胶质瘤细胞答辩论文课件

C6胶质瘤细胞的培养和模型的建立姓名：张永煌专业：09药物制剂指导老师：徐维平实习单位：安徽省立医院药剂科

研究背景与目的实验仪器与材料细胞培养与造模实验结果观察

总结与讨论目录一、研究背景与目的二、实验仪器与材料仪器：1.MCO175型二氧化碳培养箱2.脑立体定向仪3.台式冷冻离心机4.倒置显微镜5.3.0T核磁共振仪6.25μL微量注射器材料：三、C6胶质瘤细胞培养与造模

1.C6胶质瘤细胞的培养细胞复苏细胞传代2.

脑立体定向接种C6细胞建模注射细胞准备注射前准备 接种方法

大鼠生存状况观测

MRI检查病理解剖学检查组织学检查

1.细胞复苏冻存管浸入37℃温水，融化细胞悬液加到离心管，滴加10倍培养液1000r/min，5min弃上清，加小牛血清，调整细胞密度，接种培养瓶次日更换一次培养液，继续培养细胞图片2.细胞传代吸去培养基，PBS洗涤加胰酶消化液，用枪吹打细胞显微镜下，细胞出现明显收缩、从培养皿中脱离参加含血清的完全细胞培养液，继续吹打下细胞转移该培养皿中的培养液，参加新鲜培养液，放入培养箱中培养二、脑立体定向接种C6细胞建立模型1.注射细胞准备：接种前取对数生长期C6细胞0.25％胰酶消化、收集细胞制成细胞悬液台盼蓝排斥试验鉴定细胞存活率大于95％调整细胞浓度为2.5×106/ml，置于37℃恒温摇床待用。2.注射前准备：前12h大鼠禁食和水，用10%水合氯醛麻醉立体定向仪固定，常规消毒内眦连线中点后纵向切开头皮1cm，暴露颅骨前囟冠状缝与矢状缝交1.0mm、右3.0mm处用三棱针钻一直径1.0mm的小孔，不可伤及硬脑膜3.注射细胞：微量注射器抽取25μL的C6细胞悬液，针尖调节至触及硬脑膜沿钻孔垂直进针5.5mm，后退1mm细胞悬液注入尾状核内，推注时间为10min，注射完毕后留针10min后，缓慢退针喷洒适量抗生素，缝合皮肤，切口消毒，常规饲养4.组织学检查：

HE染色常规病理检查：GFAP免疫组织化学检查：阴性对照以PBS代替一抗阳性对照片由试剂公司提供。四、实验结果1.大鼠生存状况观测：2.MR影像学变化：T1T2增强扫描3.病理解剖特征：脑组织标本，可见肿瘤〔☆示〕4.组织学检查结果b.大鼠正常脑组织〔HE，×100〕c.荷瘤鼠脑内肿瘤中心组织〔HE，×200〕d.肿瘤边缘组织〔HE，×100〕e.肿瘤组织GFAP免疫组化染色〔HE，×400〕五、实验讨论：

1.细胞数量和细胞活力：细胞数目过少模型成功率低，过高虽能保证实验动物造模成功率但动物生存状态差且生存期短，不利用于进一步实验研究；实验摸索1×106•10μL-1、2.5×106•25μL-1、4×106•25μL-1、6×106•μL-1接种数量；最适合的种体积为25μL，细胞数为2.5×106个；每次接种前轻轻摇晃吹打细胞悬液,防止细胞沉淀导致细胞接种不均匀；细胞活力应＞90％；2.靶点定位：定位选择鼠脑右侧尾壳核为注射点;冠状缝前1mm，矢状缝右3mm进针，深度为距硬脑膜约5.5mm。3.进针深度和细胞注射速度C6细胞沿接种针道向颅外生长是该肿瘤模型的主要缺乏；在脑内进针后稍后退的方法，即先进针5.5～6mm，然后上提1mm，造成靶点位置的一个空隙；注射过程缓慢，防止悬浮液从脑内溢出。

4.细胞与靶点脑组织接触时间采用微量注射器精密吸取25μL，10min内匀速推注完毕，然后再原位留针10min；延长留置时间一方面有利于瘤细胞沉积在穿刺道的底部，另一方面有利于脑组织适应局部的压力增高。致谢感谢安徽中医药大学的领导、老师们四年来的教诲与帮助。在此，我要向他们深深