS和GC-MS/MS要求被测组分具有挥发性、低沸点等较少用于人体内源性激素的测定。LC-MS多用于单一组别内源性激素的测定。LC-MS/MS则能够同时准确测定各内源性激素，并且具有高灵敏度、高专属性、分析速度快、应用范围广等优点，成为内源性激素测定首选方法。

LC-MS/MS测定内源性激素方法路线

一、样品预处理目的去除基质效应，主要方法有：PPT、LLE、SPE、超临界流体萃取法、红外辅助提取法等。基质效应是指样品中被分析物意外的组分对分析物的分析产生的显著干扰和影响，由共流出的分析物和基质的竞争以及影响接口的离子化效率所导致，主要来源于生物样品中的内源性组分和外源性杂质。包括：离子颗粒物、强极性化合物、有机化合物、和样品前处理引入的有机酸、缓冲液、流动相等。基质会影响测定方法的检测限、定量限、线性、准确度、精密度等。所以液质联用必须考虑基质效