实验五-霉菌的形态观察

实验五霉菌得形态观察、微生物得测微与计数一.实验目得1、学习并掌握观察霉菌形态得基本方法,初步了解霉菌得形态特征及鉴别依据。2、学习使用目镜测微尺与镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小得方法。3、了解血球计数板得构造与使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量得方法。4、总结并掌握细菌、放线菌与霉菌得鉴别方法。二、实验原理

1、霉菌定义及用途霉菌不就是真菌分类中得名词,而就是丝状真菌得统称。霉菌在自然界中广泛分布,与食品得关系密切,就是人类在实践活动中最早利用得一种微生物,如早期进行得酱与酱油得制作等。霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素,影响人体健康甚至危及生命。2、霉菌特征霉菌可产生分支得菌丝体,分基内菌丝与气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。菌丝体(尤其就是繁殖菌丝)及孢子得形态特征就是识别不同种类霉菌得重要依据。霉菌菌丝与孢子得宽度通常比细菌与放线菌粗得多(约310um),常就是细菌菌体宽度得几倍至几十倍。因此,用低倍镜即可观察。3、霉菌得菌落松:由于霉菌得菌丝较粗较长,菌丝体疏松,因而形成得菌落也比较疏松,呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状;大:菌落形态较大,一般比细菌与放线菌得菌落大几倍到几十倍,有时会长满整个培养皿;干:外观干燥,不透明;挑:菌落与培养基间得连接紧密,不易挑取;颜色:由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同,不同得霉菌菌落表面呈现不同得颜色,菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。同一种霉菌在不同得培养基上或不同得培养条件下所形成得菌落特征可能有所不同。但同一种霉菌在相同得培养条件下与培养基上所形成得菌落特征相对稳定。菌落特征就是霉菌鉴定得重要依据之一。4、霉菌得菌丝形态构成霉菌营养体得基本单位就是菌丝。菌丝得宽度一般为310μm,比放线菌菌丝宽很多倍,其菌可伸长并产生分枝。许多分枝得菌丝相互交织在一起,称为菌丝体。一部分菌丝存在于培养基质中吸收营养,称为基内菌线或营养菌丝。另一部分菌丝向空中生长,称为气生菌丝。气生菌丝一部分形成生殖细胞,也有部分气生菌丝生成生殖细胞得保护组织或其它组织。4、霉菌得菌丝从结构来瞧,霉菌得菌丝有两种:无隔菌丝:低等霉菌如根霉、毛霉等有隔菌丝:高等霉菌如青霉、曲霉等菌丝得孢子较大,在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝与孢子及巨大得孢子囊。5、霉菌得繁殖方式与繁殖结构霉菌主要靠形成各种无性孢子与有性孢子进行繁殖。霉菌得无性孢子:厚垣孢子节孢子分生孢子孢囊孢子6、食品中常见得霉菌霉菌得种类很多,下面仅介绍一些常见得、与食品有关得菌属。(1)根霉菌属(Rhizopus)现已发现根霉有20多种,根霉有假根与葡匐枝,假根主要起固定与吸收营养得作用。本属得黑根霉能产生果酸酶,引起果实得腐烂及甘薯得软腐,能产生反丁稀二酸,也就是转化甾族化合物得重要霉菌。(2)曲霉菌属(Aspergillus)现已发现与应用得曲霉菌有100多种,在我国古代已利用曲霉菌制曲、酿酒、制酱等。曲霉菌还可用于制造蛋白酶、柠檬酸等一些有机酸。曲霉菌在自然界分布很广,空气中经常含有曲霉菌得孢子。常引起食品、衣服、皮革等物品得发霉与腐烂,有得菌株还可产生毒素,例如黄曲霉。曲霉菌具有发达得菌丝体,菌丝有隔膜,为多细胞菌丝。繁殖方式为无性与有性繁殖。其菌落呈现各种颜色。(3)青霉菌属(Penicillium)青霉菌在自然界得分布也非常广泛,土壤中常常有大量得青霉菌存在,在水果与粮食上经常发现青霉菌,已发现大约有几百种。青霉菌得菌丝体无色或浅色。菌落就是深绿色。青霉菌可引起果蔬等得病害,如引起柑桔得病害而造成较大损失。但有些青霉菌能产生有经济价值得有机酸,如柠檬酸,葡萄糖酸等。在医药上常用得青霉素得产生菌就是产黄青霉。三、实验内容(一)实验材料1、菌种:培养法培养3~4天得根霉(Rhizopussp、)、青霉(Penicillumsp、)与曲霉(Aspergillussp、)平板。2、其她物品:乳酸石炭酸溶液、载片、盖片等。(二)记录三种霉菌得菌落特征微生物名称大小表面形状颜色与培养基结合程度嗅味(二)记录三种霉菌得菌落特征

2、霉菌个体形态观察直接制片观察:于洁净载玻片上,滴一滴乳酸石炭酸液于载片中央;用解剖针从霉菌菌落得边缘处取小量带有孢子得菌丝置于液滴中,再细心地将菌丝挑散开;然后小心地盖上盖玻片,注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察,必要时再换高倍镜。挑菌与制片时要细心,尽可能保持霉菌自然生长状态。加盖玻片时切勿压入气泡,以免影响观察。(1)水浸片法观察(根霉与曲霉)根霉:加热至沸腾后观察曲霉:直接观察第二节微生物大小得测定一、实验原理微生物细胞得大小就是微生物基本得形态特征,也就是分类鉴定得依据之一。微生物大小得测定,需要在显微镜下,借助于特殊工具—测微尺,包括目镜测微尺与镜台测微尺。镜台测微尺适用于校正目镜测微尺每个得相对长度。然后,根据微生物细胞相当于目镜测微尺得个数,即可计算出细胞得实际大小。实验程序Ⅰ(测定微生物得大小)测定得工具:目镜测微尺镜台测微尺实验程序Ⅱ(测定微生物得大小)目镜测微尺得校正:在高倍镜下,瞧清镜台测微尺得刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺得刻度平行,移动推动器,使目镜测微尺得0点与镜台测微尺得某一刻度重合,然后,仔细寻找两尺第二个完全重合得刻度。计算两刻度间目镜测微尺得格数与镜台测微尺得格数。由于镜台测微尺得刻度每格长10µm,所以可得:目镜测微尺每格长度(µm)=(镜台测微尺格数×10)/目镜测微尺格数注意:校正目镜测微尺必须针对特定得显微镜与附件(特定得接物镜、接目镜、镜筒长度等)进行,而且只能在这特定得情况下才可重复使用。菌体大小得测定:取下镜台测微尺,将细菌染色标本置于载物台上,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体得长与宽。操作步骤1、装目镜测微尺2、校正目镜测微尺3、菌丝体大小测定:将观察得黄曲霉菌丝体直接进行菌丝体大小得测定4、测定完毕后,取出目镜测微尺用擦净纸擦干净,放回盒内保存。第三节微生物得显微计数血球计数板通常就是一块特制得厚载玻片,载玻片上有四条槽而构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽而隔成两半,每个半边上面各刻有一个方格网。每个方格网共分九大格,其中间得一大格又称为计数室,微生物得计数就在此大格中进行。常用得血球计数板得计数室有两种规格得刻度网格。一种就是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,即为16×25。另一种就是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格,即25×16。但就是不管计数室就是那种规格,其计数室得小格数总就是相同得,即16×25＝25×l6＝400(小格)计算每一个大方格边长为1mm,则每一大方格面积为1mm2。盖上盖玻片后,载玻片计数室与盖玻片之间得高度为0、1mm,所以每个计数室(大方格)得体积为0、1mm3。在计数时,通常数五个中方格得总菌数,求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中得总菌数。然后再换算成1毫升菌液中得总菌数。

(1ml＝1cm3＝1,000实验材料酵母菌悬液显微镜,血球计数板。盖玻片,无菌滴管,吸水纸,擦镜纸,香柏油、镜头洗液。取清洁无油得血球计数板,在计数室上面加盖血盖片。取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。用10×镜观察并将计数室移至视野中央。在10×镜下计数:计数4个(或5个)中格得平均值,然后求得每个中格得平均值。乘上16(或25)就得出计数区总菌数,最后再换算到每mL菌液中得含菌数。注意事项:计上不计下,计左不计右。出芽计一半实验程序计数步骤:1、取清洁无油得血球计数板,在计数室上面加盖玻片。2、取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。3、静置5分钟后,将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数板得大方格网位置。寻找时光圈要缩小,光线要偏暗些,并将计数室移至视野中央。4、在高倍镜下计数:随机地计数五个中格内得菌数,然后求得每个中格得平均值。乘上16(或25)就得出一大格中得总菌数,最后再换算到每毫升菌液中得含菌数量。由于菌体细胞在血球计数板上处于不同得空间位置,要在不同得焦距下才能瞧到,故观察时必须不断调节微调节器,方能数到全部菌体,以免遗漏。5、计算方法:

酵母菌细胞数／毫升=[(X1+X2+X3+X4+X5)/5]*25(或16)×10×1000×稀释倍数6、注意事项。

计数时,为避免重复或遗漏计数,凡就是遇到压在方格线上得菌体,一般以压在底线与右侧线上得菌体计入本格内,遇到有芽体得酵母时,如果芽体与母体同等大时,就按两个酵母菌体计数。7、计数完毕后,血球计数板要立即清洗干净,并用吸水纸吸干,最后用擦镜纸擦干净并放回盒。将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中得总菌数;D表示菌液稀释倍数。

各中格中菌数TD二室平均值个/ml12345第一室

第二室

第四节四大类微生物得比较与分别1、四大类微生物菌落形态特征得比较2、制片与观察方法得区别细菌干燥、固定后美蓝染色、革兰氏染色,用油镱(100×10)进行观察;酵母美蓝水浸片染色,用高倍镜(40×10)观察;放线菌美蓝盖片染色,菌丝体与孢子一般用高倍镜(40×10)观察;霉菌:乳酸石碳酸棉蓝染色,菌丝体与孢子一般用高倍镜(40×10)观察。3、个体形态与大小区别细菌:呈球状、杆状、螺旋状,个体微小,小于1微米。放线菌呈分枝丝状,菌丝无隔膜,单细胞,菌丝直径与细菌相似,小于1微米。霉菌菌丝与孢子得宽度通常比细菌与放线菌粗得多(约310um),常就是细菌菌体宽度得几倍至几十倍。酵母一般:呈球形、椭圆形。(1~5)um×(5~3