实时荧光定量PCR技术的研究方案进展与应用

摘要：实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来到达定量的目的，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已在动植物基因工程，微生物和医学领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理，检测方法的原理、优缺点进展了评述，重点及创新点是对PCR技术在医学领域，食品行业，植物方面的应用进展了比较全面的综述，并对实时荧光定量PCR技术的普及应用及领域的前景做了进一步的展望。关键词：实时荧光定量PCR;应用；展望AbstractRealtimePCRtechnologautomationhasbeenwidelyusemicrobesandmedicinefielindustryplantaspectsoftheappprospectsandrealtimePCRtechnology聚合酶链反响(PCR)技术自1985年问世以来，以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高；因此，使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反响等优点，已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进展了综述。设计出不同的molecularbeaconLightcycler(2)比较Ct值的相对定量法2.实时荧光定量PCR技术的应用.量检测。赵卫东等[26]通过荧光定量的方法对各细胞株的转录因子T-box作为相关食品法规的标准检测方法。日本和美国等13个实验FQPCR本、样品处理及多基因同时分析等问题。生物芯片技术与荧光探针定量技术的结合将有助于上述问题的解决[321,届时将大大推动该技术在生命科学领域的应用普及，特别是临床诊断领域的推广。随着科学技术与科学知识的增长，实时荧光定量PCR技术将继续被改进，新的问题被攻克，从而建设更新、更便捷、更完善的PCR体系，并应用到更广、更深的科学领域。evaluatinguncertaintyofabsoluterealtimePCRquspecificityofstructuredDNAprobesProcNatlAcadSciUpolymerasechainreactionforhepatitisBHollandPMAbramsonRDWachainreactionproductbyutilizingtheexonDNApolymerase.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88:727ofspecificDNAsequences.Biotechnology,1992,10:413.HiguchiRFocklerCetalKinhybridization.NationalBiotechnology,1996,14ofrapidcycleDNAamplifimultisamplefluorimeterwithrapidtemperaturecontroMayerZFrberPGeisenRMonitoringthemeasuringtheconcentratioanddetectionofgenepromoterhypermAndersenCLJeusenJLOrsets[J].CancerRes.,2004diseaseinacutepromyelocyticleukemiforthedetectionofminimalresijunct