乳酸液相含量检测方法

乳酸含量检测方法（高效液相色谱法）仪器设备高效液相色谱仪（配紫外检测器）色谱柱（C18）柱温箱超声波清洗器分析天平：感量0.0001gPH计微孔滤膜：0.45μm微孔滤膜：0.45μm(有机系）一次性无菌注射器（带针）：1mL微量进样器：100μL离心管：2mL离心管架烧杯：100mL玻璃棒万用电炉容量瓶（50mL、100mL）刻度吸管（5mL、10mL、15mL、20mL）注射器（20mL）带有进样阀清洗头试剂2.1磷酸：色谱纯2.2乙腈：色谱纯2.30.1%磷酸：精确吸取1mL磷酸，用高纯水定容至1000mL2.4流动相：0.1%磷酸溶液：乙腈=2.5：97.5（体积比）2.550%浓硫酸：浓硫酸：水=1:1（浓硫酸缓慢注入水中，并用玻璃棒引流，并不断搅动）2.60.5mol/L氢氧化钠：吸取27mL氢氧化钠饱和溶液，用水定容至1000mL2.7高纯水（注：使用高效液相色谱仪的过程中，所用的水都是高纯水）操作液相条件3.1流速：1.0mL/min;3.2检测波长：210nm;3.3柱温：30℃3.4进样量：20μL操作方法4.1标准品/样品处理方法精确称取0.4g乳酸标准品/样品于100mL的烧杯中，向烧杯中加20mL的高纯水将标准品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氢氧化钠，用玻璃棒搅拌均匀，并冲洗玻璃棒。然后放到万用电炉上进行加热待溶液煮沸后开始计时5min，冷却后用50%的硫酸调节PH值为2.2-2.5，然后将溶液转移到100mL容量瓶中，用高纯水少量多次冲洗烧杯，将冲洗液一并移入到容量瓶中，最后用高纯水定容到100mL.此时标准品的浓度为2mg/mL（标准品1）4.2样品处理方法用电子天平称取0.4g左右的样品100mL的烧杯中，向烧杯中加20mL的高纯水将样品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氢氧化钠，用玻璃棒搅拌均匀并冲洗玻璃棒。然后放到万用电炉上进行加热待溶液煮沸后开始计时5min，冷却后用50%的硫酸调节PH值为2.2-2.5，然后将溶液转移到100mL容量瓶中，用高纯水少量多次冲洗烧杯，将冲洗液一并移入到容量瓶中，最后用高纯水定容到100mL.4.3系统设置4.3.1依据检测条件设置高效液相，并将清洗瓶内的高纯水置换（清洗瓶内的高纯水必须是过滤并经过超声清洗的）4.3.2流动相（2.4）用微孔滤膜（1.7有机系）过滤后，然后用超声清洗器（1.4）超声20min；4.3.3用过滤并超声清洗后的流动相平衡高效液相系统20min（不接柱子C18);观察输送流动相的管路中是否有气泡，如果有气泡要及时把气泡排出。（排气泡方法：打开放空阀，按仪器前面板的“冲洗”功能键，用大流量冲洗系统直到流出的液体连续，证明气泡已经排除）4.3.4设置柱温箱（1.3）温度为30℃，连接C18柱子，观察柱子两端是否漏液，如果不漏液，将柱子放置到柱温箱中。并观察高压恒流泵的压力，一般在18mpa左右为正常压力。继续用流动相平衡系统和C18柱20min4.3.5跑基线（依据液相系统操作），直到基线成一条直线4.4进标准样从标准品1中各吸取15mL，20mL，25mL，30mL溶液分别定容至50mL,（此时溶液浓度分别为0.6mg/mL（标准品2）0.8mg/mL（标准品3）1.0mg/mL（标准品4）1.2mg/mL（标准品5）)，将5个标准品分别过滤至5个离心管（1.11）中并弃去初滤液。（将微孔滤膜（1.8）套在一次性无菌注射器（1.9）上进行过滤），用微量进样器（1.10）分别吸取5个离心管中溶液上机检测，进样量为30μL，以峰高为纵坐标，样品浓度为横坐标，作出直线方程。4.5进样品样先用一次性无菌注射器（1.9）吸取定容至100mL的样品溶液，经微孔滤膜（1.8）过滤至离心管（1.11）中并弃去初滤液，用微量进样器（1.10）吸取离心管中样品溶液上机检测，进样量为30μL，记录峰高值带入直线方程中，求出浓度计算公式C×100C×100×标准品纯度×100%m×1000m×