针刺对crh、ach及cor分泌的调控与垂体及脊髓关系的研究

针刺对crh、ach及cor分泌的调控与垂体及脊髓关系的研究

许多研究机构证实了打开下肢-肾上腺皮质（hpa）轴的活动的影响。损害大鼠PVN引起垂体门脉血流中的CRH水平明显降低,也引起血液循环中的促肾上腺皮质激素(ACTH)和糖皮质激素(GH)水平明显降低。ACTH是维持肾上腺正常形态和功能的重要激素,它的合成和分泌是垂体前叶在下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的作用下,在腺垂体嗜碱细胞内进行的。近年来,针刺调节HPA轴功能的研究较多[2~4],而关于针刺调节HPA轴功能作用途径的研究少有报道。陈业晞等研究观察到,电针刺激合谷穴和曲池穴通过脊髓磁共振功能成像技术可观测到脊髓的功能激活区,且激活分布具有一定的特征性,说明脊髓参与针刺信号的传递。本项研究拟探讨垂体、脊髓在电针刺调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能的作用,揭示针刺对CRH、ACTH及CORT分泌的调控与垂体、脊髓的关系。1材料和方法1.1实验动物及设备雄性成年Sprague-Dawley大鼠48只,240~280g,由中国科学院遗传与发育生物学研究所提供(SCSK-2002-0016),为普通级动物。标准啮齿类动物饲料分笼喂养,室温20±2℃,光照12h。实验过程中对动物的各种处置符合2006年国家科技部发布的以及本所三级实验室关于善待实验动物的伦理学规定。48只动物随机分为正常组(C)、正常针刺组(CE)、脊髓损伤组(S)、脊髓损伤针刺组(SE)、垂体摘除组(H)、垂体摘除针刺组(HE)6组,每组8只。1.2促肾上腺素激素VarioskanFlash多功能酶标仪(美国Thermo公司),促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(Cortisol)、酶联免疫分析试剂盒(武汉华美产品)。1.3椎内脊分离的方法16只SD大鼠分别用10%的乌拉坦经腹腔麻醉(1.1ml/100g),大鼠俯卧位,固定于拱形手术台上,背部剪毛、碘伏消毒,以T5为中心,沿背部正中切开,切口长约2.5cm,剥开筋膜、脂肪,紧贴棘突骨面分离椎旁肌(棘肌、背半棘肌和多裂肌)以显露T4-T6的棘突和椎板,过程中用棉球按压止血。咬骨钳咬除T4-T6棘突,在手术显微镜下用高速牙科电钻磨开两侧椎板,小心不要碰到里面的脊髓,用显微镊移出椎板,显微剪剪开硬脊膜和蛛网膜,暴露脊髓,切口以外的软膜保持完整,脊髓背静脉血管用电凝止血,然后用显微剪横断脊髓,取出约1~2mm节段的脊髓组织,脊髓内缩形成一个洞,洞内用无菌明胶海绵填充以确保神经完全分离。在用无菌棉球按压完全止血后依次缝合肌肉、筋膜和皮肤,皮肤缝合处用酒精擦拭消毒。1.4体积切除仪的使用16只SD大鼠分别用10%的乌拉坦经腹腔麻醉(1.1ml/100g),大鼠固定于立体定向垂体切除仪(Stoelting),门齿钩刻度预设为+3.9(门齿平面低于耳间线1mm),参考Stoelting公司hoffman-reiter垂体切除仪的体质量-深度和体质量-角度相关曲线选择进针深度和角度,调整两侧侧耳杆角度为19°,取8号注射器针头(10mL注射器标配,直径0.8mm)经右侧中空耳杆完全插入,此时进针深度约39.8mm,进针时针尖斜面指向尾侧,进针完全后旋转180°使针尖斜面指向嘴侧,此后接20mL注射器缓慢抽吸,遇阻力过大可适当旋转以调整针尖斜面方向直至灰白色垂体组织吸出,有时手术过程中可能有少量出血,应以纱布过滤并大致分辨吸出的垂体分叶结构是否完整。4h后施以针刺治疗。正常组模型在麻醉4h后分别施以针刺治疗,取穴及方法同上。2结果2.1crh、acth及cort水平c及ce组cort、crh及cort水平的比较实验对正常组大鼠进行了针刺肾俞、期门后CRH、ACTH及CORT水平的检测,结果观察到,CRH、ACTH及CORT水平C及CE组分别为6.79±0.18/7.94±0.19ng/ml、1.16±0.07/0.96±0.06Pg/ml及2.22±0.34/3.39±0.32ng/ml(图1)。2.2crh、acth及cort水平s及se组的se分析实验对脊髓损伤大鼠进行了针刺肾俞、期门后CRH、ACTH及CORT水平的检测。结果观察到,CRH、ACTH及CORT水平S及SE组分别为7.55±0.20/6.38±0.28ng/ml、1.20±0.11/0.89±0.09Pg/ml及2.00±0.18/3.01±0.21ng/ml(如图2)。2.3针刺前后cort、生长和acth水平比较实验对垂体摘除大鼠进行了针刺肾俞、期门后CRH、ACTH及CORT水平的检测。结果观察到,CRH、ACTH及CORT水平H及HE组分别为6.13±0.25/5.13±0.17ng/ml、0.61±0.05/0.54±0.02Pg/ml及2.25±0.23/1.40±0.11ng/ml(如图3)。综合以上结果,针刺后脊髓损伤组CORT水平上调(P<0.05)、垂体摘除组下调(P<0.05);ACTH水平在垂体摘除组与正常组比较明显降低(P<0.05),脊髓损伤组与正常组比较差异无统计学意义,针刺后变化不明显;CRH水平脊髓损伤组、垂体摘除组与正常组比较有上调和下调的趋势,但差异均无统计学意义,针刺后均下调,与非针刺对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3讨论3.1电针刺激对正常大鼠crh、cort水平的影响大量的研究表明,持续应激能够严重影响人类的身心健康,诱发和加重疾病,其机制主要与HPA轴的活动亢进有关[10~12]。本项研究观察到,电针刺激肾俞、期门能上调正常大鼠CRH、CORT水平。对正常模型而言,电针刺激即是一种应激刺激。作为神经、内分泌调控部位的下丘脑是对应激信号和针剌信号发生反应的重要部位。这种刺激能促进下丘脑室旁核神经元兴奋性增强,使CRH水平增高,而伴随着CRH水平的增高,通过HPA轴的调节上调CORT水平,出现一种HPA轴活动亢进的状态。但ACTH变化不明显,或许是ACTH自身短反馈作用抑制了ACTH的分泌。3.2电针刺激对髓内研究的调节本项研究观察了下丘脑室旁核分泌的CRH对ACTH及CORT调节作用中脊髓的作用及电针刺激的影响。结果观察到,脊髓损伤后,CRH水平与正常组比较有上调的趋势(P>0.05),而ACTH、CORT水平与正常组比较变化不明显,说明在机体应激反应的过程中,下丘脑是第一反应中枢;电针刺激后与非电刺激组比较CRH水平显著下调,ACTH水平有下调趋势。而有趣的是,CORT水平显著上调,说明电针刺激对CORT的调节既有中枢效应,亦有外周调节效应。本项研究中脊髓损伤后,针刺对下丘脑、肾上腺皮质分泌的激素仍具有调节作用,只是对下丘脑分泌CRH的调节途径及肾上腺皮质分泌CORT的调节途径有所不同。当第5胸椎脊髓损伤后,针刺肾俞及期门的脊髓反射弧正常,可促进CORT的分泌增加,而中枢信息的传递受阻,故CRH下调不能影响CORT的改变。汪克明等研究脊髓通路与足三里效应关系时同样观察到,针刺足三里的脊髓反射弧可增强胃平滑肌电活动,而针刺足三里的良性调节作用在脑干高位中枢调控下,可通过延髓基本中枢、迷走神经背核和孤束核调节胃平滑肌电活动。郝春光等研究电针刺激足三里和悬钟、伏兔和三阴交对T11脊髓横断大鼠后肢运动功能定位影响,结果观察到,外周电针治疗能促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的部分恢复。杨金伟等研究发现,电针刺可促进BDNF在损伤部位所支配的肌肉-靶组织中的表达。这些研究表明,针刺可以通过脊髓反射调节脏腑功能。3.3体外电针刺激本项研究观察了下丘脑室旁核分泌的CRH对ACTH及CORT调节作用中垂体作用及电针刺激的影响。结果观察到,垂体摘除大鼠ACTH水平与正常组比较明显下调(P<0.05),说明本研究建立的实验模型是可靠的。当垂体摘除后,ACTH主要来自于下丘脑的分泌与合成,故表达水平相对较低。电针刺激后CRH、CORT水平均较非电针刺激组明显降低(P<0.05),而ACTH水平变化不明显。吕琳观察到壮医药线点灸对去垂体脾虚大鼠的下丘脑、胃、血清胃泌素仍具有调整作用。朱笛霓等研究观察到在垂体摘除的条件下,电针仍显示部分参与下丘脑对脑干5HT能神经核团的下行调控过程。本项研究也观察到,在正常针刺组及脊髓损伤针刺组,ACTH均无明显变化,在垂体摘除的条件下电针刺激仍然参与了