木瓜粉蚧检疫鉴定方法

1木瓜秀粉蚧检疫鉴定方法本标准规定了木瓜秀粉蚧ParacoccusmarginatusWi），24木瓜秀粉蚧基本信息家畜和野生动物扩散，易随果实、苗木和接穗的调运而远5.1形态学鉴定微镜观察，依据雌成虫的形态特征对其进行碎仪、高速冷冻离心机、研磨机、台式小型离心机、制冰机、旋涡震荡器、移液、器、电子天平、计、水浴锅、纯水仪、高压灭菌器、超低温冰3动物基因组DNA提取试剂盒、10×PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）、DNA扩增引物待发育至成虫时再挑取雌成虫作形态鉴定，玻片制作方法蕈状腺，有时出现在腹部。具领状腺。腹部具多格腺，4至第8节中部及中部外侧区域，第一腹节通常有2个～3个。臀——后足基节有大量透明孔；后足胫节无透明孔（参见附录图C.3～图C.5木瓜秀粉蚧可以通过下列形态特征与秀粉蚧属其他DNA纯度=OD260/OD280 DNA浓度=50×OD260μg/mL (2)DNA纯度——OD260与OD280的比值；PCR级DNA溶液的OD260与OD280的比值应为1.7～1.9，若DNA浓度高于100ng/µL，则应稀释至100ng/µL。5加样量(μL）10×PCRBufferDNA模板（10～100ng/μL）ddH2OACTTATATATTTAATTTTTGGATTTTGATCAAGATTAATAGGTTTATCAATAAGTTTTATTATTCGAATTGAATTAATAAATTTAAATAATAATTTTAATAATAATATAATTTATTATACATGCTTTTATTATAATTTTTTTTATAACTATACCTATTATTATTGGAAGATTAAGTAATTTACCTTTAATATTAATATCTTCAGATTTAATTTTTCCTCGTTTAAATAATTTTAGATTTTGATTAAATTCCATCTTTAATTTTTATAATATTAAATATATTATTAAATAATAATATATTATATCCTCCTTTAATTAATCAAAATTTTATTACATTAAATTTTATAATGGTTTATCTTCAATTTTTAGATCTATTAATTTTATTTCATCTATTTTTATTATTAATAATAATTTTTTTTTAAATAATTTTTCTTTATATATTTGATCAATTATTGTTACTACAATTTTATTAATTATCAATTCCTATTTTATCTAGAGCTATTACTATAATTATTTTAGATAATAATTTAAACATAAA6TTAATCCAATAGGAAATGGTAATCCTATTTTATATCAACA9结果判定9.1形态学方法9.2分子生物学方法根据待测样品测序获得的基因序列在NCBI数据库与上述木瓜秀粉蚧DNA条形码标准序列或已知木瓜秀粉蚧各龄若虫、蛹和成虫均可浸泡在70%乙醇溶液或乙醇-甘油保存置-18℃以下冷冻，可长期保存；成虫也可制成玻片标本保存，玻片标本应置于阴暗干燥处保存；危害DNA进行分装后，-70℃冷冻保存。记录害虫名称、来源、寄主、截获时间、地点、截获人、鉴定人等1），的列斯、开曼群岛、美国、美属维尔京群岛日利亚、北玛丽安娜冰岛、阿曼、巴基斯坦、帕劳已知记录了50科153属，主要有：爵床科Acanthaceae：穿心莲Andrographispaniculata、十字爵床Crossandrainfundibuliformis、黄虾衣花Pachystachyslutea；番杏科Aizoaceae：假海马齿Trianthemaportulacastrum；苋科Amaranthaceae：土牛膝Achyranthesaspera、Aervajavanica、Aervalanata、莲子草Alternantherasessilis、皱果苋Amaranthusviridis、青葙Celosiaargentea、Digeramuricata；漆树科muricata、番荔枝Annonasquamosa；伞形科Apiaceae：积雪草Centellaasiatica；夹竹桃科Apocynaceae：大紫蝉Allamandablanchetii、大叶糖胶树Alstoniamacrophylla、牛角瓜Calotropisgigantea、牛角瓜白花鸡蛋花Plumeriaalba、红鸡蛋花Plumeriarubra、蛇根木Rauvolfiaserpentina；天南星科Araceae：Philodendronlacerum；棕榈科Arecaceae：椰子Cocosnucifera、海枣Phoenixdactylifera、王棕RoystoneaAmbrosiaperuviana、鬼针草Bidenspilosa、夜香牛属Cyanthillium、大麻叶泽兰Eupatoriumcannabinum、向日葵Helianthusannuus、银胶菊Partheniumhysterophorus、蟛蜞菊Sphagneticolacalendulacea、万寿菊Tageteserecta、羽芒菊Tridaxprocumbens、百日菊Zinniaelegans；紫葳科Bignoniaceae：黄钟花Tecomastans；橄榄科Burseraceae：Commiphoracaudata；桔梗科Campanulaceae：半边莲属Lobelia；番木瓜科Caricaceae：番木瓜Caricapapaya；白花菜科Cleomaceae：Cleomeviscosa；旋花科Convolvulaceae：蕹菜Ipomoeaaquatica、Ipomoeacarnea、虎掌藤Ipomoeapes-tigridis；闭鞘姜科Costaceae：Cheilocostusspeciosus；葫芦科Cucurbitaceae：Cucumismaderaspatanus、广东丝瓜Luffaacutangula、苦瓜Momordicacharantia；大戟科Euphorbiaceae：铁苋菜属Acalypha、热带铁苋菜Acalyphaindica、红桑Acalyphawilkesiana、波氏巴豆Crotonbonplandianus、飞扬草Euphorbiahirta、一品红Euphorbiapulcherrima、橡胶树Heveabrasiliensis、麻风树Jatrophac红珊瑚Jatrophamultifida、佛肚树Jatrophapodagrica、Jatrophatanjorensis、Manihotchlorosticta、木薯Manihotesculenta、蓖麻Ricinuscommunis；豆科Fabaceae：Acaciaferruginea、Acacialeucophloea、落花生Arachishypogaea、羊蹄甲Bauhiniapurpurea、木豆Cajanuscajan、腊肠树Cassiafistula、蝶豆Clitoria2ternatea、菽麻Crotalariajuncea、多枝草合欢Desmanthusvirgatus、Erythrinaabyssinica、刺variegata、格力豆Gliricidiasepium、大豆Glycinemax、银合欢Leucaenaleucocephala、大含羞草Mimosa塞纳决明Sennaalexandrina、Sennaauriculata、大花田菁Sesbaniagrandiflora、Sesbaniapunicea、酸豆Vignamungo、绿豆Vignaradiata、豇豆Vignaunguiculata；蝎尾蕉科Heliconiaceae：蝎尾蕉属Heliconia；唇形科Lamiaceae：Menthaarvensis、甘牛至Origanummajorana、柚木Tectonagrandis；樟科Lauraceae：鳄梨Perseaamericana；千屈菜科Lythrcapsularis、棉属Gossypium、毛可可Guazumaulmifolia、木芙蓉Hibiscusmutabilis、朱槿Hibiscusrosa-sinensis、玫瑰茄Hibiscussabdariffa、小悬铃花Malvaviscusarboreus、黄花棯Sidaacuta、可可菠萝蜜Artocarpusheterophyllus、榕属Ficus、桑Morusalba；芭蕉科Musaceae：Musaparadisiaca；桃金Phyllanthaceae：余甘子Phyllanthusemblica、麻德拉斯叶下珠Phyllanthusmaderaspatensis；胡椒科Piperaceae：胡椒属Piper、荜拔Piperlongum；禾本科Poaceae：Uniolapaniculata、玉蜀黍Zeamays；蓼花Ixoracoccinea、海滨木巴戟Morindacitrifolia、洋玉叶金花Mussaendafrondosa、Neonaucleapurpurea、无患子科Sapindaceae：红毛丹Nepheliumlappaceum；山榄科Sapotaceae：人心果Manilkarazapota；苦木洋金花Daturametel、烟草Nicotianatabacum、番茄Solanumlycopersicum、茄SolanummelongenaSolanumnigrum、水茄Solanumtorvum、Solanumtrilobatum、土豆Svirginianum、睡茄Withaniasomnifera；马鞭草科Verbenaceae：假连翘Durantaerecta、马缨丹Lantanacamara；葡萄科Vitaceae：仙素莲Cissusquadrangularis、葡萄Vitisvinifera；蒺藜科Zygophyllaceae：蒺藜Tribulusterrestris。A.3生物学特性3含物、虫体变为清洁透明。加热还可用水浴、温箱等方法，脱脂时间以标本透明为准。11 2 8 背面蕈状腺至少16个，有时超过40个，总有一些蕈状腺单独出现在1到2个腹部刺孔群附 33后足胫节有透明孔 4 4头部和胸部边缘有领状腺 5 5腹部腹面具多格腺，在第四和第五腹节呈双列并到达腹节边缘，两触角基部之间无领状 6腹部腹面具多格腺，在第四和第五腹节呈单列但不达这两腹节边缘，两触角基部之间具有领状 76后足基节明显大于前足基节。背刚毛短硬，不呈鞭毛状，长度7.5μm～15.0μm P.interceptust后足基节与前足基节大小相似。所有背刚毛鞭毛状，长度15μm～40μm，最长为第七腹节达到 7所有刺孔群均明显，除了头部外，每一个刺孔群都包含成对的锥刺，其中有1到2个刺孔 腹部腹面无蕈状腺 99背蕈状腺几乎无，仅腹部有1到2个（偶尔无）。在第七和第八腹节的背刚毛最长达到 背蕈状腺数量较多，至少在胸部有。在第七和第八腹节的背最长刚毛约15μm 10 腹部后段缺背蕈状腺 2[6]AmarasekareKG,ChongJH.,EpskyND&MannionCM.EffectParacoccusmarginatus(Hemiptera:Pseudococcidae)underlaboratoryconditions,JournalofEconomicEntomol[7]AmarasekareKG,MannionCM&EpskyND.EfficiencyandestablishmentoftmealybugParacoccusmarginatus(Hemiptera:Pseudococcidae)，Biol[8]AmarasekareKG,MannionCM&EpskyND.Fieldassessmentofthreeintroducedparasitoids(Hemiptera:Pseudococcidae).NationalEntomologicalSocietyofAmericaAnnu[9]ChenSP，WongJY&WuWZ.PreliminaryreportontheoccurrenceofpapaWilliamsandGranaradeWillink,inTaiwa[10]/creatures/fruit/mealybugs[11]/catalogue/Paracoccusmarginatus/[12]KalaniyangodaDB,SaumyapaliMRY&HewageLC.Biologyandcontrusingherbaloils,JournalofAgriculturalScienceandTechnology,2011,[13]KaushalyaAG,CatharineMM,LanceO，etal.Development,survival,andreproductionofParacoccusmarginatus(Hemiptera:Pseudococcidae)ondifferenthostplantspecies,EnvironmentalEntom[14]MillerDR&MillerGL.RedescriptionofParacoccusmarginatCoccoidea:Pseudococcidae),includingde