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文档简介
专题一传统发酵技术的应用酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。在无氧条件下发酵产生酒精。最适温度为20度左右。果醋的制作原理:当氧气和糖原都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸,当缺少糖原时,醋酸菌讲乙醇变成乙醛,再将乙醛变成醋酸。(醋酸菌是好氧细菌,应给装置通气)可用重铬酸钾来检验酒精,反应呈现灰绿色。腐乳的制作:多种微生物起发酵作用,毛酶起主要作用。毛酶产生的蛋白酶将蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸:产生的脂肪酶能将脂肪水解为甘油和脂肪酸。制作腐乳时加盐,主要是为了抑制微生物的生长,析出水分。腐乳外层的“皮”是毛酶菌丝形成的,对人体无害。泡菜的制作用的是乳酸菌,乳酸菌是厌氧细菌,在无氧条件下可将葡萄糖分解成乳酸。制泡菜:制备样品处理液时,加入氢氧化铝的目的是为了吸附杂质,形成透明清液。专题二微生物的培养与应用培养基:分为固体培养基和液体培养基。一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。无菌技术:获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。消毒和灭菌:消毒是指杀死部分微生物(不包括芽孢和孢子),灭菌是指杀死生物体内外的所有微生物,。常用酒精进行消毒。常用的灭菌方法有:灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌。纯化大肠杆菌的方法:平板划线法和稀释涂布平板法。这两种方法都可以得到由一个细胞繁殖而来的菌落。但是只有稀释涂布平板法可以统计菌落数。计数的方法是(C/V)*M。其中C代表的是菌落数,V代表体积,M代表稀释倍数。统计得到的菌落数往往比实际的数目低,原因是当两个或多个细胞连在一起是,平板上观察到的是一个菌落。微生物的选取:应在火焰旁边取土壤。在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁边进行操作。分离纤维素酶要在以纤维素作为唯一碳源的培养基上进行筛选,这种培养基叫做选择培养基。用刚果红染色法检验纤维素酶。常用的刚果红染色法有两种,一种是先培养微生物,再加入刚果红进行染色。第二种是在倒平板的时候就加入。方法一操作繁杂,存在菌落混杂问题,方法二操作简单,但会产生假阳性反应,降解刚果红形成明显透明圈。专题三植物的组织培养技术原理:植物细胞的全能性。主要过程:脱分化形成愈伤组织,再分化形成幼苗。(分化的本质:基因的选择性表达)培养基:MS培养基:包括大量元素,微量元素,有机物,植物激素。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。先使用生长素,后使用细胞分裂素——有利于细胞分裂,但细胞不分化。先使用细胞分裂素,后使用生长素——细胞即分裂也分化。同时使用两种激素——分化频率高。生长素浓度/细胞分裂素浓度:这一比值高时,促根分化,抑制芽的形成。低时促进芽的分化,抑制根的形成。比值适中时,有利于愈伤组织生长。一般采用体积分数为70%的酒精溶液给外植体消毒。整个接种操作要在酒精灯旁边进行,并且每次使用器械后都要用火焰灼烧灭菌。培养基及其他器械用高压蒸汽灭菌。月季花的花药培养:一般选取单核期的花粉粒做实验的成功率高。产生花粉植株的两种途径:脱分化形成愈伤组织或胚状体。两种途径主要取决于培养基中的激素种类及其浓度比。材料的选择与培养基的组成是影响花药培养的主要因素。一般月季花的花药培养时间选在月季的初花期。确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸洋红法。材料的消毒:通常先将花蕾用70%的酒精溶液浸泡,然后在无菌水中清洗,取出后吸干水分,放入0.1%氯化汞溶液中,取出后再用无菌水清洗。培养温度要控制在25度左右。专题四酶的研究与应用1、果胶酶不是一种酶,而是一类酶的总称,2、影响酶活性的主要因素有:温度、PH、和酶的抑制剂。3、加酶洗衣粉的主要酶制剂有蛋白酶(碱性)、脂肪酶(碱性),淀粉酶和纤维素酶。4、酵母细胞的固定化:固定化细胞制备的成本更低,操作更容易。技术:固定化酶和固定化细胞的技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说,酶更适合用化学结合发和物理吸附法,而细胞多采用包埋法固定。这是因为细胞个体大,而酶分子很小:个体大的细胞难以被吸附或结合,而个小的酶容易从包埋材料中漏出。5、制备固定化酵母细胞:取干酵母,加蒸馏水,搅拌,配置CaCl2溶液;用配置好的海藻酸钠溶液与已活化的酵母细胞混合搅拌。转移到注射器内。再将注射器的溶液加到CaCl2溶液里。形成的凝胶珠就是酵母细胞。专题五DNA和蛋白质技术提取DNA的方法:1、根据DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液的溶解度最低。2、DNA不溶于酒精溶液,而蛋白质可以溶于酒精溶液。3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。DNA的鉴定:在沸水浴的条件下,DNA和二苯胺混合变成蓝色。(二苯胺要现配现用)破碎鸡血细胞:加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌。(原理:渗透原理)去除滤液里的杂质:1、将NaCl溶液的浓度调为0.14mol/L。2、直接在滤液中加嫩肉粉,嫩肉粉的木瓜蛋白酶能分解蛋白质。3、将滤液放在60-75℃的恒温水浴箱里,注意严格控制温度范围。DNA的两条链是反向平行的,将DNA的羟基的末端称为3’端,磷酸基团的末端称为5’端。DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是从子链的5’PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行。需提供DNA模板链,两种引物,四种脱氧核苷酸,耐热的DNA聚合酶。PCR反应的3个重要温度:95℃(热变性)、55℃(复性)、凝胶色谱法:根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶,而相对分子质量小的蛋白质进入凝胶,小的蛋白质的路程较长,移动速度慢。大分子的蛋白质路程较短,移动速度快。缓冲溶液:能够抵制外界的酸和碱对溶液PH的影响,维持PH值基本不变。电泳:在电场的作用下,带电的基团向着与其所带电荷相反的电极移动。红细胞的洗涤:低速短时间离心。血红蛋白的释放:蒸馏水和甲苯的共同作用下,使红细胞破裂,释放血红蛋白。分离血红蛋白溶液:高速长时间离心。溶液分层:1、甲苯层,2、脂类物质,3、血红蛋白溶液,4、红细胞破碎物沉淀。
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