藏药“蒂达(藏茵陈)”品种之一蓖齿虎耳草的品质研究

藏药“蒂达（藏茵陈）”品种之一蓖齿虎耳草的品质研究藏药“松蒂”是特色藏药“蒂达”(藏茵陈)总名称下的次级分类药物之一为藏医治疗肝胆类(赤巴病)、消化类(赤巴肠病)疾病的常用药物。前期研究基础(“松蒂”品种、资源及使用现状信息整理总结)本课题组于2007～2011年期间对“蒂达”类藏药进行了较为全面的资源植物和使用现况实地调研,调查区域包括藏医药主要使用地区的西藏、青海、甘肃、四川、云南等省区。调查结果明确了：“(?)(松蒂)”是“(?)(蒂达)’类藏药总名称下的多个次级分类药物之一。实地踏查中共采集“松蒂”类资源相关标本共47号141份,经分类学鉴定,来源于虎耳草科虎耳草属22种(含变种)植物。收集了藏医医疗机构、门诊、制药企业及市场销售的“松蒂”类商品药材样品8批。因受藏区药材多来自于“就地自采”的传统模式影响,“松蒂”类藏药存在来源复杂、品种混乱的问题。经基原鉴定,并结合标本分布情况：西藏、青海、四川等藏区使用的“松蒂”主要来源于篦齿虎耳草Saxifragaumbellulatavar.pectinata,该品种被《藏药标准》收载,且符合经典藏药文献中对“松蒂”正品的描述,也是目前在藏医院、藏药厂及市场销售的“蒂达(藏茵陈)”四大主流品种之一。但同属的爪瓣虎耳草S.unguiculata(青海玉树州)、青藏虎耳草S.przewalskii和唐古特虎耳草S.tangutica(青海黄南州)等在不同地区也作“松蒂”使用或多种混用。“松蒂”在整个“蒂达”类药材中疗效突出,偏性明显,在临床上主要应用于肝胆类疾病(“赤巴病”)和消化系统类疾病(“赤巴肠病”),在藏医中是区别于其他“蒂达”使用的,具有不可替代性,在西藏、青海等藏民族聚居地使用量较大,参与组成至少42种经典藏药处方,制成十几种藏成药在藏区上市或医院内部销售,具有可观的发展前景。“松蒂”正品篦齿虎耳草主要分布在四川西北部、西藏东南部雅鲁藏布江流域海拔3000-4100m的岩壁石隙或山坡裸地上,呈零星分布,植株数量较多,但单株生物量小,加之药用在花期采集全株,严重影响种子的产生,因而资源解体危险度高,被《濒危藏药物种名录》列为一级濒危藏药。可见藏药“松蒂”类药材的名称、基原、分布等在不同藏区存在显著差异,临床使用量较大,但相关研究较少,质量标准匮乏,无法保证用药准确规范。故本研究采用成分分离纯化、波谱解析、形态组织学比较、仪器分析及聚类分析等方法,重点针对“松蒂”主流品种蓖齿虎耳草S.umbellulatavar.petinata开展化学成分分离鉴定、药材鉴别、常规检查、含量分析、指纹图谱比对等研究,按照《中国药典》药材标准研究要求制定了藏药“松蒂”(蓖齿虎耳草)的质量标准草案,并从多方面比较了“松蒂”4种基原植物的差别,取得如下结果：1蓖齿虎耳草化学成分分离鉴定利用硅胶色谱、反相色谱等多种分离纯化技术,通过UV、1H-NMR13C-NMR、GC-MS、HPLC-MS等理化方法及光谱分析鉴定各化合物的结构,从蓖齿虎耳草中共分离得到18个化合物,目前鉴定了其中9个化合物,分别为：己降葫芦苦素F(Ⅰ、),虎耳草皂苷A(Ⅱ),虎耳草皂苷B(Ⅲ),虎耳草皂苷C(Ⅳ),山柰酚-3-O-(6”-乙酰基)-D-半乳糖苷(V),2’,4’,5,7-四羟基-5’-甲氧基黄酮(Ⅵ),槲皮素(Ⅶ),芦丁(Ⅷ),绿原酸(Ⅸ)。以上9种成分均为首次从该植物中分离得到,其中虎耳草皂苷A、虎耳草皂苷B、虎耳草皂苷C为新化合物。明确了黄酮和三萜皂苷为蓖齿虎耳草中两类主要成分。2“松蒂”(蓖齿虎耳草)的质量标准研究在成分研究基础上,以10批蓖齿虎耳草为材料,首次建立了较为完善的蓖齿虎耳草质量标准。确定了药材的来源、性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别；[检查]项下规定了水分、总灰分、酸不溶性灰分的限量标准；规定了[浸出物]含量；[含量测定]项下采用紫外分光光度法测定了黄酮类成分和皂苷类成分的总量,采用HPLC方法测定多成分指标,综合评价的药材质量,分别规定：按干燥品计算,采用UV法,含总黄酮以芦丁(C27H30016)计,不得少于7.0%；含总皂苷以人参皂苷Rb,(C54H92O23)计算的总量不少于1.8%；采用HPLC法,含绿原酸(C16H1506)不得低于0.02%,含芦丁(C27H30016)和槲皮素(C15H10O7)的总量不得低于0.09%。在上述基础上,起草了《蓖齿虎耳草质量标准(草案)》及《蓖齿虎耳草质量标准起草说明》,并向藏药质量标准协调工作委员会推荐作为《藏药标准(新版)》收载项目。3“松蒂”(蓖齿虎耳草)的HPLC指纹图谱运用高效液相色谱法检测了10批不同来源和不同批次的蓖齿虎耳草药材样品,根据已分离成分标定15个共有色谱峰,指认了其中的9个色谱峰的成分名称。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件进行模式分析、共有峰确定及相似度计算,并结合SPSS19.0统计分析软件对所得的高效液相指纹图谱数据进行聚类分析。分析结果表明：各批次样品成分类型基本一致,黄酮和皂苷为蓖齿虎耳草的主要化学成分。但指纹图谱特征峰数量和峰面积受采集地、样品来源方式影响较大,来源于同一地区品种准确性和纯净度较高的样品相似度较高。4四种“松蒂”虎耳草类基原植物区别研究从性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、HPLC指纹图谱等多方面比较了蓖齿虎耳草和其他三种“松蒂”资源植物爪瓣虎耳