畜禽羽（毛）中5种有机磷类农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

1DB36/Txxxx-xxxx畜禽羽（毛）中5种有机磷类农药残留量的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了畜禽羽（毛）中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷5种有机磷类农药残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪、牛、羊、鸡、鸭等畜禽羽（毛）中5种有机磷类农药毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理试样经甲酸-乙腈和水溶液涡旋、超声提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水标准。4.1.2甲酸：色谱纯。2DB36/Txxxx-xxxx4.1.3乙腈：色谱纯。4.1.4乙酸铵：色谱纯。4.2标准品毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准物质，含量≥98.0%。4.3标准溶液的制备4.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取适量毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准物质，用乙腈配成1.0mg/mL的标准储备液，该溶液于-20℃下避光储存，保存期1年。4.3.2标准中间液（10.0mg/L）：移取适量标准储备液（4.10）于10mL容量瓶中，用乙腈分别稀释成质量浓度为10.0mg/L的标准中间液，于-20℃下避光储存，保存期6个月。4.3.3标准工作液（1.0mg/L）：取上述标准中间液（4.11）各1mL于10mL容量瓶中，用乙腈分别稀释成质量浓度为1.0mg/L的标准工作液，该溶液于4℃下避光储存，保存期3个月。4.4材料4.4.1乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）。4.4.2十八烷基硅烷（C18）。4.4.3十二烷基硫酸钠（SDS）。4.4.4吐温80。4.4.5微孔滤膜（水相）0.22μm。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源）。5.2电子分析天平：感量0.1mg。5.3高速冷冻离心机：转速≥10000r/min。5.4涡旋混合器。5.5恒温烘箱。5.6氮吹仪。6试样制备与保存6.1试样制备3DB36/Txxxx-xxxx取适量代表性试样，用5%吐温80或者1%十二烷基硫酸钠溶液清洗羽（毛）30min，然后用蒸馏水漂洗3次至清洗干净，于45℃的烘箱中烘干样品，随后剪碎成1-2mm。6.2试样保存常温下放干燥器中保存。7测定步骤准确称取100mg（精确至0.01mg）上述处理的羽（毛）样品于15mL具塞离心管中，加入3mL2%甲酸-乙腈溶液和2mL水混合，涡旋1min，超声20min，10000rpm下离心5min，取上清液备用。7.2净化在上述上清液中加入100mgPSA和100mgC18吸附剂，涡旋1min，10000rpm下离心5min，上清液过0.22μm有机滤膜，进样测定。7.3色谱条件7.3.1液相色谱条件a）色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC18（100mm×2.1mm，1.8μm）。b）流动相：流动相A为5mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B为5mmol/L乙酸铵甲醇溶液。c）流速：0.3mL/min。d）柱温：35℃。e）进样量：10.0μL。f）流动相和梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱条件时间/min流动相A/%流动相B/%03.04982022984DB36/Txxxx-xxxx4.529869879827.3.2质谱条件a）离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+）。b）毛细管电压：3000v。c）干燥气温度：150℃。d）干燥气流量：15L/min。e）雾化气压力：30psi。f）鞘气温度：300℃。g）鞘气流量：12L/min。h）检测方式：多反应监测（MRM），监测条件见表2。表2多反应监测（MRM）条件被测物名称定性离子对定量离子对碎裂电压碰撞能量/ev（m/z）（m/z）毒死蜱350.0/197.8350.0/96.8273.1/230.9350.0/197.838049水胺硫磷273.1/120.8142.0/94.1273.1/230.938030142.0/125.0214.0/125.0142.0/94.138020氧乐果214.0/155.0314.1/162.0214.0/125.0380520三唑磷314.1/96.9314.1/162.03805DB36/Txxxx-xxxx7.4基质标准工作曲线吸取一定量标准中间溶液，用空白基质提取液逐级稀释成质量浓度为1.0μg/kg、2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg、100.0μg/kg的基质标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积为纵坐标、农药基质标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.5定性及定量7.5.1保留时间被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。7.5.2定量离子、定性离子及子离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品质谱中，目标化合物质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度最大允许偏差相对丰度（基峰）>50%>20%-50%>10%至20%≤10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%7.5.3试样溶液的测定将基质标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。7.6回收率阴性样品中添加标准溶液，按照7.1-7.2操作，测定后计算样品添加回收率。8结果与计算6DB36/Txxxx-xxxx试样中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷的残留量按式（1）计算，计算结果需扣除空Xi式中：Xi——样品中目标化合物的残留量(μg/kg)；Cs——目标化合物标准工作液的浓度(μg/L)；As——目标化合物标准工作液的峰面积；Ai——样品中目标化合物的峰面积；V——样品提取液体积(mL)；m——样品称样量(g)。9检测方法的灵敏度、准确度和精密度本方法的检出限：毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷为0.5μg/kg，氧乐果和三唑磷为0.4μg/kg。本方法的定量限范围为1.3μg/kg-2.0μg/kg。9.2准确度本方法在2µg/kg～50µg/kg添加浓度水平上的回收率为67.8%～106.2%。9.3精密度本方法相对标准偏差≤6.9%。7CountsCounts13451345DB36/Txxxx-xxxxCountsCounts13451345附录A（资料性附录色谱图）毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷的多反应监测色谱图（图A.1、A.2、A.3分别是混合标准品、空白猪毛中添加混合标准品以及空白牛毛中添加混合标准品，添加浓度10μg/kg）6000005000004000003000002000001000000231540.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.0AcquisitionTime(min)2AcquisitionTime(min)20.00.5AcquisitionTime(min)其中：1为甲胺磷；2为氧化乐果；3为水胺硫磷；4为三唑磷；5为毒死蜱8DB36/Txxxx-xxxx附录B（资料性附录）回收率毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷添加浓度及平均回收率结果，见表B.1和B.2。表B.1空白猪毛样品中5种违禁农药添加浓度及平均回收率（N=6）化合物添加浓度(μg/kg)平均回收率/%相对标准偏差（RSD）/%2.076.15.4毒死蜱50.02.069.767.890.17.75.33.0水胺硫磷50.02.085.280.991.27.96.85.550.02.098.694.768.73.52.26.2氧乐果50.02.070.580.086.25.87.93.6三唑磷50.086.185.49DB36/Txxxx-xxxx表B.2空白牛毛样品中5种违禁农药添加浓度及平均回收率（N=6）化合物添加量(μg/kg)平均回收率/%相对标准偏差（RSD）/%2.070.29.6毒死蜱50.02.071.266.377.95.94.57.1水胺硫磷50.02.072.784.791.58.95.850.02.093.399.991.36.96.2氧乐果50.02.087.881.58.35.57.0三唑磷50.083.987.45.3DB36/Txxxx-xxxx