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文档简介

实验三

核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察

p220作业：1、说明DNA和RNA的亚细胞定位在哪里?为什么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用实验原理Unna染色法主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料（碱性染料）原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是DNA和RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来“样品的固定”王金发书p37目的：迅速杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处理、切片时不被破坏。固定使得细胞大分子交联而保持在一定位置上，不至于在后面的染色等处理过程中移位或丢失而产生人工假象。常用的固定液：(醛类：甲醛、戊二醛)Unna染色法实验步骤撕取洋葱内表皮↓小离心管Carnoy固定剂15min↓95%酒精复水5min↓70%酒精复水5min↓H2O5min↙↘小离心管表面皿中实验组对照组→5%三氯乙酸（TCA）↙90℃保温,15minH2O5min↙Unna染液20min(室温)↓H2O漂洗几秒后

丙酮分色6-10Sec↓H2O洗片刻↓水压片分别镜检观察Unna法背景知识核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：DNA和RNA，它们具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷酸组成，可表示如下:磷酸核糖（RNA）核酸核苷酸戊糖脱氧核糖（DNA）核苷A、G、C、U(RNA)碱基（嘌呤/嘧啶）A、G、C、T（DNA）ThegeneralstructureofribosomesinprokaryotesandeukaryotesrNTs:numberofribonucleotidesThemacromolecularcompositionofamammalianribosomeStructureofT.thermophilus70Sribosomeasdeterminedbyx-raycrystallographySmallribosomalproteins,darkgray;Largeribosomalproteins,lightgrayLightmicrographofanisolatednucleusfromaXenopusootytestainedtorevealthehundredsofnucleoli.核仁

纤维中心(FC)：位于核仁中央，低电子密度、染色浅，rRNA基因的储存位点。

稠密区(DFC)：电子密度最高，由致密的纤维构成，一般见不到颗粒；含正在转录的RNA分子。

颗粒区(GC)：位于周边，直径为15-20nm的核糖核蛋白颗粒(RNP)-代表已合成的核糖体亚单位前体颗粒。Asectionofpartofanucleuswithanucleol

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