血清蛋白与免疫固定

孙丽生化室2015–7-1血清蛋白电泳与免疫固定血清含有各种蛋白质，其等电点均在pH7.5以下，若置于pH8以上的缓冲液电泳时均游离成负离子，再向正极移动。由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度也就不同，故可将血清中蛋白质区分开来。分子量小，带电荷多者，泳动速度就快，反之亦然。按其泳动速度顺序把血清蛋白粗略分为白蛋白，α1、α2、β及γ球蛋白。

常用的电泳技术醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳

:琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质.聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的定性分析蛋白质的电泳方法，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量.毛细管电泳:经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物在电场内,每种蛋白在下列因素的影响下,以特定的速度移动:由电场（电压）及缓冲液的离子强度电泳载体胶片的蒸发程度载体的多孔性血清蛋白电泳的原理_____加样点带强负电荷的蛋白快速地向正极方向移动带微弱负电贺的蛋白由于受电子力的作用下，向负极方向移动+负极

-正极蛋白在琼脂糖上电泳的原理______在血清蛋白电泳试剂中，蛋白质在PH值为8.8含缓冲液的琼脂糖凝胶中被分离，然后用氨基黑对其进行染色，再用酸性溶液进行脱色。正常血清蛋白电泳图谱

α-2巨球蛋白白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3、C4α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白低密度脂蛋白正常参考范围：

Alb:57%-68%α1:1.0%-5.7%α2:4.9%-11.2%β:7%-13%γ:9.8%-18.2%

血清蛋白电泳的目的是什么？检测异常:

含量的变化:条带中蛋白含量的增加或减少 性质的变化:异常条带的出现血清白蛋白

血清白蛋白是血清总蛋白的主要蛋白质成分，由肝脏合成。它在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质运输、营养等方面均起着很重要的作用。白蛋白部分的变化白蛋白浓度升高：(1)常见于严重失水，血浆浓缩所致。如严重脱水、休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能降低症。(2)静脉输注白蛋白过多。(3)尚未发现单纯白蛋白浓度升高的疾病。白蛋白浓度降低：(1)白蛋白合成不足:

①急性或慢性肝脏疾病，由于白蛋白半衰期较长，在一般急性肝病患者中，其浓度变化不明显；②蛋白质营养不良或吸收不良。(2)

白蛋白丢失：

①各种肾病，Alb从尿中丢失；②肠道炎症性疾病；③烧伤及渗出性皮炎等，可从皮肤丧失大量Alb。(3)白蛋白分解代谢增加：组织损伤（手术和创伤）或炎症使组织分解增加，需要Alb大量补充。(4)白蛋白的分布异常:

肝硬化导致门脉高压时，由于合成减少和大量Alb漏入腹水的双重原因，使血浆Alb显著减少。(5)

无白蛋白血症：

是极少见的遗传性缺陷，血浆Alb含量常低于1g/L，可能无水肿症状出现，部分原因是血管中球蛋白含量代偿性升高所致（一般血浆Alb低于28g/L时，会出现水肿）。双白蛋白:持久型

：家族性血清白蛋白异常的疾病，极少见。暂时型：由药物引起

如：大量使用抗生素或水杨酸类药物时，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。

双白蛋白血症gba2a1Albα1球蛋白区域的变化减少:

肝细胞的缺失，营养不良, 蛋白的丢失,先天性的a1抗胰蛋白缺乏增加:

炎症引起a1区域的增高：a1酸性糖蛋白，a1抗胰蛋白酶和结合珠蛋白的增加。

急性炎症gba2a1Albα2球蛋白的变化减少:肝细胞的缺失,营养不良,

蛋白的丢失

增加:炎症(伴随a1区域的增高),肾病综合症(a2巨球蛋白的增加伴随b区域的增高，同时白蛋白减少)。

出现游离轻链或完整的免疫球蛋白伴随着a2的变化。双条带:

溶血标本：结合珠蛋白-血红蛋白结合,观察标本的颜色

，

结合珠蛋白显型,

b

脂蛋白的异常移动：比正常b

脂蛋白移动速度快，

出现单克隆条带。双a2条带:溶血血清标本gba2a1Alb肾病综合症gba2a1Alb%g/LNV%NVg/L白蛋白31.313.160-7142-50a12.91.21.4-2.91-2a228.912.17-115-8b23.49.88-136-9g13.55.69-166-11总蛋白=42g/lβ球蛋白的变化减少:

肝细胞的缺失,

营养不良,

蛋白的丢失.增加:

贫血症的转铁蛋白增加, β脂蛋白的增加,

酒精性硬化（肝硬化）中的β-γ桥连,

出现单克隆成分.

肾病综合症酒精性硬化（肝硬化）中的β-γ桥连gba2a1白蛋白γ球蛋白区域的变化减少:

在儿童和青少年中属生理现象（不包括带着母亲所有IgG的新生婴儿）

免疫球蛋白的缺失，

肾上腺皮质类脂醇，免疫抑制性治疗,化疗或放射性治疗，

轻链骨髓瘤增加:

肝的感染、硬化、炎症而出现的多克隆条带（部分原因是抗原刺激肝外网状内皮系统并诱发免疫反应产生抗体所致）

γ球蛋白区域的变化异常条带:

出现纤维蛋白原：血浆，

γ区的单克隆条带：恶性或良性

寡克隆条带：一般与自身免疫类疾病、先天性缺失、滤过性病毒感染及免疫抑制性治疗相关

C反应蛋白的异常增高。低γ球蛋白血症gba2a1白蛋白血浆电泳中出现的纤维蛋白原gba2a1白蛋白为了避免单克隆条带的混淆，必须对血清样本进行确认高γ球蛋白血症gba2a1白蛋白弱单克隆条带gba2a1白蛋白强单克隆条带gba2a1白蛋白双克隆条带gba2a1白蛋白寡克隆条带gba2a1白蛋白临床疾病的识别炎症肝病肾病……“M”蛋白的筛查对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白早期检出无症状的骨髓瘤患者对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察血清蛋白电泳的临床应用正常血清蛋白电泳图谱

α-2巨球蛋白白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3、C4α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白低密度脂蛋白免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血红素结合蛋白急性期反应蛋白急性炎症

白蛋白区降低，α1，α2升高PN免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血红素结合蛋白慢性炎症

白蛋白区降低，α1，α2，β,γ升高肝病时的电泳图谱NP肝硬化β-γ

桥

beta区：多克隆IgA↑NP总蛋白浓度降低(低于60g/l)肾病综合征原因:免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病低免疫球蛋白γ区降低NP高免疫球蛋白γ区升高原因:慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿NP血清蛋白电泳图谱常见类型总结图谱类型

总蛋白Albα1α2βγ低蛋白血症↓↓↓↓N↑N↓N↑急性炎症/急性时相反应N↓N↑↑/N慢性炎症型

↓↑↑↑弥漫性肝损害↓N↓↓↑↓↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑桥肾病↓↓↓↓↑↑↑不定弥漫宽γ球蛋白血症型↑↓N↑↑M蛋白血症型

在α2-γ区出现异常峰高α2（β）球蛋白血症↓↑↑↑妊娠（高α型）↓N↓↑↑N蛋白质缺陷个别区带出现特征性缺乏N:正常什么是M蛋白单克隆

浆细胞

恶性增殖产生的均一蛋白“M”MultipleMyeloma 多发性骨髓瘤Macroglobulinemia 巨球蛋白血症Malignantlymphoma 恶性淋巴瘤MonoclonalGammapathies 单克隆丙种球蛋白病电泳曲线：单株峰正常浆细胞多克隆免疫球蛋白P1P2P3P4P5正常电泳结果免疫球蛋白电泳结果（正常）正常

所有浆细胞同步合成免疫球蛋白=多克隆免疫球蛋白浆细胞恶性增殖多克隆免疫球蛋白单克隆免疫球蛋白异常电泳结果M蛋白免疫球蛋白电泳结果（异常）骨髓瘤多克隆Igs单克隆Ig---“M”蛋白正常异常恶性浆细胞增殖仅次于白血病（血液肿瘤）发病率占所有肿瘤的1~2%，血液肿瘤的10%美国：白人4/10万；黑人10/10万欧洲：2.5~3.0/10万亚洲：1~2/10万中国：无确切数据发病年龄老年病，随年龄↑发病率↑欧美：高峰65~70岁，中位年龄68岁中国：高峰55~65岁，中位年龄57岁男女比例男：女=2~2.5:1多发性骨髓瘤(MultipleMyelomaMM)多发性骨髓瘤临床表现/并发症CalciumRenalAnemiaBone涉及多个科室骨科感染科呼吸科内分泌肾内科泌尿科心内科神经科消化科多发性骨髓瘤诊治现状晚骨折预后差增加负担感染发生率高肾脏病变不可逆死亡率↑↑就诊晚2/3确诊时已达中晚期误诊率高1/3非血液科首诊>60%1557例多发性骨髓瘤误诊分析吕鸿雁,张金巧.河北医药.2009,31(9):1052-54误诊率：65.17%重视实验诊断39.8%15.6%19.8%7.6%15.6%实例患者信息性别：女年龄：73科室：中医科诊断：贫血？

多发性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性浆细胞

/浆细胞瘤ROTI有症状MM√≥10%√无症状MM

(冒烟型,SMM)√≥10%意义未明M蛋白病

MGUS√<10%早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗肿瘤M蛋白筛查是关键国际骨髓瘤基金会2010推荐的M蛋白早期筛查流程正常血清单克隆Ig单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测血清蛋白电泳是检测M蛋白的唯一方法若在区出现异常的峰,可以初步判定为M蛋白峰白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1徐玲令,杨再兴,赵文静,屠小卿,高春芳,孔宪涛.第二军医大学学报.2004,25(12):1343-45单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测单克隆M蛋白的电泳位置血清蛋白电泳出现下列异常结果在γ区出现明显条带在α2或β区带出现多余条带β条带含量出现单一升高免疫固定电泳（IFE）

ImmunoFixationElectrophoresisM蛋白？什么类型？为什么要做免疫固定GAM

kappalambda

型别例数%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重链病50.77轻链病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59双M蛋白病81.24上海新华医院,2005年出现异常血清蛋白结果需要免疫分型电泳进一步确认646例M蛋白类型分类免疫球蛋白免疫球蛋白是机体的正常生理成分分类重链：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE轻链：κ、λ10种类型免疫固定电泳将待测血清或尿标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗k或λ轻链或各类重链的抗血清抗体，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结