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文档简介
3dsMax效果图测试试卷单选题(每题2分,共100分)1如何关闭[轨迹栏]的显示__________。A通过[视图]菜单B通过[自定义用户界面]面板C通过[显示UI]菜单D通过[轨迹栏]右键菜单2如何将AutoCAD文件导入到3dsMax场景中________。A通过[合并]命令B通过[外部参照对象]命令C通过[外部参照场景]命令D通过[导入]命令3以下哪个工具,可以将场景中使用的贴图路径信息列成一个文件_________。A[摘要信息]工具B[归档]工具C[资源收集器]工具D[贴图/光度学路径编辑器]工具4保留原来场景的情况下,导入3DStudioMAX文件时应选择的命令是_________。A合并B替换C新建D导入5在3dsMax默认设置下,[限制到Y轴]的快捷键是_______。AF5BF6CF7DF86下列哪个命令可以用来输入扩展名为TRC格式的文件________。A[文件>打开]B[文件>合并]C[文件>导入]D[文件>外部参照对象]7在系统单位为[毫米]的场景中,导入以[英寸]为基本单位设置的CAD文件,应当如何设置尺寸最为合理_________。A先将3dsMax场景的系统设置改为英寸,再导入CAD文件。B先在AutoCAD软件中将CAD文件的尺寸单位转换为毫米,然后再导入到3dsmax中。C在3dsmax的[AutoCADDWG/DXF导入选项]设置面板中进行重缩放设置。D不用管,3D会自动识别更换单位8对样条线进行[轮廓]编辑修改应该在哪个子对象层级中进行________。A[顶点]B[线段]C[样条线]D[整个线对象]9以下一种可编辑修改器可以直接将对象进行网格平滑________。A[可编辑样条线]B[可编辑网格]C[可编辑多边形]D[可编辑面片]10使用布尔工具获取两个几何体重叠的部分应该选用哪种布尔运算方式________。A[交集]B[并集]C[差集]D[切割]11以下哪个修改器不能直接将二维图形对象转化为三维实体________。A[放样]B[噪波]C[倒角剖面]D[挤出]12以下一种可编辑修改器可以直接控制点对象的[Bezier]杆________。A[可编辑样条线]B[可编辑网格]C[可编辑多边形]D[可编辑面片]13一个3dsMax场景中最多可以有多少种材质_________。A24个B100个C256个D任意多个14在[标准材质]中以下哪个值是用来控制材质高光强度的________。A[高光级别]值B[光泽度]值C[柔化]值D[高光反射]值15关于[建筑材质]中的模板对以下哪些方面没有影响________。A[漫反射颜色]B[反光度]C[透明度]D[折射率]16以下关于[多维/子对象]材质的叙述不正确的是哪个________。A多维/子对象材质中的每个子材质都是一个完整的材质。B多维/子对象材质可以设定无数个子材质。C当删除该多维/子材质时,其所有子材质也会一同被删除。D多维/子对象材质不能再嵌套更多的多维/子对象材质17[不透明度]的百分比值为______时,对象是完全透明显示。A0B30C18材质编辑器[明暗器基本参数]卷展栏中,哪种明暗器适合建立弧形表面的椭圆形的高光,可以用于产生磨沙金属或头发的效果_________。A[各向异性]B[Phong]C[金属]D[Blinn]19表现室内日景效果时,窗玻璃通常应具有以下哪种效果_________。A有轻微反射B有强烈折射C没有反射D有强烈反射20下列选项中不属于材质类型的是_______。A光线跟踪B位图C虫漆D双面21表现室内夜景效果时,通常窗玻璃应具有以下哪种效果_________。A具有强烈的反射B具有强烈折射C没有反射D没有折射22如果给一个几何体增加了UVWMap编辑修改器,并将U向平铺次数设置为2,同时将该几何体贴图通道的坐标卷展栏中U向平铺次数设置为3,哪么贴图的实际重复次数是几次__________。A2B3C5D623对复杂的角色模型进行贴图编辑,比较适合的贴图工具是_______。A[UVW贴图]B[UVW展开]C[贴图缩放器]D[蒙皮]24以下哪些灯光是没有目标点的________。A泛光灯B自由点光源C自由平行光D目标聚光灯25下列说法中正确的是_______。A[高级光线跟踪阴影]可以对阴影的生成方式进行微调,不支持透明贴图。B[区域阴影]可以产生一个有半影区域的阴影,只支持不透明度贴图。C[光线跟踪阴影]可以产生真实的阴影,只支持不透明度贴图。D以上说法都不正确。26下列关于灯光类型的描述,其中不正确的是________。A[mr区域泛光灯]只适用于mentalray渲染器B[天光]可以控制灯光的发光范围C[自由聚光灯]产生锥形的照射区域D[自由平行光]产生平行的照射区域27关于[天光]的描述,下列说法正确的是________。A如果使用mentalray渲染器渲染,[天光]照明的对象只能显示为黑色。B[天光]不可以投射阴影。C[天光]可以用来模拟日照效果。D[天光]不能和其他[标准灯光]一起使用。28下列选项中,哪些不属于标准灯光_________。A[目标聚光灯]B[目标点光源]C[天光]D[泛光灯]29在生成预览面板当中,“帧速率”项目下有个“播放FPS”的参数设置,它的具体意义是_______。A场景中动画物体的运动速率。B场景的帧速率(制式)。C当前预览文件的帧速率。D以上全部。30勾选了摄影机“剪切平面”参数的“手动剪切”项之后,调节“手动剪切”数值将会________。A影响场景中雾的范围B影响沿摄影机所注视方向的可渲染范围C影响摄影机的景深效果D影响摄影机的运动模糊效果31以下有关粒子的描述哪些说法是错误的________。A粒子不能被赋予材质。B粒子必须使用特殊的材质而不能使用标准材质。C粒子只能使用标准材质。D粒子可以支持所有3dsMax自带的材质类型。32[抗锯齿过滤器]在渲染面板的哪个选项卡中_______。A[公用]选项卡B[渲染器]选项卡C[高级照明]选项卡值D[光线跟踪器]选项卡33在工具栏中有些按钮的右下角有个三角形标记,它所代表的含义是________。A表示该按钮必须在有对象处于选择状态时才可使用。B表示该按钮同时具有多个功能。C表示该按钮是此版本的新增功能。D表示按住这个按钮稍停片刻后,会弹出各种相关的隐藏工具。34当主工具栏的某些工具按钮不能完全显示时,让其显示出来的最快捷方法是________。A重新启动3dsMax软件。B安装最新版本的3dsMax软件。C删除3dsmax.ini文件后重新启动3dsmax软件D依据实际情况提高屏幕的分辨率。35关于3dsMax插件下列说法错误的是_______。A所有的3dsMax插件都应安装在3dsMax根目录下的plugins目录下。B3dsMax的插件一般都是由不同的公司进行开发的,主要为3dsMax开发插件的公司有Digimation、Chaosgroup、Afterworks等。C常见的3dsMax插件有V-Ray渲染器、Brazil巴西渲染器等。DCebas公司的插件一般放在3dsMax根目录下的Cebas目录下。363dsMax中每安装一个插件,都会占去一部分资源,因此在3dsMax中提供了插件的选择加载控制,可以有效地控制各插件的使用,它在3dsMax的位置在_________。A[自定义(Customize)]菜单>[配置系统路径(ConfigureSystemPaths)]B[自定义(Customize)]菜单>[配置用户路径(ConfigureUserPaths)]C[工具(Utilities)]命令面板>[文件链接管理器(FileLinkManager)]D[自定义(Customize)]菜单>[插件管理器(Plug-inManager)]37以下对帧速率叙述错误的是_____。AFPS是指1帧播放所用的时间。B3dsMax中可以自定义帧速率。C电影的帧速率一般为24FPS。D中国所用的电视制式为PAL制。38以下关于3dsMax中[帮助(Help)]说法错误的是______。A[帮助(Help)]提供了最详细的教学范例。B[帮助(Help)]中可以通过搜索功能,快速找到所需查找的内容。C[学习影片(LearningMovies)]可以在安装3dsMax软件后的第一次启动时显示出来。D在[关于3dsMax(About3dsMax)]中可以查看当前3dsMax的版本信息39物体在视图中以实体方式显示时,如果想让其同时显示线框可以使用的快捷键是_______。AF2BF3CF4DF540下面关于[帮助(Help)]菜单说法错误的说法是______。A[帮助(Help)]菜单可以对3dsMax2009提供软件激活选项。B可以查看当前3dsMax的版本信息。C可以更改界面UI设置方案。D可以提供3dsMax的索引和搜索信息。41执行菜单[视图(Views)]>[视口背景(ViewportBackground)]>[视口背景(ViewportBackground)])命令,可以为当前激活视图设置背景图,如果希望背景图跟随视口同时进行缩放和平移,则需要在[视口背景(ViewportBackground)]面板中设置的选项有?A[匹配视口(MatchViewport)]、[显示背景(DisplayBackground)]B[匹配位图(MatchBitmap)]、[显示背景(DisplayBackground)]、[锁定缩放/平移(LockZoom/Pan)]C[匹配视口(MatchViewport)]、[显示背景(DisplayBackground)]、[锁定缩放/平移(LockZoom/Pan)]D[使用环境背景(UseEnvironmentBackground)]、[显示背景(DisplayBackground)]42[安全框(SafeFrame)]的作用是提示制作的有效范围。[安全框(SafeFrame)]有3个线框范围,分别是最外面的黄色线框、中间的青色线框和内部的橙色线框,三种线框依次对应的是_________。A[活动区域(LiveArea)]、[动作安全区(ActionSafe)]、[标题安全区(TitleSafe)]B[动作安全区(ActionSafe)]、[标题安全区(TitleSafe)]、[活动区域(LiveArea)]C[活动区域(LiveArea)]、[标题安全区(TitleSafe)]、[动作安全区(ActionSafe)]D[动作安全区(ActionSafe)]、[活动区域(LiveArea)]、[标题安全区(TitleSafe)]43以下不能通过[视口配置(ViewportConfiguration)]面板进行设置的项目是_______。A[渲染方法(RenderingMethod)]B[布局(Layout)]C[时间配置(TimeConfiguration)]D[安全框(SafeFrames)]443dsMax中的默认照明灯光最多能设置几盏?A1盏B2盏C3盏D4盏45[文件(Save)]菜单下的命令可以将当前文件另外保存一份,同时仍然继续编辑当前文件?A[保存(Save)]。B[另存为(SaveAs)]。C[保存副本为(SaveCopyAs)]。D[保存选择对象(SaveSelected)]。46创建阵列的正确步骤是?①从[工具]菜单中选择[阵列]工具;②选择正确的坐标系和变换中心;③选择要阵列的一个或多个对象;④在阵列对话框中设置阵列参数,设置好后单击[确定]按钮。A2314B3214C1234D312447以下有关[间隔工具(Spacing)]的描述正确的是?A使用[间隔工具(Spacing)]进行复制应用后,如果对结果不满意,可以再次打开B[间隔工具(Spacing)]对话框进行调节。C使用[间隔工具(Spacing)]所拾取的路径可以是包含多个样条曲线的合成图形。D[间隔工具(Spacing)]复制得到的物体必然存在着关联,即对其中任何一个物体进行修改,都会影响到其它物体。使用[间隔工具(Spacing)]进行复制时,一定会在路径的起始点上产生物体。48以下关于[置换]修改器的说法不正确的是_____。A[置换]修改器要求被置换物体有足够的分段数以表现细节。B[置换]修改器只能识别贴图的灰度信息。C[置换]修改器可以将一个图像映射到三维对象表面,根据图像的灰度值,对三维对象产生影响,白色部分凸起,黑色部分凹陷。D[置换]修改器的贴图有五种贴图Gizmo可以使用,分别是[平面]、[柱形]、[球形]、[长方体]、[收缩包裹]。49以下有关[噪波]修改器描述错误的是_____。A通过调节[种子]值,可以使噪波随机产生不同效果B勾选[分形]可以使噪波效果更剧烈C为平面对象添加[噪波]修改器可以制作山脉、水面等D噪波动画需要手工设置关键点才能产生50下面关于[放样(Loft)]工具说法错误的是_____?A创建放样对象之后,可以添加并替换横截面图形或替换路径。B可以更改或设置路径和图形的参数动画。C可以对截面图形设置动画。D不可以将放样对象转换为多边形。答案:1-5CDBAB6-10CCCCA11-15BADAA16-20DAAAB21-25ADBAD26-30BCBCB31-35DBDDA36-40DAACC41-45BACBC46-50BBDDD免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是:当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时,形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下,自液相析出,形成微粒,使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时,形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加,反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照,即可计算出检样中抗原的含量。抗体(Ab)与可溶性抗原(Ag)反应,形成一定结构的免疫复合物,成为悬浮于反应溶液中的微粒。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质,可用仪器检测,提高了检测的速度、灵敏度和易操作性。免疫比浊测定注意事项:1、抗原或抗体量大大过剩,可出现可溶性复合物,造成误差。2、应维持反应管中抗体蛋白始终过剩。3、易受到脂血的影响。分类1.免疫透射比浊法抗原抗体结合后,形成免疫复合物,在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时,可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多,光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值,复合物的含量与光密度值成正比,同样当抗体量一定时,光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便,但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度,否则就难以测出。2.免疫散射比浊法一定波长的光沿水平轴照射,通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子,光线被粒子颗粒折射,发生偏转,光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比,即待测抗原越多,形成的复合物也越多,散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素,如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。3.免疫胶乳比浊法胶乳比浊法即是将待测物质相对应的抗体包被在直径为15-60nm的胶乳颗粒上,使抗原抗体结合物的体积增大,光通过之后,透射光和散射光的强度变化更为显著,从而提高试验的敏感性。实验八免疫比浊法测定C-反应蛋白【原理】血清C反应蛋白(CRP)与试剂中抗人CRP抗体结合,形成免疫复合物,一起吸光度增加,在波长340nm和700nm处测定免疫复合物浊度。根据吸光度增加量,即可定量检测血清中CRP的含量。【试剂】1.0.1mol/L的Tris缓冲液。2.羊抗人CRP抗血清。3.CRP定标液。【操作步骤】见表8-1。表8-1免疫比浊法测定C反应蛋白操作步骤加入物空白管标准管测定管血清标本(μl)--15CRP定标液(μl)-15-生理盐水(μl)15--缓冲液(μl)350350350混合,于37℃读各管吸光度(A1340、A1700)抗人CRP抗血清(μl)505050混合,于37℃读各管吸光度(A2340、A2700)【计算】HDL-C含量(mmol/L)=×标准液浓度⊿A=(A2340-A2700)-(A1340-A1700)【参考范围】血清C反应蛋白<4mg/L(各实验室应有自己的参考范围)【注意事项】1.使用新鲜血清,并尽可能快地检测。2.试剂不能冷冻保存。【临床意义】CRP是一种急性相蛋白,肝脏是其主要的合成器官。最近研究表明,人体其他部位如冠状动脉平滑肌细胞、神经元细胞、血管内皮细胞、脂肪细胞、肾小管上皮细胞等在炎症刺激或病理状态下都能合成和分泌CRP。正常情况下,CRP以微量存在于健康人的血清中,但在机体有细菌感染、组织损伤、肿瘤形成等急性相刺激时,CRP水平可升至正常的100倍甚至更高。测定CRP对于鉴别感染、监测疾病活动情况及严重程度、器质性疾病的筛检、监测器官移植受体排斥反应及疗效观察、冠心病等急性血管意外事件的预测与诊治等有很好的导向作用。【评价】CRP的检测方法从灵敏度较低的免疫扩散法、火箭电泳法、胶乳凝集试验到高灵敏度、高精密度的放射免疫、酶免疫、免疫比浊等定量试验。多数情况下,半定量的胶乳凝集试验适合于筛查,但其影响因素多、灵敏度较差和不能精确定量。对于需作较精确的CRP定量测定,免疫浊度法较为合适。其他方法如ELISA、免疫发光法和化学发光法虽然灵敏度和精确度都较高,但其成本也较高,故不是理想的临床实验室的常规方法。1材料与方法1.1兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳的制备1.1.1兔抗人白蛋白抗体的制备采用25%人血浆白蛋白注射液,按常规免疫新西兰纯种白兔,获得兔抗人白蛋白免疫血清(效价1:32),经饱和硫酸铵沉淀后,过DE-52层析柱,IgG峰部洗脱液用Follin酚法于540nm处定量测定IgG蛋白含量,并用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳鉴定,仅出现一条区带。1.1.2兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳的制备取10%羧化聚苯乙烯胶乳悬液(军事医学科学院动物中心产品,Φ=0.6μm),用pH8.2甘氨酸缓冲液(GBS)稀释成1%浓度,将其于兔抗人白蛋白IgG按适当比例混合,以常规物理吸附法致敏胶乳[2]。1.2敏感性试验取25%人血浆白蛋白20μl,加入生理盐水180μl,再经系列稀释成10个浓度,其浓度范围在25mg/ml~3.125ng/ml之间,用兔抗人免疫羧化胶乳做3次重复检测。1.3特异性试验将牛、马、羊、豚鼠血清分别稀释至5%、2.5%和1.25%,用兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳检测。1.4重复性试验用四批兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳,对5份粪微量白蛋白阳性粪便标本和2份已知浓度白蛋白溶液平行检测,并在有效期内用同一批免疫羧化胶乳先后7次重复检测,同时设阴性对照。3讨论兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳试剂对粪微量白蛋白的检测,是针对粪便中由于病变部位出血后的血浆蛋白,或组织渗出液中的白蛋白。而检测粪微量白蛋白作为大肠肿瘤的筛检手段之一,最早是在1987年,日本中山拓郎等曾用ELISA法对粪潜白蛋白(Occultalbmin)进行定量检测,并认为其敏感性优于便潜血。1993年,我们制备和建立了兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳试剂和反向胶乳凝集试验,检测了378例已知患者和正常人粪便标本,其临床结果显示:56例大肠癌诊断敏感性55.4%,特异性82.6%;132例正常人阳性率17.4%。近来我们增加了已知患者数量,重新检测了161例正常人粪微量白蛋白,结果表明:在增加受检人数后,提高了大肠癌的诊断敏感性(76.8%),而特异性则无显著差别(80.0%);161例正常人阳性率为19.2%,比原来的132例正常人阳性率高1.8%。实验结果显示:在受检人数增多的情况下,用该试剂检测粪微量白蛋白可能会达到提高诊断敏感性,保持特异性的良好效果。C-反应蛋白检测试剂盒(全量程)试制工作总结
一、概述C反应蛋白(C-reactiveprotein)是一种能与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白,半衰期19小时;血清CRP由肝脏合成,白细胞介素1b、6以及肿瘤坏死因子是其合成的最重要的调节因子;CRP的分子量为105500,由含有五个相同的未糖基化的多肽亚单位组成,每个亚单位含有187个氨基酸,这些亚单位间通过非共价键连结成环状的五聚体,并有一个链间二硫键。
1930年,Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C-多糖发生特异性沉淀反应的物质。1941年,Avery等测知它是一种蛋白质,故称为C反应蛋白(CRP)。1944年,Jones将其作为临床风湿热诊断标准的次要指标之一。后来,人们在非感染性疾病和感染性疾病患者的急性期血清中都测到了CRP,于是人们认为,CRP是组织损伤的一种非特异性反应。进一步研究发现:病毒或细菌感染、梗塞、免疫复合物沉积等因素都可导致组织损伤。在组织损伤的急性期,肝脏合成的一些血浆蛋白显著增加,这些蛋白质通称为急性时相蛋白,其中CRP是急性时相蛋白中变化最显著的一种。CRP在正常人血清中其含量极微;在组织受到损伤、炎症、感染或肿瘤破坏时CRP可以在数小时内急剧上升,可增高数倍或数百倍,2-3天达峰值,待病情改善时逐渐下降,恢复正常。CRP被广泛应用于临床疾病的早期诊断及鉴别诊断,其升高可见于:1、组织损伤、感染、肿瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎症性疾病,如风湿性关节炎、全身性血管炎、多肌痛风湿病;2、术后感染及并发症的指标:手术后病人CRP升高,术后7—10天CRP水平应下降,如CRP不降低或再次升高,提示可能并发感染或血栓栓塞;3、可作为细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断:大多数细菌性感染会引起患者血清CRP升高,而病毒性感染则多数不升高。
超敏C反应蛋白(HighsensitivityC-reactiveprotein)与CRP并不是两种蛋白,只是从灵敏度上加以区分,超敏C反应蛋白(Hs-CRP)最低检测限达0.1mg/l;原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关,大量研究资料表明,动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程,;Hs-CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关,是一项独立的危险因素;HS-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血有较高的灵敏度但线性较低,这样就出现了一种试剂两种名称,用途也有所区别;近几年来,随着检验技术的发展,开始出现了一种全量程CRP,这种CRP即能满足较高的灵敏度,又能满足较高的线性,如日本一化,申索佑福等,我公司通过与中科院上海生物研究所合作,近期已完成全量程CRP的试制,经公司自检与医院试用,结果表明与免疫散射比浊法一致性好;公司已计划于近期完成临床与注册,正式推向市场;二、国内外研究情况2.1临床研究CRP作为一种急性时相反应蛋白,被广泛应用于临床。2.1.1用于细菌和病毒感染的鉴别诊断当细菌感染引发炎症,在炎症进程开始4~7小时就可开始升高,且升高的幅度与细菌感染的严重程度相一致,病毒感染时CRP不增高,以此鉴别感染的性质,指导临床治疗,减少不管疾病的独立危险因素,检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用而被临床重视。流行病学调查也显示,hs-CRP水平升高者发生急性脑卒中的几率是正常健康人的2倍,发生心肌梗死的几率是正常者的3倍。2003年欧洲高血压防治指南(ESH/ESC)正式推荐,高血压患者需检测hs-CRP水平。
目前国内用于全自动生化仪的免疫透射比浊法试剂CRP出现了两种(普通CRP与超敏CRP),普通CRP有较高的线性但灵敏度不好,超敏CRP必要的抗生素治疗,有效防止抗生素的滥用。这些感染临床上常见于肺炎、支气管炎、咽喉炎、细菌性脑膜炎、伤寒、化脓性关节炎、尿路感染、骨盆炎、阑尾炎等等。在鉴别细菌或病毒感染方面,比白细胞计数及分类计数更准确,特别是老年人,免疫系统反应顺应性下降,可能有感染发生但临床上并无发热、白细胞升高等情况,此时检测CRP有助于检出细菌感染。2.1.2肿瘤监测CRP的测定用于肿瘤的治疗和预后:CRP术前上升,术后下降,不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响,有助于临床评估肿瘤的进程。2.1.3监控病情变化及术后感染,并用于抗生素疗效观察CRP在血中升高的幅度与感染的程度正相关。有研究表明,术后6小时左右,CRP开始升高,如无并发症应在术后三天下降直至正常,如术后出现感染,则CRP长时间不下降;术前CRP升高者,术后感染率也远高于术前CRP不高者。对于烧伤病人,可检测CRP以警示是否发生败血症,以便及时应对治疗。对疑有败血症的新生儿,在24~48小时内作CRP的动态监测,可作为是否停止抗生素治疗的可靠依据,而血培养的时间则需更长,培养结果出来之前无法排除败血症。对细菌感染作抗生素治疗时,动态检测CRP是必要的,它比临床体征更早作出并发症警报和治疗效果的判定,在粒细胞缺乏症或机体免疫状态抑制时更有临床意义。2.1.4用于评估急性胰腺炎的严重程度入院时CRP>110mg/l,可能是出血性胰腺炎(临床灵敏度88%,特异性94%);当CRP>250mg/l时,可提示为广泛性坏死性胰腺炎。2.1.5风湿病类风湿性关节炎患者CRP与疾病相关性较大,比临床症状出现要早4-6周。2.1.6肺部感染肺炎在年老人群中较难诊断,通常不大有发热。在许多情况下CRP>100mg/l,提示细菌感染,如肺炎或化脓性支气管炎。典型的病毒性肺炎不会超过50mg/l。2.1.7儿科感染性疾病:在儿童急性淋巴细胞白血病常发性细菌败血症,CRP超过100mg/L,则视为有细菌感染;儿童CRP细菌性脑膜炎时平均195mg/L,而病毒性脑膜炎则低得多。
2.1.8肾脏移植排异
移值后8天CRP下降至正常,如发生排斥反应则血清肌酐、尿氮、CRP皆升高。CRP升高在排斥反应发生之前4天出现。但是,感染也可发生CRP升高,要注意两者鉴别。2.1.9心血管疾病随着检验技术的发展,原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关,大量研究资料表明,动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程,;CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关,是一项独立的危险因素;①
未来发生心血管疾病发病率和死亡率的预测指标Hs-CRP是健康人未来发生心血管事件一个有价值的预测指标,许多研究证实Hs-CRP能预测首次心肌梗死和疾病的发作,内科健康研究(PHS)显示,Hs-CRP位于最高四分位数的病人未来发生卒中危险增加2倍,未来发生心肌梗死危险增加3倍,未来发生周围血管疾病的危险增加4倍。这种预测作用长期稳定存在于吸烟和非吸烟者中,且独立于其他危险因素。Hs-CRP是已知CHD病人未来心血管病发病和死亡的预测指标,欧洲ECTA研究组的资料显示,稳定性心绞痛(SAP)和不稳定性心绞痛(UAP)病人Hs-CRP浓度每升高一个标准差,非致命性心肌梗死或心脏性猝死的相对危险增加45%。②
急性冠脉综合症(ACS)的预后指标Hs-CRP测定对ACS的预后价值,首先是在急性局部缺血和不稳定心绞痛的病人中提出的,重度不稳定型心绞痛(UAP)病人入院时若Hs-CRP≥3mg/l比Hs-CRP﹤3mg/l者心绞痛复发、冠状动脉血管置换术、心肌梗死和心血管疾病致死等心血管事件发生率高;出院时测Hs-CRP比入院时测能更好的预测90天的不良后果;检测Hs-CRP有助于鉴别心肌钙蛋白(cTn)阴性而病死率增高的病人,应联合合使用cTn与Hs-CRP来评估ACS危险程度,ACS病人入院时Hs-CRP≥5mg/l与半年内严重心脏病发病率升高相关,而不管cTn值如何。③
与TC/HDL-C联合预测冠心病危险在冠心病的危险性研究评估时,Hs-CRP与血脂指标是独立的变量,将两者同时检测并联合分析,在诸多变量分析过程中,记录诸多冠心病危险因素如肥胖\高血压\糖尿病\冠心病家族史等,各种生化指标中仅Hs-CRP与TC/HDL-C有单独的预测价值,两者联合意义更大。
2.2国内外试剂盒发展CRP的测定方法较多,一般分为定性与定量两种。定性方法有:用纯化了的肺炎球菌C-组分与病人血清反应的沉淀法、肺炎球菌荚膜肿胀试验、特异性抗血清与CRP反应的毛细管沉淀试验、补体结合试验、乳胶凝集试验、乳胶扩散沉淀试验等,但它们的灵敏度低,只用于定性检测。定量检测的有:放射免疫(RIA)、荧光免疫(FIA)、酶标免疫(ELISA)、速率散射比浊法(INA)、胶乳增强透射比浊法(ITA);定性与定量相结合的方法有:快速检测卡结合仪器法;其中放射法对人伤辐射伤害较大,已较少使用,荧光免疫(FIA)或化学发光需专用仪器且成本高,ELISA法多数为半自动操作,出结果慢,不适合批量检测;速率散射比浊法(INA)需与比浊仪搭配使用,增加了仪器成本;快速检测卡结合仪器法只是半定量试剂,不能准确定量;胶乳增强透射比浊法(ITA)是目前医院较多使用的方法之一。目前国内有两种试剂,即普通CRP与超敏CRP,一个项目,两种试剂,给用户带来了不便;随着检验技术的发展,近几年已出现了一种即有高线性又有高灵敏度的试剂,即全量程CRP,目前国外已有Orion公司、日本一化,申索佑福等公司推出了此种试剂,我公司通过与中科院上海生物研究所合作,近期已完成全量程CRP的试制,经公司自检与医院试用,结果表明与免疫散射比浊法一致性好;公司已计划于近期完成临床与注册,正式推向市场;全量程CRP即有普通CRP的高线性,又有超敏CRP的高灵活敏度,因此,CRP即可作炎症标志物,也可用作Hs-CRP用于心血管疾病的预测与预后。三、试制过程目前,测定CRP的方法有很多,定性或半定量方法由于不是准确定量,已较少使用;定量方法放射免疫(RIA)、荧光免疫(FIA)、酶标免疫(ELISA)、速率散射比浊法(INA)、胶乳增强透射比浊法(ITA)等中以后两种使用较多;目前国外已有Orion公司、日本一化,申索佑福等推出了胶乳增强透射比浊法试剂,国内大多为进口试剂,我公司通过与中科院上海生研所合作,已完成小样制备,并计划于近期报批上市。3.1原理与试剂成份血浆中的CRP与试剂中胶乳包被的特异性抗体相结合,形成抗原抗体复合物产生混浊;在一定的抗体浓度范围内,其浊度高低与血清CRP含量成正比。通过测定特定波长的吸光度值,查标准曲线即可求出血清中CRP的含量。试剂成份:磷酸盐100mM表面活性剂复合抗体当光线通过个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收了一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。因有抗原抗体反应,固称为免疫透射比浊法,为增强灵敏度,采用胶乳增强免疫比浊法。抗原与抗体在一定条件下才能形成复合物,一定条件包括:①
抗体的要求抗体要求效价高(保持高线性),纯度高(如不纯,则有可能含其它抗体而有非特反应从而导致结果偏高),亲和力要强(亲和力强生成的抗原抗体复合物才稳定,不易解离)②
抗原抗体比例要求免疫复合物形成有三个阶段,第一阶段是形成抗原抗体复体物,第二阶段是复合物交联形成大网格结构,第三阶段是复合物聚合而形成沉淀。只有在抗体过量时,其浊度才会随着CRP的增加面增加,若抗原过剩则会出现HOOK效应而导致结果偏低而不准;③
促进剂与稳定剂一般要求溶液中有非离子性亲水性多聚体促进免疫复合物的形成,如PEG6000,含量3-4%。④PH一般在6.5-8.0之间,过酸过碱均会破坏试剂中抗体与样本中的抗原。3.2胶乳的选择与制备
由于测定用的波长与粒径大小有关,因此粒径的均一性是影响测量精密度与均确度的一个重要因素。公司选用聚苯乙烯胶乳,聚苯乙烯胶乳用乳液聚合法制备小分子纳米(25-50nm),采用微孔过滤技术,保证颗粒大小的一致性,小分子纳米颗粒较一般颗粒(100-300nm)颗粒更小,不易发生自沉;过滤后的胶乳进行羧化,使羧基均匀分布于胶乳的表面。再把羧化的胶乳与D-二聚体抗体结合,结合方式包含物理吸附与化学交联两种,以增强抗原捕获能力,缩短反应时间,整过反应过程在3-5分钟内结束,且化学交联后形成的抗原抗体复合物更紧密,不易解离,结果更准确,精密度更好。表一、小分子纳米技术与化学交联技术应用后的D-二聚体的精密度与准确度
XSDCv(%)批内(n=20)1.50.064.0012322.44批间(n=20)1.40.053.571231.61.30
靶值测量值偏差相对偏差质控12.02.150.157.5%质控2109.620.383.8%质控3136138.52.51.84%胶乳粒子在100-300nm时,胶乳颗粒易自沉,造成瓶间差批间差过大,而且由于粒径过大,造成反应为非均相反应,CV变异较大,我公司采用创新的小分子纳米技术,大大的延长了定标有效期,缩小了瓶间差与批间差,为真正意义上的均相反应。表二、胶乳粒径与定标有效期、瓶间CV、批间CV等关系胶乳粒径(nm)定标有效期(天)是否均相反应是否自沉100-3007-14非均相自沉25-5028均相均相分布,不自沉
批内CV(%),N=20瓶间CV(%),N=20批间CV(%),N=20100-3004.55.56.825-502.83.04.1普通胶乳只通过物理吸附抗体,形成共价交联,共价交联结合相对不牢靠,而且吸附的抗体较少,会造成试剂线性偏或灵敏度低;我公司采用物理吸附的共价交联与化学交联相结合技术(化学交联通过缩合剂炭化二亚胺将胶乳上的羧基与交联物上的氨基缩合在一起),大大提高了试剂的稳定性与灵敏度;表三、不同交联胶乳试剂灵敏度与试剂稳定性共价交联稳定6个月灵敏度较低反应慢,复合物不太稳定化学交联稳定9个月灵敏度高反应快,复合物稳定共价+化学交联稳定12个月灵敏度高反应快,复合物很稳定
3.3抗体的选择与纯化抗体的纯度对测定的特异性有直接影响。不纯的抗体将导致非特异反应,引起结果假性升高,测量值不准等情况。因此必须采用单克隆抗体与亲和层析技术纯化的抗体,并用SDS鉴定纯度,如出现多条电泳带,则多明杂蛋白较多,需更进一步纯化;
公司CRP抗体采用羊抗人多克克隆抗体与鼠抗人单克隆抗体的复合抗体,采用山羊或鼠体内诱生法产生,产生的腹水用滤纸过滤,去除脂质与大颗粒,再用离心的方法去除细胞碎片和大的蛋白质,制成粗抗体;将粗抗原或纯化抗原交联到琼脂糖珠SEPHAROSE4B制成亲和层析柱,将粗抗体通过亲和层析柱,洗去未结合的非特异性蛋白,再用硫氰酸钾洗脱,洗脱流出液即为纯的多克隆抗体。抗体的效价:要求效价至少大于1:16,效价为抗体能引起浊度变化的最大稀释倍数,公司采用的复合抗体中羊抗人多克克隆抗体效价大于1:16,鼠抗人单克隆抗体效价大于1:128;多抗保证线性与高值,单抗保证灵敏度与低值;抗体的保存:冻干抗体具有稳定性好,保质期长等特点,适合于长期保存,配成试剂后可加适量甘油与BSA作稳定剂;多克隆抗体、单克隆抗体等复合抗体技术即保证了灵敏度与高线性,与普通CRP与超敏CRP两种试剂等效,方便了医院操作;亲和层析技术的应用,大大提高了抗体的纯度与效价,最大限度避免了非特异性反应,使结果准确性有了较大提高,精密度更好;表四、亲和层析与复合抗体技术应用后D-二聚体的精密度与准确度
XSDCv(%)批内(n=20)1.50.053.331232.62.11批间(n=20)1.40.064.01253.02.4
靶值测量值偏差相对偏差质控122.080.084%质控21010.30.33%质控3136134-21.5%
3.4微孔滤膜孔径的选择
试剂的稳定性因素主要有胶乳抗体的纯度,缓冲液的品质,试剂中的悬浮小颗粒,此小颗粒肉眼看不到,漂浮于试剂中,影响光的吸收,且用常规过滤无法去除,其主要成份为杂质、短纤维
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