慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型比较

慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型比较

慢性骨髓疾病（cml）是由多能源血浆系统产生的一种恶性疾病。占病变总数的15%25%。由t（9.22）产生的bcr-abl融合基因是其遗传特征。在临床上该病可分为慢性期、加速期和急变期(BC)。CML急变(CML-BC)后的类型各异,初诊即为CML-BC的患者易误诊为AL。本研究将58例CML-BC患者的免疫分型资料与同期420例急性白血病(AL)作比较研究,以探讨其免疫表型特点。1数据和方法1.1研究主题我院1999年1月至2005年8月收治的门诊及住院CML-BC病例58例,同期AL420例,各亚型一般资料见表1。1.2免疫分型积分CML-BC及AL参照张之南等主编的《血液病诊断及疗效标准》(第二版)确诊,免疫分型参照2001年世界卫生组织(WHO)的免疫表型积分标准。见表2。1.3免疫分析1.3.1pe-cy5标记的cd3和cd13单克隆抗体包括FITC标记的CD2、CD3、CD10、CD22、CD14、CD34、HLA-DR、cMPO等,PE标记的CD7、CD19、CD20、CD17、CD13、CD33、cCD79α等,PE-CY5标记的CD45,ECD标记的cCD3。同时加做阴性对照管,使对照管细胞表达在双参数图中位于10°以内。单抗(包括相应的阴性对照)均为法国Immunotech公司产品。流式细胞仪为Beckman-Coulter公司的EpicsXL型(USA),采用Expo32-ADC分析软件。1.3.2抗原细胞群的检测新鲜抽取的肝素抗凝骨髓或外周血(6h内),调整细胞数至(0.5～1)×106/ml,取100μl经直接免疫荧光标记法标记,避光15min后上溶血剂溶解红细胞。上机检测至少10000个细胞,采用CD45/SSC双参数设门,分析细胞群表面抗原表达情况,出现两系以上标记则加做胞浆抗原cMPO/cCD79α/cCD3/CD45。结果判断以幼稚细胞表面抗原表达≥20%为阳性,胞浆抗原表达≥10%为阳性。1.4统计方法阳性率比较采用χ2检验。2结果2.1cml-mal、t系、髓系混合表达比例的统计学分析CML-AML、CML-ALL、CML-MAL在CML-BC中的比例及AML、ALL、MAL在AL中的比例见一般资料(表1)。经统计学分析,CML-ALL在CML-BC中的比例低于ALL在AL中的比例,CML-MAL在CML-BC中的比例高于MAL在AL中的比例(P<0.05)。4例MAL中3例为T系、B系混合表达;1例为T系、髓系混合表达。3例CML-MAL中均为B系、髓系混合表达。2.2cd7和cd32表达比较分别将各抗原在CML-BC与AL中的表达情况整理如表3所示,经统计学分析发现:CML-AML中CD7及CD34表达高于与AML;CML-ALL中CD20表达高于ALL,CD13表达低于ALL(P<0.05)。MAL与CML-MAL组因病例数太少未作统计学比较。CML-BC与AL之间各单抗表达均无统计学差别。2.3cd7与cd3g共阳性表达CML-BC、CML-AML、CML-ALL、CML-MAL、AL、AML、ALL、MAL中CD7与CD34共阳性表达分别为28.3%、29.7%、16.7%、33.3%、14.8%、16.2%、10.9%、50.0%,经统计学分析发现:CML-AML中CD7与CD34共阳性表达高于AML,CML-BC中CD7与CD34共阳性表达高于AL(P<0.05)。2.4计其构成参照2001年世界卫生组织(WHO)的免疫表型积分标准将CML-BC与AL分别分为纯型、变异型、裸型、混合型4个亚型,并分别统计其构成(见表4、表5)。本组276例AML中,纯型占62.3%(172/276),变异型占37.7%(104/276);130例ALL中,纯型占44.6%(58/130),变异型占55.4%(72/130);42例CML-AML中,纯型占59.5%(25/42),变异型占40.5%(17/42);8例CML-ALL中,纯型占50.0%(4/8),变异型占50.0%(4/8)。2.5变异型cml-东南角表达的t系及髓系产物变异型CML-AML伴随表达的淋系抗原依次为CD7(73.3%)、CD10(20.0%)、CD19(20.0%)、CD2(14.3%)、CD20(7.7%),AML伴随表达的淋系抗原依次为CD7(58.7%)、CD19(25.2%)、CD2(20.6%)、CD10(13.6%)、CD20(1.0%);变异型CML-BALL伴随表达的T系及髓系抗原依次为CD33(75.0%)、CD2(33.3%)、CD7(33.3%)、CD13(25.0%),BALL伴随表达的T系及髓系抗原依次为CD33(64.7%)、CD13(38.2%)、CD2(29.4%)、CD7(20.6%)、CD14(2.9%);CML-TALL仅1例,为纯型,变异型T-ALL伴随表达的B系及髓系抗原依次为CD33(75.0%)、CD10(25.0%)、CD19(25.0%)、CD13(25.0%)。3cd7与cd治疗CML是多能干细胞克隆性疾病,急变时可表现为多种类型,急变为急性粒细胞白血病最为多见,其次为急淋变,也有报道急变为急性巨核细胞白血病、急性NK细胞白血病等多种类型的病例。其根本原因在于干细胞分化过程中被阻滞在不同阶段,导致某类幼稚细胞的聚集。流式细胞仪的应用对于AL的亚型鉴别有重要意义,免疫分型已经成为AL的MICM诊断的重要组成部分。虽然目前免疫分型对CML慢性期的诊断帮助甚微,但对于急变期的检测意义重大,明确慢性髓系白血病急变的类型在临床工作中至关重要。急淋变的患者较其他急变种类有相对长的生存期,对于化疗药物较敏感,缓解率高。本次研究58例CML-BC中,CML-AML占77.6%,稍高于文献报道的58.2%～74.2%;CML-ALL占13.8%,略低于文献报道的16.1%～37.93%;CML-MAL占5.2%,均为B系及髓系积分≥2.0,与Favre等的报道类似。本研究中420例AL中,AML占66.2%,ALL占32.9%,MAL占1.0%,CML-ALL在CML-BC中的比例低于ALL在AL中的比例,CML-MAL在CML-BC中的比例高于MAL在AL中的比例(P<0.05),体现了CML-BC与AL的亚型构成差异。CD7主要表达于所有胸腺细胞、大部分外周血T淋巴细胞和起源于T淋巴系的白血病细胞表面,并且先于T系其他抗原出现,是T系早期的一个良好标志,但近年的研究已证实CD7抗原并非T系特异性标志,具有多向分化潜能的造血干/祖细胞阶段也可表达此抗原。CD34是一种阶段特异性而非系列特异性的细胞分化抗原,能选择性地表达于造血干细胞、祖细胞、血管内皮细胞和胚胎成纤维细胞膜上。正常骨髓CD34阳性细胞包括各系集落形成细胞及其前体细胞,在最早期的造血细胞有高水平表达,但随着细胞的成熟,其表达水平下降。Banavali等研究发现,CML慢性期、加速期、急变期CD34阳性率差异有统计学意义,尤其在加速期和急变期分别为(37.3±13.3)%及(58.0±7.3)%。本研究中CML-AML中CD7及CD34表达高于AML,且具有统计学意义,因此推测CML-AML干细胞分化过程中被阻滞在较AML更早的阶段,恶性程度更高。Normann等的研究发现,在CML中所有有急变倾向的患者都是CD7与CD34共阳性的,因此推测有影响预后的意义。Kosugi等研究表明,CML患者的CD34+、CD7+细胞比例跟治疗反应及病程有密切的关系。在AML的研究中,亦有报道CD7与CD34共阳性表达者预后差,生存期短,化疗缓解率低,与CML-BC一致。自流式细胞术广泛应用于AL的鉴别诊断以来,多项研究发现在AL中有相当比例伴有其他系列的抗原表达。Ly+AML通常被认为预后较Ly-AML差。Ball等研究了339例AML患者发现Ly+AML组的核型异常比例高,初治缓解率低,复发时间短,长期生存率低。Khalidi等报道AML中48.1%伴淋系表达,按表达频率依次为CD20、CD7、CD19、CD2、CD3、CD5、CD10。本研究中AML变异型占37.7%,CD20表达率很低,原因不明,其他抗原的表达情况与文献报道相符。Plensa等的研究发现222例ALL患者中,43%伴髓系抗原表达,但其主要的临床和生物学指标与My-ALL无明显差别,治疗后CR率、EFS、OS也无明显差别,而治疗起效的速度较My+ALL慢,因此伴髓系抗原表达并非影响ALL预后的因素。同样,CML-BC中也发现类似现象,Motoji等的研究指出,相比AML而言,CML-AML的伴随抗原表达更加复杂,常伴有巨核系、红系及NK细胞表面抗原的表达,60%～80%的CML-ALL伴有髓系抗原表达。本次研究中CML-ALL变异型占50%,与ALL的变异型发生率并无