化妆品 保湿功效的测定 鱼胚法_第1页
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文档简介

1化妆品保湿功效的测定鱼胚法本文件规定了化妆品保湿功效的测定鱼胚法的术语和定义、缩略语、试验材料、测定操作、计算结果、判定依据。本文件适用于化妆品的保湿功效测定评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。化妆品安全技术规范（2015版）3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4缩略语下列缩略语适用于本文件hpf：受精后小时（hourpostfertilization）5测定材料5.1测定用鱼本次测试所用斑马鱼为AB系斑马鱼。5.2主要测定仪器a)斑马鱼养殖单元。b)连续变倍体式显微镜。c)曲线控制生化培养箱。d)SQP万分之一电子天平。5.3主要测定材料氯化钠（2%）、透明质酸钠（0.2%）。5.3.1溶液配制——空白对照：标准稀释水称量NaCl（3.5g）、NaHCO3（0.2g）、KCl（0.05g）和CaCl2（0.1175g加入蒸馏水定容至1000mL，真空过滤器（孔径0.2μM）过滤，高压灭菌锅灭菌，常温备用。——模型对照组：2.0%氯化钠溶液称量1000.0mg的氯化钠于50.0mLEP管中，加入50mL的标准稀释水溶解。——阳性对照组：0.2%透明质酸钠称量10.0mg的透明质酸钠于10.0mLEP管中，加入10mL的2%氯化钠溶液溶解。——样品组：用2%氯化钠溶液配制溶液。26测定操作6.1测定设置空白对照组、模型对照组、阳性对照组和不同浓度的样品组，每组10尾。6.2随机挑选发育正常的72hpf野生型斑马鱼胚胎于载玻片上使其平躺，体式显微镜下局部拍取斑马鱼尾鳍长度（拍摄视野为尾鳍缺口处至整条尾巴），记为0min，之后各组分别采用此方法进行拍照处6.3将斑马鱼胚胎转移至96孔细胞培养板中，1尾/孔，每孔加入150μL溶液，置于28℃恒温培养箱孵育20min。20min后，将斑马鱼置于载玻片上使其平躺，体式显微镜下局部拍取斑马鱼尾鳍长度，记为20min，之后各组分别采用此方法进行拍照处理。6.4用ImageJ测量斑马鱼尾部长度。6.4.1导入要测量的斑马鱼胚胎照片，如图1。6.4.2选择直线工具，测量范围为尾鳍缺口处至整条尾巴，如图2。6.4.3从尾鳍缺口处按住鼠标左键画直线，直到尾巴末端（透明鱼鳍部分不要），如图3。6.4.4点击Ctrl+m，取length值为测量出来的尾巴长度。7计算结果按照公式计算斑马鱼尾部长度收缩率（%）使用GraphPadPrism8统计分析软件（或类似功能的

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