解百忧口服液对抑郁大鼠行为及中枢神经递质的影响

解百忧口服液对抑郁大鼠行为及中枢神经递质的影响

解百友口服是在古代专门开发的一种中药新制剂。它由牡丹、柴胡和其他药物组成。具有平肝健脾解郁的功效，对治疗高血压和疗效有显著影响。本文采用多种不同的应激方法建立了稳定的大鼠抑郁模型,并观察解百忧口服液对抑郁模型大鼠行为及中枢神经递质的影响,探讨解百忧口服液的作用机理,为临床合理用药提供依据。实验材料1质量合格健康SD大鼠(清洁级)48只,♀♂各半,体重180g~210g,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,合格证:沪动合证字(152)号。对照组每笼饲养4只,其余各组每笼饲养1只,各组大鼠均在相同条件下,自由饮水、摄食,保持自然光照。大鼠专用饲料由阜阳颖泉康乐实验动物饲料厂提供。2明片、药房有限责任解百忧口服液由安徽省药物研究所自制,批号:20000302,浓度3.15g/mL,设5、10、15g/kg三个剂量组(分别相当于临床用量的2.5、5.0、7.5倍);盐酸氯米帕明片,天津药物研究院药业有限责任公司生产,批号:961013;重酒石酸去甲肾上腺素(NE)、盐酸多巴胺(DA)、5-羟色胺硫酸肌酐(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)标准品均由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供,进口分装,瑞士Fluka产品;L-半胱氨酸盐酸盐,批号:990508,中国上海曹扬第二中学化工厂产品;邻苯二甲醛(OPT),批号:W981215;高碘酸钠,批号:F990712;碘化钠,批号:F000317;抗坏血酸,批号:F980611,均由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供,其他均为市售分析纯试剂。3ysd-4g实验仪大鼠行为测定仪及刺激仪,本所自制;850-荧光分光光度计,日本日立公司产品(由中国科学技术大学结构中心提供);YSD-4G药理生理多用实验仪,蚌埠无线电二厂产品;HG101-电热鼓风干燥箱,南京实验仪器厂产品;80-2沉淀离心机,上海手术器械厂产品;玻璃匀浆器等。实验方法1单次给药及多次给药选用Open-Field法评分相近的大鼠48只,随机分为6组,即生理盐水组、模型组、氯米帕明组、解百忧低、中、高剂量组,除生理盐水组外,各组共接受21d各种不同的应激,包括电击足底(36V交流电,每隔1min刺激1次,每次刺激10s,共30次)、冰水游泳(4℃,5min)、热应激(45℃,5min)、摇晃(1速率次/s,15min)、夹尾(1min)、禁水(24h)、禁食(48h)和昼夜颠倒等刺激,平均每种刺激各2次,按上述次序连续刺激2轮,第一轮刺激结束开始给药,解百忧低、中、高剂量组分别给予解百忧口服液1mL/100g(5、10、15g/kg),氯米帕明组给予氯米帕明溶液1mL/100g(20mg/kg),生理盐水组及模型组分别给予等量的生理盐水。分别在实验的第1、7、14和21d测定动物的体重变化,第7、14和21d测定动物的行为变化,第22d测定糖水消耗量,第23d测定中枢神经递质含量。2动物双足活动Open-Field法测定行为。本实验所用敞箱为圆柱形,高40cm,直径80cm,周壁为黑色,底面按扇形分成面积相等的25块。以动物穿越底面块数为水平活动(crossing)得分,动物一般靠边行走,穿越1格为1次,如动物按直径方向行走,一般以每10cm为1次;以直立次数为垂直活动(rearing)得分,动物双足离开底面为垂直活动,无论动物站立多长时间直至动物双足放下为1次活动。每只动物每次仅进行一次测定,每次测定时间为3min。3糖的消耗实验在进行糖水消耗实验时所有动物均单笼饲养,每只动物加1%蔗糖溶液130mL,同时所有动物进行禁食,计算动物24h饮用1%蔗糖溶液的量。4酸性正丁醇对脑组织匀浆的制备动物连续给药12d,于末次给药30min~60min后,断头处死大鼠,去颅骨,完全暴露脑组织,在枕骨大孔处迅速剪断延髓,取出大脑组织,除去大脑皮层,放于硫酸纸上称重。迅速将脑组织放入装有3mL预冷的酸性正丁醇溶液中,退除纸重,求出脑组织净重。按1∶30左右比例补充酸性正丁醇至7mL,制备组织匀浆。将组织匀浆倒入带塞离心管中,振荡5min,在3000r/min下离心10min,取适量的酸性正丁醇上清液按文献方法进行提取和测定,NE测定时的激发波长为290nm,发射波长为374nm,DA测定时的激发波长为326nm,发射波长为381nm,5-HT及5-HTAA测定时的激发波长为360nm,发射波长为500nm,计算出各组动物中枢单胺神经递质的含量。结果1第14d和21d模型组体重下降通过21d各种不同方法的应激,各组与生理盐水组相比较,在第7d动物体重的增加已有降低趋势,第14d和21d模型组体重下降具有显著和极显著意义(P<0.05~0.01),说明应激可使动物体重的增加明显下降。服用解百忧口服液和氯米帕明后,对动物因应激造成的体重增加降低无明显的改善作用(结果见表1)。2应激对抑郁动物活动的影响经过21d各种不同方法的应激后,我们通过Open-Field法测定动物行为的水平活动(crossing)得分和垂直活动(rearing)得分,与生理盐水组相比较,在第7d动物两种活动次数已有减少趋势,第14d和第21d两种活动次数均显著减少(P<0.05~0.01)。说明应激可使动物的活动明显减少,产生抑郁症状。我们用解百忧口服液和氯米帕明对抑郁动物进行治疗,结果在第21d(即给药后第10d),解百忧能显著增加抑郁动物的活动次数(P<0.05~P<0.01),与氯米帕明具有同等的药理作用,但无明显量效关系(结果见表2)。动物从第12d开始给药,第14d时动物给药仅3d。3低p>0.1学习标准通过各种不同方法的应激后,与生理盐水组相比较,模型组动物的糖水消耗量明显降低(P<0.01)。服用解百忧口服液和氯米帕明后,可明显增加因应激造成的动物糖水消耗量的下降,解百忧低、中、高剂量组与模型组比较P<0.05~0.01,但无明显的量效关系,氯米帕明组与模型组相比较P<0.01(结果见表3)。4应激对动物显神经递质的影响经过21d各种不同方法的应激后,用荧光光度计法测定动物中枢神经递质的含量,与生理盐水组相比较,结果模型组动物大脑中枢中NE、DA、5-HT、5-HIAA的含量均明显降低(P<0.01),说明应激已造成动物中枢神经递质含量的变化,差异具有显著意义。动物服用解百忧口服液和氯米帕明后,可使模型动物中枢中NE含量明显升高(P<0.05),5-HT、5-HIAA的含量也明显升高(P<0.05~P<0.01),DA的含量有升高趋势,但无显著差异(P>0.05),解百忧口服液与氯米帕明相比具有同等的药理作用,但无明显的量效关系(结果见表4)。抑郁症模型动物活性成分的检测结果我们综合运用应激和分养两种经典方法,利用长期不可预见性的中等强度应激,造成分养动物抑郁状态,抑郁动物在行为上表现为:在规定时间内的水平行活动和垂直活动次数减少,体重增加减轻,糖水消耗量降低,水平活动反映动物的活动度,垂直活动反映动物对新鲜环境的好奇程度,糖水消耗量反映动物的奖赏反应程度。本模型动物表现出来的抑郁状态、兴趣丧失、快感缺乏与抑郁症临床诊断中的精神运动改变、兴趣或快感的丧失有一定程度的相似性。同时,通过对动物中枢神经递质含量的测定,发现抑郁动物中枢神经递质NE、5-HT、5-HIAA含量降低,支持经典的抑郁症发病的5-HT能与NE能神经低下假说。因此,我们认为该模型是较为理想的抑郁动物模型。抑郁症属中医“郁证”范畴。其病理机制为气机失调,内气及血,导致肝气郁结,心神失养。在治疗方面历代医家多主张治郁先治气,调气先治肝。现代医家认为,抑郁症发病与5-HT、NE、DA、Ach、GABA等递质密切相关,尤其是5-HT和NE,目前较公认的抑郁症发病的生化机制仍是单胺假说,主要是5-HT能低下假说和NE能低下假说。解百忧口服液具有疏肝健脾解郁之功,本方重用白芍直入肝经,以益其匮乏之气,自然血生而火熄;白术、当归健土以生血,柴胡解郁,