GB1948920《实验室生物安全通用要求》培训班1

GB-19489–2004-<实验室生物平安通用要求>培训班

中国CDC传染病所

什么是生物危险生物危险是指由生物因子构成潜在的危险，当在实验室中处置致病微生物时，或处置基因重组过程中产生的能够具有潜在生物危害的新未知基因时，或在处置致病因子的产物时，这些病原体有能够对实验室的任务人员呵斥危害。当实验室硬件条件缺失、管理制度不完善以及不规范的操作程序，导致实验室致病因子走漏和逃逸。那么能够呵斥灾难性的后果。什么是生物平安生物平安是指防止危险生物因子呵斥实验室人员暴露、向实验室外分散并导致危害的综合措施。什么是生物平安实验室生物平安实验室是指在研讨传染性疾病或微生物时可以防止病原体不测损伤的实验室气溶胶感染主要途径吸球〔即吸管〕操作。吸球是微生物学方面最根本的器具，用吸球操作时，能导致气溶胶发生，例如由吸管中向外排液，用力过猛那么会使液滴飞溅，弹离液体或固体培育基外表，释放出大量微粒；或者，当吸管末端含有物快排尽时，能够产生气泡，尤其是富于蛋白性悬液更易构成气泡，而气泡破裂就成为气溶胶。离心沉淀时，沉淀管装量太满，管盖未盖或不严，以及离心操作过操作过程中离心管破裂，都可导致气溶胶散播。气溶胶感染主要途径注射器操作时，当抽吸后或者拨出时，注射器针头由于颤抖而分发出液体微粒。用接种针去粘沾液体时，液柱断裂。镜检涂片时，液丝断裂。传染性资料倾注出来。翻开培育皿盖时，盖内壁往往有传染性的凝结水薄膜，因破裂而散播气溶胶。气溶胶感染主要途径开安瓿时，如瓿内为液体，那么当锉刀锉断瓿颈后，即能够发生气溶胶；如瓿内为枯燥的活菌或菌种，特别是用真空熔封的，更易产生溶胶。机械振荡和超声振荡，或者研磨、浸解，拨出研磨柱时，都可构成气溶胶。装有液体容器的破损或液体益出。用超声波清洗机清洗污染器具时，也能够发生大量气溶胶。在粗糙的培育基外表涂布菌液时。高压灭菌器在灭菌前的排气。从玻璃或离心管上拨出棉塞时。处置关过受感染动物的笼子。各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数超声波处理5×10-7~9-10-5混合器（开口）1×10-6（开始1min关闭，然后打开）~2×10-3（从开始即打开）混合器（闭锁）9×10-9（螺口罩）~2×10-8*（塑料罩）液体下滴2×10-6（90cm高）由吸管混合2×10-6（无吹出）~1×104（有吹出）离心作用产生的飞沫2×10-6瓶子的振荡7×10-9~2×10-3各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数干燥后安瓿的开封肉汤2×10-9半血清4×10-9-9从试管上取下棉塞6×10-9~2×10-7白金耳放在火焰上加热3×10-9~3×10-7把冻结干燥的粉末状物倒入别的试管2×10-11各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数把冻结干燥的安瓿的断1、以牛奶肉汁悬浮液作原料时3×10-92、以加营养的肉汁作原料时3×10-93、以羊的血清作原料时4×10–104、用浸酒精纱布覆盖时05、用干燥灭菌纱布覆盖时6×10-11各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数捣碎器1、开放式2×10-32、运动中拧紧盖，停转后1min打开1×10-6

3、用塑料罩罩着进行2×10-84、拧紧盖进行9×10-9能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头意外的注射．不要修剪针头·使用针头可锁定式注射器以防止针头和针管的脱肉，或使用针头或针管为一体的一次性注射器．．运用良好的实验技术，如：一小心地将液体注入针管以尽可能地减少气泡或使培养液起泡能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头意外的注射一避免用注射罪搅拌传染性液体；否则，应保证针尖在药管内液体表层下，避免用力过度。一当从有橡皮塞的瓶子上取下针头时，应用经适当的消毒剂浸泡了的棉团包住针头和瓶塞．一垂直地将注射器内的多余的液体和气泡排人浸有适当的消毒剂的棉团或装有棉花的小瓶中.能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头。处理传染性物质时，所有的操作应在生物安全操作箱内进行。。给动物注射时应对动物加以控制。进行鼻口注射时，使用钝头针头或套管。使用生物安全操作箱。用后进行高压灭菌处理并保证使用正确的废物处理方法。离心机会产生烟雾，喷溅和试管破裂使用封闭式甩桶（安全杯）能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险离心机会产生烟雾，喷溅和试管破裂使用封闭式甩桶（安全杯）超速离心机会产生雾，喷溅和试管破裂在离心机和真空泵之间安HEPA过滤器。对每台马达的盍时间进行措施以减少机械故障在生物安全操作箱内拆卸甩干桶。能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险厌氧罐爆传染性物质的喷溅确保催化剂周围的金属线外壳的完完整烘干箱内爆、玻璃碎渣和传染性物质的喷溅放在坚固的线圈内均化吕，组织碾磨机产生烟雾和泄漏在生物安全操作箱内操作。使用特制的型号以防止马达轴承和0形垫圈的泄漏或使用stomacher.能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险近距离声波定位器，超声波清洗器听力损害和皮肤发炎确保操作时保持距离以避免次谐波的危害。戴上保护手套，防止高频以及洗涤剂的危害。培养基搅拌器，摇动器，产生烟雾溢出和泄漏在生物安全操作箱内或特制的严格密封的容器内操作。搅拌器用强力带螺旋塞的培养基玻璃瓶，如果需要，安装有过滤保护咀的出口并盖严。能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险冷冻箱产生烟雾和直接接触污染源使用0型连接器，封闭整个冷冻箱。使用空气过滤器以保护真空管。使用有效的消毒方法，如化学药剂家用冰箱有易燃物品（如自动温度调整器，电灯开关，加热管等），这些可导致箱内储存的易燃溶剂发出的蒸汽的燃烧在家用冰箱上放上警告标志：“在此冰箱内严禁存放易燃溶剂”。在冰箱的外部安装人工温度控制器并在冰箱箱体上电线经过的位置加以封闭。注意：自动除霜不能这样改造。能够产生危险的设备和操作方法设备危险如何防止和减少危险水浴器具微生物的滋生，某些金属接触叠氮化钠后可产生易爆炸的混合物进行定期的洗涤和消毒。不能用叠氮化钠防止微生物的滋生生物平安实验室微生物操作技术规范实验室事故、损伤以及与任务有关的感染主要是由于人为失误、不良实验技术以及仪器运用不当呵斥的，实验室样品的搜集以及内部传送和接纳不当时，都可以带来使相关人员感染的危险。应建立完善的管理制度与操作细那么，防止或尽量减少这类问题的发生。生物平安实验室微生物操作技术规范样品容器样品容器可以是玻璃的，但最好运用塑料制品。样品容器该当巩固，正确地用盖子或塞子盖好后应无走漏。在容器外部不能有残留物。容器上该当正确地张贴标签以便于识别。样品的要求或阐明书不可以卷在容器外面，而是要分开放置，最好放置在防水的袋子里。样品在设备内的传送为了防止不测走漏或溢出，该当运用盒子等二级容器，并将其固定在架子上使装有样品的容器坚持直立。二级容器可以是金属或塑料制品，应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用。密封口最好有一个垫圈，要定期去除污染。样品接纳需求接纳大量样品的实验室该当指定专门的房间或空间。生物平安实验室微生物操作技术规范包装开启接纳和翻开样品的人员该当了解样品对身体安康的潜在危害，并接受过如何采用常规预防措施的培训，尤其是处置破碎或走漏的容器时更应如此。样品要在生物平安柜内翻开，并预备好消毒剂。生物平安实验室微生物操作技术规范移液管和移液辅助器的运用1．应运用移液辅助器，严禁用口汲取。2．一切移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。3．不能向含有感染性物质的溶液中吹人气体。4．感染性物质不可以用移液管反复吹吸混合。5．不能将液体从移液管内用力吹出。6．刻度对应(Mark—to—mark)移液管不需求吹出最后一滴液体，因此最好运用这种移液管。生物平安实验室微生物操作技术规范移液管和移液辅助器的运用7．污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管该当在消毒剂中浸泡18／，24小时后再进展处置。8．盛放废弃移液管的容器该当放在生物平安柜内，而不能放在外面。9．固定有皮下注射针头的注射器不可以用于移液。该当用钝头导管替代针头。可以用工具翻开瓶塞后再用移液管取样，从而防止运用注射器和针头。10．为了防止感染性物质从移液管中不测滴出而分散，在任务台面该当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，运用后将其高压灭菌或按感染性废物处置。生物平安实验室微生物操作技术规范防止感染性物质的分散1．为了防止转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2—3mm并完全封锁，手柄(shanks)的长度应小于6cm以减小振动。或者采用一次性灭菌棉签。2．运用封锁式微型电加热器消毒接种环可以防止在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好运用不需求再进展消毒的一次性接种环。3．为了防止产生气泡和气溶胶的分散，不要在玻片上进展触酶实验，而该当采用试管、毛细管或盖玻片法。4．预备高压灭菌和／或处置的废弃样品和培育物该当放置在防漏的容器内，照实验室废物袋。5．在每一阶段任务终了后，必需采用适当的消毒剂去除任务区的污染。生物平安实验室微生物操作技术规范生物平安柜的运用1．应参考国家规范和相关文献，引见生物平安柜的运用方法和局限性。并发给任务人员书面的操作步骤、平安或操作手册。应明确注明当出现溢出、破损或不良操作时，平安柜就不再能维护操作者。2．生物平安柜必需运转正常时才干运用。3．生物平安柜在运用中不能翻开玻璃察看挡板。4．平安柜内应尽量少放置器材或样品，不能妨碍后部的气流循环。样品在放人平安柜内的任务区前需求去除外表污染。5．平安柜内不能运用酒精灯，否那么熄灭产生的热量会干扰气流并能够损坏过滤器。允许运用微型电加热器，但最好运用一次性无菌接种环。

生物平安实验室微生物操作技术规范生物平安柜的运用6．一切任务必需在任务台面的中后部进展，并可以经过察看挡板看到。7．尽量减少操作者身后的人员流动。8．操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。9．实验记录、移液管以及其他物品不可以妨碍前面的空气格栅，由于这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。10．任务完成后以及每天下班前，应运用适当的消毒剂对生物平安柜的外表进展擦拭。11．任务开场前和终了后，平安柜的风机应至少运转5分钟。生物平安实验室微生物操作技术规范防止感染性物质的注入1．经过仔细练习和仔细操作，可以防止破碎玻璃器皿的不测刺伤。尽能够用塑料制品替代玻璃制品。2．皮下注射针头、玻璃吸管以及破碎的玻璃均能够将感染性物质注入体内。3．以下两点可以减少针刺事故：(a)注射时特别小心(b)减少运用注射器和针头；许多操作可用带有钝头导管的注射器替代。可用一些简单的安装来翻开瓶塞，然后运用吸管取样。4．不要重新给用过的针头戴护套。一次性注射器用完后，不用将针头从注射器上取下，应丢弃在防穿透的带盖容器中。5．该当用塑料吸管替代玻璃吸管。生物平安实验室微生物操作技术规范血清的分别1．只需经过严厉培训的人员才干进展这项任务。2．操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的维护安装。3．规范的实验操作技术可以防止或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清该当小心汲取，而不能倾倒。严禁用口吸液。4．移液管运用后应完全浸入次氯酸盐或其他适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡至少18小时，然后再丢弃或灭菌清洗后反复运用。5．带有血凝块等的废弃样品管，在加盖后该当放在适当的防漏容器内高压灭菌和／或熄灭。6．为了清洗喷溅和溢出的血样，该当备有每天新颖配制的次氯酸盐溶液。生物平安实验室微生物操作技术规范离心机的运用1．在运用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保证微生物平安的前提条件。2．应按照操作手册来操作离心机。3．离心机放置的高度该当使低于平均身高的任务人员也可以看到离心机腔体内部，以正确放置十字轴和离心管套。4．离心管和盛放离心样品的容器该当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在运用前应检查能否破损。5．用于离心的试管和样品容器该当一直结实盖紧(最好运用螺旋盖)。6．离心管套的装载、平衡、密封和翻开必需在生物平安柜内进展。生物平安实验室微生物操作技术规范离心机的运用7．离心管套和十字轴应按分量配对，并在装载离心管后正确平衡。8．操作指南中应给出液面间隔心管边缘需求留出的空间大小。9．空离心管套该当用蒸馏水或乙醇(异丙醇，70％)平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能运用。10．对于危险度3级和4级的微生物，必需运用可封口的离心离心管套(平安杯)。11．当运用固定角离心转子时，必需小心不能将离心管装得过满，否那么会导致漏液。12．该当每天检查离心机内转子部位的腔壁能否被沾染或弄脏。如污染明显，应重新评价离心操作规程。生物平安实验室微生物操作技术规范离心机的运用13．该当每天检查离心转子和离心管套能否有腐蚀或细微裂痕。14．每次运用后，要去除离心管套、转子和离心机腔的污染。15．运用后离心管套该当倒置存放使平衡液流干。16．当运用离心机时，能够放射出可在空气中传播的感染性颗粒。假设将离心机放置在传统的前开式的I级或Ⅱ级生物平安柜内，这些粒子由于运动过快而不能被平安柜内的气流截留。而在Ⅲ级生物平安柜内封锁离心时，可以防止生成的气溶胶广泛分散。但是，良好的离心操作技术和结实加盖的离心管可以提供足够的维护，以防止感染性气溶胶和可分散粒子的产生。生物平安实验室微生物操作技术规范匀浆器＼摇床＼搅拌器和超声处置器的运用1．实验室不能运用家用(厨房)匀浆器，由于它们能够走漏或释放气溶胶。运用实验室公用搅拌器和消化器(stomacher)更为平安。2.盖子、杯子或瓶子该当坚持正常形状，没有裂痕或变形。盖子应能封盖严密，衬垫也应处于正常形状。生物平安实验室微生物操作技术规范3．在运用匀浆器、摇床和超声处置器时，容器内会产生压力，含有感染性物质的气溶胶就能够从盖子和容器间隙逸出。由于玻璃能够破碎而释放感染性物质并损伤操作者，建议运用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯(po1ytetranuoroe-thylene，PTFE)容器。4．运用匀浆器、摇床和超声处置器时，应该用一个结实透明的塑料箱覆盖设备，并在用完后消毒。能够的话，这些仪器可在生物平安柜内覆盖塑料罩进展操作。5．操作终了后，应在生物平安柜内翻开容器。6．应对运用超声处置器的人员提供听力维护。生物平安实验室微生物操作技术规范组织研磨器的运用1．运用玻璃研磨器时应戴手套，并用一块具有吸收性的软物包住研磨器。塑料(聚四氟乙烯)研磨器更加平安。2．操作和翻开组织研磨器时该当在生物平安柜内进展。生物平安实验室微生物操作技术规范冰箱与冷柜的维护和运用1．冰箱、低温冷柜和干冰柜该当定期除霜和清洁，应清理出一切在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进展面部防护，清理后要对内外表进展消毒。2．储存在冰箱内的一切容器该当清楚地标明内装物品的学名、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品该当高压灭菌并丢弃。3．该当保管一份冻存物品的清单。4．除非采用有效防爆措施，否那么冰箱内不能放置易燃溶液并冰箱门上应明确标示。生物平安实验室微生物操作技术规范装有冻干感染性物质安瓿的开启当翻开装有冻干物的安瓿时必需小心，由于其内部能够处于负压，瞬间进入的空气能够使一些物质分散进入空气。安瓿应该在生物平安柜内翻开，建议按以下步骤翻开安瓿：1．首先去除安瓿外外表的污染。2．假设管内有棉花或纤维塞，可以在管上接近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹。3．用一团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以维护双手，然后手持安瓿从标志的锉痕处翻开。4．将顶部小心移去并按污染物处置。5．假设塞子依然在安瓿上，用消毒镊子除去。6．缓慢向安瓿中参与液体来重悬冻干物，防止出现泡沫。生物平安实验室微生物操作技术规范装有感染性物质安瓿的储存装有感染性物质的安瓿不能浸入液氮中，由于这样会呵斥有裂痕或密封不严的安瓿在取出时破碎或爆炸。假设需求低温保管，安瓿该当储存在液氮上面的气相中。此外，感染性物质应储存在低温冰柜或干冰中。当从冷冻储存器中取出安瓿时，实验室任务人员该当进展眼睛和手的防护。以这种方式储存的安瓿在取出时应对外外表进展消毒。生物平安实验室微生物操作技术规范样品的搜集、标志和运输1．一直遵照常规预防措施；一切操作均要戴手套2．该当由受过培训的人员来采集病人或动物的血样。3．在静脉抽血时，该当运用一次性的平安的抽真空设备取代传统的针头和注射器，由于这样可以使血液直接采集到带塞的运输管和／或培育管中。用完后自动废弃针头。4．装有样品的试管应置于适当容器中运至实验室，在实验室内部转运也应这样阐明书该当分开放置在防水袋或信封内。生物平安实验室微生物操作技术规范玻璃器皿和“锐器〞1．尽能够用塑料制品替代玻璃制品。只能用实验室级别(硼硅酸盐)的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。2．不能将皮下注射针作为移液管运用。可以运用钝头导管。生物平安实验室微生物操作技术规范用于显微察看的薄膜和涂片用于显微察看的血液、唾液和粪便样品在固定和染色时，并不用杀死涂片上的一切微生物和病毒。该当用镊子拿取这些东西，恰当储存，并经去除污染和／或高压灭菌后再丢弃。自动化仪器(超声处置器、涡旋混合器)1．为了防止液滴和气溶胶的分散，这些仪器应采用封锁型的。2．排出物该当搜集在封锁的容器内进一步高压灭菌和／或废弃。3，在每一步完成后应根据操作指南对仪器进展消毒。生物平安实验室微生物操作技术规范组织1．组织样品该当采用福尔马林固定。小块样品，如针头活检样品，可以在几个小时内固定和消毒，但是较大样品那么能够需求几天时间。2．该当防止冰冻切片。假设必需进展冰冻切片，该当罩住冰冻机，操作者要戴平安防护罩(面具)。去除污染时，仪器的温度要升至20~C。生物平安实验室微生物操作技术规范生物平安实验室消毒与灭活

消毒和灭菌的根本常识对于实验室生物平安是至关重要的。生物平安中关于去除污染的特殊要求要根据实验任务的类型和所操作感染性物质的特性来决议。因此，有必要利用知的普通讯息来确立更详细的和规范化的程序，以满足某些特殊实验室中各种不同生物危害程度的需求。生物平安实验室微生物操作技术规范去除部分环境的污染需求结合运用液体和气体消毒剂来去除实验室空间、器具和设备的污染。去除外表污染时可以运用次氯酸钠(Na0C1)溶液；含有1％有效氯的溶液适于普通的环境卫生设备，但是当处置高危环境时，建议运用高浓度(5g／L)溶液。用于去除环境污染时，含有3％过氧化氢的溶液也可以作为漂白剂的代用品。可以经过加热多聚甲醛或煮沸福尔马林所产生的甲醛蒸气熏蒸来去除房间和仪器的污染。产生甲醛蒸气。前，房间的一切开口(如门窗等)都运用密封带或类似物加以密封。熏蒸该当在室温不低于21℃且相对湿度70％的条件下进展去除污染时气体需求与物体外表至少接触8小时。熏蒸后，该区域必需彻底通风后才干允许人员进入。在通风之前需求进入房间时，必需戴适当的防毒面具。可以采用气态的碳酸氢铵来中和甲醛。已有报道，可采用过氧化氢溶液的气雾熏蒸污染的空间，但对此还需求进一步的研讨。注：甲醛是一种危险和有刺激性的气体，并疑心有致癌性。应使器具有供气系统的全面罩式防毒面具。操作时该当采用“双人〞制。生物平安实验室微生物操作技术规范生物平安柜污染的去除去除I级和Ⅱ级生物平安柜的污染时，该当将适量的多聚甲醛(空气中的终浓度到达0．8％)放在电热板或电热盘上(在生物平安柜外进展控制)。然后在生物平安柜内放置第二个放有比多聚甲醛多10％的碳酸氢铵的加热板或盘。第二个盘上覆盖一个可以从远处将其移走的盖子(如衔接一个可以从生物平安柜外拉动的绳子)，从而尽量减少对甲醛气体的提早中和。假设相对湿度低于70％，在运用强力胶带[如“管道密封胶带〞(ducttape)]密封前部封锁板前，还要在平安柜内部放置一个开口的盛有热水的容器。假设前部没有封锁板，那么可以用重型塑料布(heavygaugeplastic，heeting)粘贴覆盖在前部以保证气体不会走漏进入房间。生物平安实验室微生物操作技术规范翻开多聚甲醛盘的加热开关，1小时后或多聚甲醛完全蒸发后封锁。让生物平安柜静置过夜。移去第二个盘子的盖后翻开加热开关，让碳酸氢铵挥发。然后，封锁开关并启动平安柜让碳酸氢铵气体循环1小时。移去前封锁板(或塑料布)后就可以运用生物平安柜了。生物平安实验室微生物操作技术规范洗手／去除手部污染接触生物危害性资料时，必需戴适宜的手套。但是这并不能替代实验室人员需求经常地、彻底地洗手。接触过生物危害性资料和动物后、运用过卫生间后、分开实验室前以及吃东西前都必需洗手。生物平安实验室微生物操作技术规范大多数情况下，用普通的肥皂和水彻底冲洗对于去除手部污染就足够了。但在高度危险的情况下，建议运用杀菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10秒钟，用干净水冲洗后再用干净的纸巾或毛巾擦干(假设有条件，也引荐运用暖风干手器)。引荐运用脚控或肘控的水龙头。假设没有安装，应运用纸巾或毛巾关上水龙头以防止再度污染洗净的手。如上所述，假设没有条件彻底洗手或洗手不方便，应该用酒精擦手来去除双手的轻度污染生物平安实验室微生物操作技术规范加热灭菌和消毒加热是最常用的去除病原体污染的物理手段。“干〞热没有腐蚀性，可用来处置实验器材中许多可耐受160~C或更高温度2～4小时的物品。熄灭或焚化也是一种干热方式。高压灭菌的湿热法那么最为有效。煮沸并不一定能杀死一切的微生物或病原体，但假设其他方法(化学杀菌、去除污染、高压灭菌)不可行或没有条件时，也可以作为一种最起码的消毒措施。灭菌后的物品必需小心操作并保管，以保证在运用之前不再被污染。生物平安实验室微生物操作技术规范高压灭菌压力饱和蒸汽灭菌(高压灭菌)是对实验资料进展灭菌时最有效和最可靠的方法。对于大多数目的，以下组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌效果：——134℃、2、3分钟——126℃、10分钟

——121℃、15分钟——115℃、25分钟生物平安实验室微生物操作技术规范高压灭菌器的装载为了利于蒸汽的浸透和空气排出，高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内。要使蒸汽可以作用到其内容物。经过高压灭菌器内的蒸汽，由下而上置换空气并经排气孔排出。当一切的空气排出后，封锁排气孔的阀门，缓慢加热使压力和温度上升到平安阀预置的程度。此时记为灭菌开场时间。灭菌终了后停顿加热，让温度下降到80℃以下再翻开盖子。生物平安实验室微生物操作技术规范高压灭菌器运用本卷须知以下规定可以减小操作压力容器时会发生的危害：1．高压灭菌器的操作和日常维护应由受过良好培训的人员担任。预防性的维护程序应包括：由有资质人员定期检查灭菌器内部、门的密封性以及一切的仪表和控制器。2．应运用饱和蒸汽，并且其中不含腐蚀性抑制剂或其他化学试剂，这些物质能够污染正在灭菌的物品。

3．一切要高压的物品都应放在空气可以排出并具有良好热浸透性的容器中；灭菌器内不能塞得过紧，否那么蒸汽不能均匀作用于装载物。生物平安实验室微生物操作技术规范4．当灭菌器内部加压时，互锁平安安装可以防止门被翻开，而没有互锁安装的高压灭菌器，该当封锁主蒸汽阀并待温度下降到80℃以下时再翻开门。5．即使温度下降到80℃以下，操作者翻开门时也该当戴适当的手套和面罩来进展防护。6．在进展高压灭菌效果的常规监测中，生物指示剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品的中心。最好在“最大〞装载时用热偶计和记录仪进展定时监测，以确定灭菌程序能否恰当。7．灭菌器的过滤器(假设有)该当每天拆下清洗。8．该当留意保证高压灭菌器的平安阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。生物平安实验室微生物操作技术规范熄灭在处置那些经过或事先未经去除污染的动物尸体以及解剖组织或其他实验室废物时，熄灭是一种有效的方法。只需在实验室可以控制熄灭炉，并且可以有效地控制温度和配备了二级熄灭室时，才干用熄灭替代高压灭菌来处置感染性物质。熄灭也是一种处置被朊蛋白污染物品的有效方法生物平安实验室微生物操作技术规范需求熄灭的资料(即使事先已去除污染)该当用袋子运送到熄灭室，最好运用塑料袋。担任熄灭的任务人员该当接受关于如何装载和控制温度等的正确指点。还需求注明的是，熄灭炉的操作能否有效主要取决于对需求处置的废物中物品的正确混合。危险度评价危险评价首先集中在实验室相关感染的防御上。当实验室活动涉及传染或潜在传染因子时，对某一个特定的操作程序或实验进展危险度评价，危险评价协助正确选择生物平安程度(设备、设备和操作)，评价职业性疾病风险、采取相应平安防护措施、减少危险性事件发生。危险度评价在进展危险性的评价和选择平安防护措施时，应充分思索有关实验以及实验动物的特点、能够直接或间接参与风险的传染性病原，任务人员的专业素养及阅历，实施工程的详细活动和程序等要素，做出决策。根据传染过程的根本要素，减少任务人员暴露的危险和使环境污染降到最低限制。危险度评价危险度评价该当由那些对微生物特性、设备和操作程序、动物模型、屏障设备和设备最为熟习的人员来进展。授权的专业人员进展。危险度评价一旦进展，在必要时就该当对它进展常规性的评价和修订，同时要思索搜集与危险程度相关的新资料以及来自科学文献的其他相关的新信息。微生物的危险评价涉及范畴1．知的传染微生物经过鉴定的病原体，有实验室研讨、疾病监测和流行病学研讨危险评价资料。2．未知传染微生物对未知传染微生物危险评价的需求思索以下方面：传染性、传播途经、发病率和死亡率等流行病学和病原血清型等生物学特性资料。微生物的危险评价涉及范畴3．基因修饰微生物经过基因修饰技术获得的具有新特性的微生物。通常经过受体和供体的生物特性和用量，进展危险性评价。修饰后能否改动其毒性、繁衍才干、宿主范围，与宿主染色体整合性和对细胞生长周期的影响等。4．未知传染性的生物资料在短少资料证明有或没有未知传染性微生物资料时应该扩展防护范围和提高防护级别。危险度评价内容进展微生物危险度评价最有用的工具之一就是列出微生物的危险度等级。然而对于一个特定的微生物来讲，在进展危险度评价时仅仅参考危险度等级的分类是远远不够的，适当时还应思索其他一些要素，包括：1——微生物的致病性和感染剂量越是发病率高、后果严重的病原越是危险。病原体的来源在危险评价时必需思索在内。“来源〞涉及到微生物来源的地域、宿主和特点。危险度评价内容2——暴露的后果发生暴露后对人员或环境能够的危害后果3——自然感染途径传染性病原能经过四种主要的感染途径而致病。即摄人、吸人、黏膜接触以及肠道外直接接种。感染途径，能够与自然患病的感染途径相类似，也能够截然不同。危险度评价内容4——实验室操作所呵斥的其他感染途径(非消化道途径、空气传播、食入)传染性病原可经过天然的或人为的方式从实验动物体内逸散。经尿液、唾液和粪便排出或从皮肤损害部位释出是天然逸散方式的例子。促使传染性病原从实验动物体内逸散的人为方式有很多，用针头和注射器从病毒血症动物身上抽取血样、活组织检查或尸体剖检操作者时被带有污染物的针头、刀刃刺伤、割破或擦伤，以及被动物咬伤而直接接种；照料动物、实验操作时吸人带污染物的气溶胶被溅出的污染物，污染的手和污染的外表接触操作人员的眼睛、鼻腔或口腔黏膜。气溶胶传播的能够性越大，危险性越高。经过气溶胶传播的疾病最容易发生实验室感染。危险度评价内容进展微生物危险度评价最有用的工具之一就是列出微生物的危险度等级。然而对于一个特定的微生物来讲，在进展危险度评价时仅仅参考危险度等级的分类是远远不够的，适当时还应思索其他一些要素，包括：1——微生物在环境中的稳定性不仅思索微生物的传染性(细菌芽胞)，而且要思索其在环境中的存活力，抗性越强越危险。危险度评价内容2——所操作微生物的浓度和浓缩样品的体积根据研讨内容，病原体浓度决议危险的程度。浓度越高越危险。3——适宜宿主(人或动物)的存在常见的人畜共患疾病文献记载的职业性疾病来源人体患病的严重程度，对疾病的抵抗力危险度评价内容4——从动物研讨和实验室感染报告或临床报告中得到的信息在人体数据缺乏时，动物研讨数据可对危险评价提供有用的资料。动物体致病性、传染性和传播途径的信息可提供有价值的提示。但推论从一种动物到另一种动物传染性时，必需小心验证。危险度评价内容5——方案进展的实验室操作(如浓缩、超声处置、气溶胶化、离心等)实验室操作内容与其设备相关操作细那么能否可保证其不泄露，实验程序和操作方法，操作的性质和作用防止操作者摄人吸人，直接接种，割破或擦伤，针刺，咬伤直接接触能够性。危险度评价内容6——能够会扩展微生物的宿主范围或改动微生物对于知有效治疗方案敏感性的一切基因技术对开展遗传修饰微生物方面的任务进展危险度评价时，必需求包括对其潜在的危害程度、后果的严重性以及发生这种危害的能够性或频率大小，宿主的易感性，宿主菌的致病性，包括毒力、传染性、毒素生成、宿主范围的变化；受体的免疫程度以及免疫系统的形状；暴露后果的严重性；直接由插入的外源性基因片段所产生的危害当插人外源性基因后的产物具有有害生物学活性危害性等方面的评价。危险度评价内容——当地能否可以进展有效的预防或治疗干涉预防和治疗的有效性是应该思索的重要要素。有效性越低，危险性越大，反之亦然。实验室任务人员，有无免疫预防措施，文献记载的职业性疾病，任务人员的素养及阅历。危险度评价内容危险度评价时，只需在明确了上述信息的根底上，才干明确所方案开展的研讨任务的生物平安程度级别，并选择适宜的个体防护配备。对于那些所知甚少的样品当了解了足够的信息时，才干很好地进展上述危险度评价。菌〔毒〕种管理与监视系统的文件制定为保证菌〔毒〕种管理体系能规范化制度化正常运作，制定符合本单位实践情况的菌〔毒〕种管理及监视规范操作细那么〔SOP〕，是非常必要的，该〔SOP〕主要内容包括，菌〔毒〕种管理与监视规范操作细总那么，其内容包括菌〔毒〕种接纳〔分别〕规范操作细那么〔SOP〕；种子批制备与质控准操作细那么〔SOP〕；菌〔毒〕种运用、保藏、分发规范操作细那么〔SOP〕；菌〔毒〕种销毁规范操作细那么〔SOP〕；菌〔毒〕种事故应急处置规范操作细那么〔SOP〕：菌〔毒〕种管理监视规范操作细那么〔SOP〕。在各细那么中根据其实践内容或实验，制定更详细的各实验独立的操作细那么，并制造对应的规范化表格化的原始记录。菌〔毒〕种管理与监视系统的文件制定1.菌〔毒〕种管理与监视规范操作细总那么总那么的内容主要为菌〔毒〕种管理与监视的制定SOP指点思想、各SOP构成与同意程序、主要内容提要、以及各SOP目录、实施与监视部门。2.菌〔毒〕种接纳〔分别〕规范操作细那么〔SOP〕菌〔毒〕种接纳规范操作细那么〔SOP〕要求内容:接纳(外购、赠送)审批与接纳程序;对菌种来源,背景资料的要求、接纳样品的检验。菌〔毒〕种管理与监视系统的文件制定要求配套原始记录:〔1〕菌〔毒〕种外购(接受赠送)恳求表〔2〕菌种来源,背景资料登记记录〔3〕菌〔毒〕种入库登记表〔4〕外来菌种传代与检验记录菌〔毒〕种管理与监视系统的文件制定菌〔毒〕种分别规范操作细那么〔SOP〕取样程序;对菌种来源,背景资料的要求、样品的分别操作(如分别过程较复杂可分写各自独立SOP)〔1〕样品来源,背景资料登记记录〔2〕菌(毒)种分别记录〔3〕外