菌落总数测定实验报告

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篇一：食品中菌落总数的测定

蛋糕中菌落总数的测定

【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。目前应用于测定食品中菌落总数的方法有:纸片法、电阻抗法等。本实验采用国标法(gb\T4789.2-20XX)对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。并与gb7099-20XX糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。

一、实验目的

1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。

二、实验原理

菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、ph、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

三、实验设备与材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。

3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。

3.10ph计或ph比色管或精密ph试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器。

3.12范记原味蛋糕，烘烤类糕点（冷加工），执行标准（gb/T20977）

四、试剂和培养基及其制备

4.1平板计数琼脂培养基

4.1.1成分:胰蛋白胨5.0g;酵母浸膏2.5g;葡萄糖1.0g;琼脂15.0g;蒸馏水1000mLph7.0±0.2

4.1.2制法:将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节ph。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。

4.2磷酸盐缓冲液

4.2.1成分:磷酸二氢钾（Kh2po4）34.0g;蒸馏水500mL;ph制法

贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节ph，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。

4.3无菌生理盐水

4.3.1成分:氯化钠8.5g;蒸馏水1000mL

4.3.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

五、实验步骤

5.1采样

5.1.1在南宁市范记饼屋采购生产日期为当天的同批次的范记原味蛋糕，样品为即食类预包装食品,采样时，取相同批次的最小零售原包装，检验前要保持包装的完整，避免污染。5.1.2采集样品的标记

应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记，采样人应清晰填写采样单（包括采样人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息）。5.1.3采集样品的贮存和运输采样后，应将样品在接近原有贮存温度条件下尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。如不能及时运送，应在接近原有贮存温度条件下贮存。5.1.4样品处理

实验室接到送检样品后应认真核对登记,确保样品的相关信息完整并符合检验要求。实验室应按要求尽快检验。若不能及时检验，应采取必要的措施保持样品的原有状态，防止样品中目标微生物因客观条件的干扰而发生变化。5.2检验员分组

实验时检验员分A、b、c三大组，每大组再分别分为三个小组，各组分工如下：

A组测打开包装后4℃保存5h的样品，A1、A2、A3三个小组分别测三个不同稀释度样品b组测打开包装后常温下存放5h的样品，b1、b2、b3三个小组分别测三个不同稀释度样品c组做空白对照实验。

5.3样品的制备与稀释5.3.1试样的前处理

进入无菌室后，先打开酒精灯，用酒精棉球擦试手及样品外包装，如为原包装，用灭菌镊子夹下包装纸，采取糕点不同部位的样品25g置入盛有225mL的灭菌生理盐水的无菌均质杯

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内，8000~10000r/min均质1~2min，制成1∶10的样品匀液。

5.3.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。5.3.3按5.4.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

5.3.4根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

5.3.5及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。5.4培养

5.4.1由于糕点样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落，因此待琼脂凝固后，在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，36℃±1℃培养48h±2h。5.5菌落计数

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，cFu）表示。5.5.1选取菌落数在30cFu～300cFu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cFu的平板记录具体菌落数，大于300cFu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

5.5.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

5.5.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

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六、结果与报告

6.1菌落总数的计算方法

6.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。

6.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：

n??c/(n1?0.1n2)d

?????????????（1）

式中：

n——样品中菌落数；

Σc——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。

6.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300cFu，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30cFu，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释

倍数计算。

6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30cFu～300cFu之间，其中一部分小于30cFu或大于300cFu时，则以最接近30cFu或300cFu的平均菌落数乘以稀释倍数计算。表1稀释度选择及菌落数报告方式

6.2菌落总数的报告

6.2.1菌落数小于100cFu时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。6.2.2菌落数大于或等于100cFu时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后

面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

6.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.2.5称重取样以cFu/g为单位报告。表2小组结果记录

七、注意事项

7.1在长期的工作实践中发现糕点类样品在进行细菌总数培养的时候，容易产生菌落的蔓延，鉴于这种情况，在样品处理的时候应注意充分均匀，稍作沉淀并吸上清液进行稀释培养，在培养的时候，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL)，凝固后翻转平板，进

行培养。

7.2由于菌落总数产生误差的最主要原因来原于检验人员的经验水平，检验人员在选取平板进行计数就显得尤为重要，所以在选取平板进行计数时要尽量选取30—300cFu之间无蔓延、无片状菌落生长的平板进行计数，必要的时候要用放大镜进行观测。每次实验须做空白

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对照，如果空白对照上有菌落生长，则此次所得结果无效。

7.3由于检验时样品数量通常比较多，为了提高工作效率保持操作的连续、方便检测人员往往先将所有样品稀释后再倾注平板，这样个样品由稀释至倾注平板的时间通常要1h以上。王淑香等通过实验发现样品从稀释到倾注平板的间隔时间越长测出的菌落总数的结果越高。因此，样品从稀释到倾注平板的时间最好不要超过20min.

7.4在进行菌落计数时,有一些样品的残渣会在视觉上与菌落混淆.因此,在进行计数时应该仔细分辨。菌落的形状相对规则，比较有光泽度，更饱满，而样品的残渣比较不规则，没有菌落的饱满度和光泽度。另外，还可向培养基中添加一定浓度的TTc可以使菌落成红色,便于观测和计数,但TTc的浓度不宜过高,否则会抑制菌落的生长[5]。7.5操作要快而准，包括取样、加样、注入培养基等。7.6样品抽取时要无菌操作，并及时送检。

7.7微生物检验时以不超过两人为度，检测完要迅速进行培养。八、检验后样品的处理

8.1检验结果报告后，被检样品方能处理。检出致病菌的样品要经过无害化处理。

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8.2检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检。

【参考文献】

[1]gb/T4789.2-20XX食品安全国家标准微生物学检验菌落总数测定[m]．[2]马小筱.糕点制品菌落总数检验中不确定度的评定[m]20XX.6[3]gb4789.1-20XX.食品安全国家标准食品微生物学检验.总则[s].

[4]王淑香.王秀荣.郭晓燕等检样稀释至倾注平板时间对食品中菌落总数测定结果的影响[J].职业与健康.20XX.22(16)1265-1266.

[5]赵娣伟.菌落总数检验工作中误差原因的分析及措施[J].中华实用中西医杂志,20XX,24(5):41-42.[6]gb7099-20XX食品安全国家标准.糕点、面包卫生标准

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篇二：实验报告20XX细菌总数

大学活动场所室内环境细菌密度测定

实验成员：罗小青、施俊译、上官玉虎、叶紫宇、徐丹丹

1、目的：了解在校学生主要活动场所室内环境细菌密度情况，提高学生对自己环境卫生意识，同时锻炼学生的实际操作能力。

2、方法：该测定有两种方法，其一是撞击法，它是通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到培养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。另一种方法是自然沉降法，即采样法，它是在直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，或更多暴露时间进行分析，再经37℃、48h培养后，计算生长的细菌菌落数的采集测定方法。由于设备的不完全，该细菌测定方法采用采样法。3、仪器和设备3.1高压蒸汽灭菌器3.2恒温培养箱

3.330个培养皿（直径90mm）3.4锥形瓶3.5ph试纸3.6酒精灯4培养基

4.1营养琼脂培养基4.1.1成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15~20g蒸馏水1000mL

4.1.2制法：将上述各成分混合，加以溶解，校正ph至7.4，过滤分装，在121℃

20min高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注15mL于培养皿中，制成营养琼脂平板。

55.1

操作步骤

设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点，通常设置5个采样点，高度为1.2~1.5m。采样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处，本实验选择了食堂、宿舍作为实验场所，其中采样宿舍位于食堂旁边的六楼，也是我们队员男生生活的地方（四人间），通过我们生活场所来反映我们学校学生宿舍的环境情况，其采样布置点为阳台、床铺旁、书桌、门口和卫生间。采样食堂位于人比较密集的地方，以更准确的反映食堂卫生环境，其采样布置为收餐台、台子、门口、洗碗池和窗户。

5.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温箱中，培养48h

5.3计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，以每平皿菌落数（cFu/皿）报告结果。

实验主要步骤如下图所示：

6

结果分析

6.1菌落生长情况如图：

6.2

结果计算与分析：

6.2.1宿舍对应的数据如下：

6.2.2食堂对应的数据如下：

6.2.3数据分析：

我校某宿舍平均菌落数为51.33(cFu/皿)，依据《室内空气质量标准》gb/T18883-20XX卫生标准：

按奥梅梁斯基氏计算法：在面积为100cm2的培养基表面，5min沉降下来的细菌数相当于10L空气中所含的细菌数。100cm2培养基的菌落数=每块平板数÷πr2×100=80.69(cFu)，

1m细菌数=80.69/10*1000=8069(cFu)，远大于室内标准，说明了该宿舍空气质量

3

比较差，所以在我们生活当中应常开窗，保持空气对流，同时要定时打扫卫生，使我们生活得更加舒适。对于食堂而言，我们可以看到上图细菌生长情况，有的无法计数（太多），这也说明了该场所的细菌比较多，依据《饭馆、餐厅卫生标准》gb16153-1996卫生标准：

远超过标准，食堂其实是我们在学校一日三餐、人流通密度大的重要公共场所，对我们身心健康影响重大，为提高食堂空气质量，应对其场所常开窗（方便而重要的方法），保持空气对流，吃饭时应养成洗手的好习惯等等。

参考文献：

1、环境工程微生物学（周群英、王士芬编著）2、公共场所空气中细菌总数的测定3、《室内空气质量标准》gb/T18883-20XX4、《饭馆、餐厅卫生标准》gb16153-1996

5、刘国强,周娅.校园空气污染微生物的检测与评价[J].微生物学杂志,20XX(3):56-58.

篇三：微生物菌落总数测定详细讲解

菌落总数测定详细讲解

一、茵落总数的概念和测定意义

菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。

菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。

菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态．以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据．

二、茵落总数测定的几项说明

1．菌落总数的测定。是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。

2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colonyformingunits，cFu)报告之。

3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、ph、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

三、茵落总数的测定

测定食品中菌落总数时，是将食品检样做成几个不同的lo倍递增稀释液，然后从各个稀释液中分别取出一定量在平皿内与营养琼脂相混合，经培养(:菌落总数测定实验报告)后，按一定要求计算出皿内琼脂平板上所生成的细菌集落数，并再根据检样的稀释倍数，计算出每g或m1样品中所含细菌菌落的总数。

四、菌落总数测定中的一些要求和规定

为了正确地反映食品中各种需氧和兼性厌氧菌存在的情况，检验时必须遵循以下一些要求和规定。

(一)所用器皿及稀释液

1．检验中所用玻璃器皿，如培养皿，吸管、试管等必须是完全灭菌的，并在灭菌前彻底洗涤干净，不得残留有抑菌物质。

2．用作样品稀释的液体，每批都要有空白对照。如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时，要追加对照平板，以判定是空白稀释液，用于倾注平皿的培养基，还是平皿吸管或空气可能存在的污染。

3．检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水，但以用磷酸缓冲盐水特别是o．1％蛋白胨水为合适，因蛋白胨水对细菌细胞有更好的保护作用，不会因为在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。如果对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释，则宣采用蒸馏水。

(=)检样稀释

1．检样稀释时，应以无菌手续称取(或量取)有代表性的样品25g(或m1)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成l：lo的稀释液。

如系肉、鱼等固体样品，最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中(国产均质器，目前以江苏武进郑陆医学仪器厂产品较简便而实用)，以8000一l0000rpm速度搅拌1分钟，使做成均匀的1：10稀释液。

2．根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，将上述l：lo的检样稀释液再做成几个适当的lo倍递增稀释液。即取1：10稀释液1ml与9ml稀释液混和做成l：loo的稀释液，然后依次递增稀释，做成1：1000、1：10000等稀释液。注意每递增稀释一次，必须另换1支lml灭菌吸管，这样所得检样的稀释倍数方为准确。

3．从吸管筒内取出灭菌吸管时，不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分；而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。

4．在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液砸2．5cm；吸入液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要求的刻度，这样取样较准确，而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。

5．当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的试管内时，应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖端外侧部分粘附的检液也混入其中。

(三)平板接种与培养

1．将稀释液加至灭菌平皿内时，应根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别在作1o倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移lml稀释液加入皿内(从皿侧加入，不要揭去皿盖)，最后将吸管直立使液体流毕，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出，而不要吹出。每个稀释度应作2个平皿。

2．用于倾注平皿的营养琼脂应预先加热使融化，并保温于45±1℃恒温水浴中待用。倾注平皿时，每皿内倾入约15ml，最后将琼脂底部带有沉淀的部分弃去。

3.为了防止细菌增殖及产生片状菌落，在检液加入平皿后，应在20分钟内向皿内倾入琼脂，并立即使其与琼脂混和均匀。

4．检样与琼脂混和时，可将皿底在平面上先向一个方向旋转，然后再向相反的方向旋转，以使充分混匀。旋转中应加小心，不要使混和物溅到皿边的上方。为了保证混和均匀，而不溅及皿边的上方，可使用江苏省无锡县卫生防疫站童鹤泉设计制成的自动平皿旋转仪，直接将加有检样的平皿放在旋转仪上(可同时放4只平皿)，加入琼脂后，开动电钮，在数十秒钟内即可自动左右旋转而使皿内的检样与琼脂混合均匀。

5．皿内琼脂凝固后，不要长久放置，然后始翻转培养；而应于琼脂凝固后，在数分钟内即应将平皿翻转予以培养，这样可避免菌落蔓延生长。必要时，可先将皿打开倒置(皿底向上)于温箱内经15~60分钟使琼脂表面干燥后，再将皿底移至盖内倒置于温箱内培养。这样可以阻止运动性强的变形杆菌属、假单胞菌属和芽胞杆菌属中一些菌株在琼脂表面扩展生长。

6．为了控制污染，在取样进行检验的同时，于工作台上打开一块琼脂平板，其暴露的时间，应与该检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长的时间相当，然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培养，以了解检样在检验操作过程中有l无受到来自空气的污染。

7．培养温度，应根据食品种类而定。肉、，乳、蛋类食品用37℃培养，水产品用30℃培养。培养时间为48±2小时。其他食品，如清凉饮料，调味品，糖果、糕点．果脯，酒类

(主要为发酵酒)、豆制品和酱腌莱均系用37℃24±2小时培养。培养温度和时间之所以有这种不同的区分，乃是因为在制定这些食品卫生标准中关于菌落总数的规定时，分别采用了不同的温度和培养时间所取得的数据之故。水产品因来自淡水或海水，水底温度较低，因而制定水产品细菌方面的卫生标准时，系用30℃作为培养的温度。

(四)对照试验

1．加入平皿内的检样稀释液(特别是10_1的稀释液)，有肘带有食品颗粒，在这种情况下，为了避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与琼脂混和的平皿，不经培养，而于4℃环境巾放置，以便在计数捡样菌落时用作对照。

2．为了防止检样中食品颗粒与菌落混淆，也可在已溶化而保温于45℃水浴内的琼脂中，按每100ml加lmlo．5％氯化三苯四氮唑(2，3，5triphenyltetrazoliumchloride，TTc)水溶液之量加入适量的TTc。培养后，如系食品颗粒，不见变化，如为细菌，则生成红色菌落．配好的TTc溶液，应先用来与不加TTc的作对照，以观察其对计数是否有不利的作用(TTc在一定浓度下对革兰氏阳性菌有抑制作用)。TTc溶液要放冷暗处保存，以防受热与光照而发生分解。无色的TTc是作为受氢体加入培养基中，如果有细菌存在，培养后，在细菌脱氢酶的作用下，TTc便接受氢而成为红色的三苯基甲艏(formazan)，使菌落呈现红色，其反应式如图2-I：

(五)菌落计数

1．从温箱内取出平皿进行菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平皿内平板上菌落生长情况。平行试验的2个平板与菌落数应该接近，不同稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比，即检样稀释倍数越大，菌落数越低，稀释倍数越小，菌落数越高。

2．计数菌落时，应选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定的标准。1个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数；如其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。如在一个稀释度的两个平板中，一个平板的菌落数在30一300之间，另一个大于300或小于30时，则以菌落数在30—300间的平板作为计数的标准。

3．菌落计数所得结果，可分别按以下几种不同情况作报告。

(1)若1个稀释度的平均菌落数在30—300之间，则将该菌落数乘其稀释倍数报告之，

24如表2-1中例1，报告为164×10=16400，或1．6×10。

(2)若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数，如表2-1中例2：46000／29500=1．64(46000+29500)／2=37750或3．8×lo。若大于2，则报告其中较小的数字，如表2-1中例

43：60000／27loo=2.2>2，故报告为：27loo或2．7×10。若等于2，亦报告其中较小的数

3字，如表2-1中例4：3000／1500=2，故报告为：1500或1．5×lo．

(3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释

5倍数报告之，如表2-1中例5，报告为：313×108=313000或3．1×10。

(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀表2-1稀释度的选择及菌落数报告方式

释倍数报告之，如表2-1中例6，报告为：27×10=270或2．7×10。

(5)若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l((6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表2-1中例8，报告为：

4305×10。=305或3．1×10。

4．注意事项

(1)如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的平板上菌落数高，则系检验工作中发生的差错，属实验室事故。此外，也可能因抑菌剂混入样品中所致，均不可用作检样计数报告的依据。

(2)如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细菌块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。

(3)如果所有平板上都有菌落密布，不要用多不可计作报告，而应在稀释度最大的平板

222上，任意数其中2cm个，除2求出每cm内平均菌落数乘以皿底面积63.6cm数，再乘其稀

-1-3-3释倍数作报告。例如10～10稀释度的所有平板上均菌落密布，而在lo稀释的平板上任

2数2个cm。内的菌落数是60个，皿底直径为9cm，则该检样每g(或m1)中“估计”菌落数

6为：60／2×63．6×1000=1908000或1．9×10。

2263.6cm数系按皿底直径为9cm时计算而得，即：(9／2)×3．14=63．6；如所用平皿的皿底直径不是9cm，则可按其直径的实际cm数代人圆面积公式求出。

(4)菌落计数中，如能使用国产JLQ—s。型菌落计数器(江苏武进郑陆医学仪器厂产品)，则比较方便，灯光由侧面射向平板，菌落易于观察。由于仪器带有电子音响讯号，用特制金属探笔点数中，在发出音响之下始显示数字增加，不会发生差错。且灯光与平板之间夹有多

2用方格玻质规板(方格面积为lcm)，也有助于对菌落密布的平板进行计数。

(5)检样如系微生物类制剂(如酸牛乳、酵母制酸性饮料)，则平板计数中应相应地将有关微生物(乳酸杆菌、酵母菌)排除，不可并入检样的菌落总数内作报告。一般