高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量

酸钾含量学生：XXX食检一班20112794指导老师：xx【摘要】用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。采用RP-HPLC法以HypercloneBDSC18柱（150X4.60nm,5um,phenomenex）为色谱柱；流动相：甲醇：0.02mol/l乙醇胺（20:80）；柱温25°C,流速0.8mol/min,检测波长230nm,进样量（标准进样量：2.5,5,7.5,10,15ul,20ul；样品进样量:5ul）。【关键词】高效液相色谱法 外标法苯甲酸钠山梨酸钾【前言】苯甲酸钠，化学式：CHONa，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠6 52是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。本实验采用RP-HPLC法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。【实验仪器与试剂】仪器：高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀77251】；电子天平；纯水仪；超声波清洗机。试剂：甲醇为色谱纯、水位超纯水、乙醇胺（乙醇胺溶液：0.02mol/l，称取乙醇胺1.54用水定容1L），稀氨水（1+1）；苯甲酸钠和山梨酸钾（分析纯）。【实验方法】采用RP-HOLC法，以HypercloneBDSC18（150X4.60mmphenomenex）

为色谱柱；甲醇：0.02mol/1乙醇胺（20：80）为流动相，PH=7,柱温25°C,流速0.8m1/min,检测波长230nm,进样量（标准进样量：2.5,5，7.5，10，15ul；样品进样量：5u1）。【实验结果】混合样品中苯甲酸钠中的标准曲线•系列1•系列1一线性係列1）2.557.510152063018.1193649.249828.388741.458294.1130287.98236•系列1-线性〔系列•系列1-线性〔系列1）2.557.5101520222188.329523.425498.664001.781004.107061.239364

根据实验图表计算出苯甲酸钠和山梨酸钾含量如下:样品名称进样量（ul）保留时间（苯甲酸钠/山梨酸钾）（min）峰面积（苯甲酸钠/山梨酸钾）苯甲酸钠含量（ug）X10-3山梨酸钾含量（ug）X10-3醋52.707/3.53227681.107/36692.7110.51130.2552酱油52.732/3.65729757.432/72356.1480.60101.1583根据理论塔板数公式是：N=16X（T/W）2W=4R其中T代表保留时间，W为封底宽,R为标准偏差。 分离度公式为：R=2（T2-T2）/（Y1+Y2）选择因子公式：a=t2/t1t2为后出峰保留时间。算得结果如下：标准溶液：样品名称保留时间（min）峰宽(min)理论踏板数分离度选择因子苯甲酸钠2.7070.174056.94061.51711.1055山梨酸钾3.5320.253193.60611..12511.1156样品溶液:样品名称苯甲酸钠保留时间（min）山梨酸钾保留时间（min）峰底宽度（苯甲酸钠/山梨酸钾）（min）塔板理论数（苯甲酸钠/山梨酸钾）分离度（苯甲酸钠/山梨酸钾）选择因子（苯甲酸钠/山梨酸钾）醋2.7073.5320.23/0.412216.3621.5525/1.1.5500/1.6/1187.391733150707酱油2.7323.6570.25/0.431913.7381.5820/1.1.1615/1.9/1157.262529120754【结果分析】：1根据色谱图可以看到有些峰有轻微的拖尾现象。可能由于系统内的死体积大，样品在色谱柱上有吸附。针对这一现象，我们可以尽量减少流动柱管线的死体积，使用洗脱更强的流动相。保留时间呈逐渐减小的趋势，可能是由于色谱柱老化、流动相或色谱柱被污染造成保留时间漂移现象。可以从标准曲线看出，样品进样量和峰面积呈线性关系，即呈正比。从实验中发现，醋中苯甲酸钠分离度为1.5525,山梨酸钾的分离度为1.1733。酱油中苯甲酸钠分离度为1.5820,山梨酸钾分离度为1.2529。分离度都大于1.5或接近1.5,说明分离程度比较理想，从而说明选择性和柱效都比较好。从计算结果看，测量时样品的理论踏板普遍偏小，说明柱效不好。可通过降低移动相的流速，减少固定相的量，减小固定相的颗粒度，选用低粘度的移动相，适当提高柱温，尽量减小停滞移动相的体积等来提高，同时注意检查流动相是否被污染，其也可导致柱效不好。选择因子很小，说明柱的选择性不好，分离度不好。同理，可以通过改变固定相和流动相的性质和组成，降低柱温，改用四元高压梯度洗脱等方法进行增大选择性和分离度。平行测定的数据存在误差，主要原因是误差的主要来源：（1）人员误差。（2）操作误差。（3）仪器误差。【参考文献】王瑾王平*雷纯阳高效液相色谱法测定酱油、醋中苯甲酸钠•检验与临床2008年9月第46卷第26期唐海霞，杨美成.高效液相色谱外标法测定药品含量的不确定度评定.现代测量管理与实验管理，2006（04）：41-42王箴•化工词典（第二版）[M].北京：化学工业出版社，19