选修一专题课题DNA的粗提取和鉴定By晨曦@CRAW

反相平行双链脱氧核糖和磷酸交替排列形成DNA分子的骨架如何提取DNA？提取思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。理化性质差异1、DNA的溶解性1、DNA能溶于水2、DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同3、DNA不溶于酒精等有机溶剂，但细胞中的某些蛋白质可溶比较DNA和蛋白质在以下三个浓度的溶解度0.14mol/L、2mol/L、0.014mol/L思考：1、DNA的溶解度如何变化？什么浓度溶解度最低？2、如何控制其浓度使DNA在盐溶液中析出或溶解？理化性质差异2、DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。②大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，发生变性，而DNA在80℃以上才会变性。③洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。鉴定原理：DNA＋二苯胺沸水浴加热，冷却后变蓝色实验流程1、实验材料的选取猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物红细胞、猕猴桃、洋葱、大肠杆菌实验步骤（以鸡血细胞为例）①制备鸡血细胞液(180mL)目的：防止血液凝固，使血细胞与血浆分离。每100mL血液中加入3g柠檬酸钠，然后静置或离心，除去上清液.实验步骤（以鸡血细胞为例）②.提取细胞核物质目的：使细胞因过度吸水而破裂，释放核物质。操作：在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，并充分搅拌，过滤后收集滤液①。

实验步骤（以鸡血细胞为例）③.溶解DNA目的：溶解DNA，过滤除去不溶的杂质操作：向上述滤液中加入NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L，并用玻璃棒沿一个方向搅拌，过滤收集滤液②

实验步骤（以鸡血细胞为例）④.析出DNA目的：使NaCl溶液的浓度降至0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶于该浓度的NaCl溶液的杂质向滤液中缓缓加入蒸馏水并轻轻搅拌，至白色丝状黏稠物不再增加时停止加水，后用多层纱布过滤取滤渣③实验步骤（以鸡血细胞为例）⑤.DNA的再溶解目的：溶解DNA，过滤除去杂质将纱布上的黏稠物放入2mol/L的NaCl溶液中，搅拌至完全溶解，然后过滤取滤液④实验步骤（以鸡血细胞为例）⑥.提纯较纯净的DNA目的：除去溶于酒精的杂质，获得较纯净的DNA向上述滤液中加入等体积的体积分数为95%的冷却酒精溶液，待出现丝状物时用玻璃棒沿一个方向搅拌，将丝状物卷起等体积的体积分数为95%的冷酒精

试管序号A（实验组）B（对照组）1加入2mol/L的NaCl溶液5mL2加DNA丝状物溶解－3加4mL二苯胺混匀4沸水浴5min实验现象变蓝不变色实验结论DNA在沸水浴条件下，遇二苯胺会变成蓝色DNA的鉴定将呈白色丝状的DNA溶解于5mL物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液中，再加入4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min，冷却后观察溶液的颜色，注意要同时设置对照实验。思考1：若所取材料是植物细胞呢？比如说洋葱先将洋葱切碎，然后加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作思考2：还有什么去除杂质的方法？方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15min