非剥脱性激光嫩肤作用机制的实验研究

非剥脱性激光嫩肤作用机制的实验研究非剥脱性激光嫩肤是最近几年应用于临床防治皮肤老化的新技术。因其具有无创、高效、恢复快的优点已越来越为患者所接受，应用前景广阔。有研究表明激光嫩肤后真皮胶原带增厚、Ⅰ型前胶原、Ⅰ型前胶原mRNA表达增加及羟脯氨酸含量增多。其机制尚未明了，一般认为，它可能通过激光的热损伤及损伤后的炎症反应，使血管系统释放细胞因子作用于成纤维细胞，刺激胶原蛋白合成，但没有足够的研究予以证实。也有观点认为激光可能直接刺激成纤维细胞合成胶原。胶原由成纤维细胞合成，bFGF和TGF-β1是促进成纤维细胞增殖的主要细胞因子，有研究报道在开放性损伤的皮肤中表达明显增加，它们在促进成纤维细胞合成胶原纤维加快皮肤创口愈合过程中发挥重要作用。成纤维细胞和这些细胞因子在激光非剥脱性嫩肤中的作用如何至今未见报道。本课题以昆明小鼠为动物模型，共18只，分为A、B、C三组，每组6只。A组激光照射1遍，B组激光照射2遍，间隔1分钟，C组激光照射3遍，间隔1分钟。共4次，每次间隔1周。选择1320nm激光20J／cm~2能量照射小鼠背左侧皮肤，以背右侧作自身对照。用免疫组化法检测bFGF和TGF-β1在受照射小鼠皮肤中的表达。选取包皮作体外人成纤维细胞培养，传第4代后细胞计数达1.4×10~5／ml、活力达90％以上时，将成纤维细胞随机分四组接种入24孔细胞培养板，分别为对照组及低、中、高三个照射能量组。用1320nm波长激光以15J／cm~2、20J／cm~2、24J／cm~2能量照射，共3次，每次间隔约1分种。于0(激光照射后即刻)、24、48和72小时4个时间段用ELISA法检测上清液bFGF和TGF-β1的分泌水平，测定前作细胞计数。比较bFGF和TGF-β1在体内与体外的表达异同，探讨细胞因子(bFGF、TGF-β1)在激光嫩肤中可能的作用机制和作用途径，同时通过计数成纤维细胞在激光照射后的增长变化，进一步了解1320nm激光对成纤维细胞增殖的影响，该波长应用的最适能量和治疗次数，为临床的有效治疗提供实验依据。我们的免疫组化研究显示，bFGF和TGF-β1在组织中的表达激光照射3遍组与各组比较，P＜0.01，有显著性差异。20J／cm~2以上能量照射后成纤维细胞计数增加，与对照组比较，P＜0.05，差异有统计学意义。ELISA法检测显示，激光照射后bFGF分泌的量，20J／cm~2、24J／cm~2能量组增加，24小时达高峰，与对照组相比，P＜0.01，有显著性差异。TGF-β1分泌的量在照射的各能量组均表现为下降，能量越高，下降越明显，24小时达峰底。此时，高能量组与对照组比较，P＜0.01，差异有显著性，其它2个能量组与对照组比较，P＜0.05，差异有统计学意义。该研究提示激光对成纤维细胞的直接作用是促进bFGF分泌，抑制TGF-β1分泌；而对组织的综合作用是两者分泌均增加。非剥脱性激光不仅作用于真皮成纤维细胞使bFGF分泌增加，同时也作用于血管系统，通过内皮细胞释放细胞因子刺激成纤维细胞表达bF6F、TGFβ1增加；激光照射后成纤维