人教课标实验版现代生物科技专题专题2 细胞工程 动物细胞工程 动物细胞融合与单克隆抗体

动物细胞融合与单克隆抗体专题二细胞工程温故而知新——植物体细胞杂交（马铃薯番茄）融合的原生质体AB再生出细胞壁植物细胞的融合杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化植物组织培养原生质体B原生质体A去壁去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B三、动物细胞融合

细胞融合是正常的生命活动

受精作用荧光标记的小鼠细胞和人细胞融合实验示意图1.动物细胞融合概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。2、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）例如：仙台病毒４.过程：过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞了解：刚融合的时候是多核细胞细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）生物法：灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）显微镜下细胞融合过程5、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合诱导细胞融合物理（离心、振荡、电激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒主要用于制备单克隆抗体

抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？？四、单克隆抗体１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。２．动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。３．但每一个效应Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。４、在体外，一个效应Ｂ淋巴细胞是不可能无限增殖的。..

单克隆抗体传统制备抗体的方法是？用抗原反复注射动物从动物血清中分离所需抗体动物很可能接触过其他抗原，所以用这种抗体进行诊断，结果是否可靠？为什么？缺点：产量低、纯度低、特异性差如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？单克隆抗体用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。困难：效应B细胞不能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合创始人：米尔斯坦单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生单一抗体、又能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体专一抗体检验阳性1、单克隆抗体的制备BBBB瘤瘤瘤瘤１、细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞思考：杂交瘤细胞2、杂交瘤细胞产生抗体是一样吗？整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次在选择培养基上筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞多孔细胞培养板怎样二次筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测每个孔内的抗体分泌抗体能跟抗原结合的细胞即为所需细胞抗体检测板

单克隆抗体制备过程①作为诊断试剂2、单克隆抗体的应用优点：准确、高效、简易、快速②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如“生物导弹”）（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法——灭活病毒一个新细胞——杂交瘤细胞一个优势——单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势单克隆抗体

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：乙甲abcdef(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过_______分裂形成的，其DNA含量是体细胞的_______；c肯定是__细胞，乙的遗传性状与提供___________的绵羊一致.减数一半体细胞核乙甲abcdef(2)产生甲和乙的过程分别是—————和————（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫———。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是————————————————————————（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是————-------------------------有性生殖克隆核移植卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能。黑毛乙甲abcdef（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术