非发酵革兰阴性杆菌-包头医学院课件

不发酵革兰阴性杆菌包头医学院于敬达

非发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。近年来由该类细菌引起感染（特别是医院内感染）的报告日益增多，已引起临床医学及检验医学的重视。

非发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、丛毛单胞菌属、黄杆菌属、黄单胞菌属等。非发酵菌特点氧化酶试验：绝多大数为+；葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）：大多数为氧化型，产生弱酸；动力：悬滴法或鞭毛染色，以鉴别某些有动力的非发酵菌。麦康凯（MAC）生长情况：绝大多数长出微小菌落，少数不生长。假单胞菌属

假单胞菌属为需氧、有鞭毛、运动活泼，不形成芽胞有荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，包括200多个种。多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌；大多为条件致病菌。代表菌铜绿假单胞菌。假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主要病原菌。临床意义

铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播途径，因此易感染。特别在由各种原因所致的人体抵抗力低下时引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染等，亦可导致菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性，该菌引起的慢性肺部感染占有较大的比例；在AIDS病中，常发生感染。感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以致引起角膜穿孔而失明。在假单胞菌属的感染中铜绿假单胞菌的感染占70％。临床意义微生物特性

形态染色

G-直或微弯、较细长、散在排列、无芽胞有荚膜、有端鞭毛或丛鞭毛。铜绿假单胞菌电镜图假单胞菌属（Pseudomonas）培养特性

专性需氧，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长，生长温度范围广25～42℃，最适生长温度为25～30℃，4℃不生长。普通培养基上生长良好，产生各种水溶性色素，如绿脓素、荧光素、脓褐素，绿脓素为蓝绿色，可溶于水和氯仿，荧光素只溶于水；液体培养基中浑浊生长。微生物特性

铜绿假单胞菌菌落特征（普通琼脂平板）

假单胞菌属（Pseudomonas）菌落，大小不一，扁平、隆起、光滑、湿润，边缘不整，呈融合状态。产生荧光水溶性色素使培养基变绿色、黄绿色。假单胞菌属（Pseudomonas）铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）

在血琼脂平板上可形成扁平、湿润、有金属光泽和生姜气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有透明溶血环。假单胞菌属（Pseudomonas）铜绿假单胞菌菌落特征（MAC）麦康凯平板上18-24h可形成微小无光泽半透明菌落，48h后菌落中心常呈棕绿色。假单胞菌属（Pseudomonas）生化反应

铜绿假单胞菌能够分解葡萄糖、木糖，产酸不产气，但不分解甘露醇、麦芽糖、蔗糖和乳糖。液化明胶。分解尿素，氧化酶阳性，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。氧化酶试验（＋）生化反应O/F试验（氧化型）生化反应硝酸盐还原试验（＋）生化反应抗原性有两种抗原：O抗原和H抗原，O抗原包括：内毒素脂多糖：是保护性抗原原内毒素脂多糖（OEP）：是一种高分子抗原、具有强免疫性，其抗体不仅对同一血清型细菌有特殊性保护作用，且对不同血清型的细菌也有共同保护作用。OEP广泛存在于一些革兰阴性菌中，包括其它类的单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克氏菌和霍乱弧菌等，是一种极有意义的类属抗原。

抵抗力

较其它革兰阴性菌强，耐许多化学消毒剂与抗生素；560C1h可杀死细菌。致病物质侵袭力:粘附素、荚膜多糖外毒素:外毒素A、溶血素、肠毒素、杀白细胞素内毒素绿脓素侵袭性酶类:弹性蛋白酶、胞外酶S、磷脂酶C所致疾病

条件致病菌

烧伤感染创伤感染下呼吸道感染：气管切开插管、人工机械辅助通气尿路感染：留置导尿，内窥镜检查引发也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内膜炎、脓胸，也可引起菌血症、败血症及引起婴儿严重的流行性腹泻。局部感染铜绿假单胞菌检验程序

检验结果分析与报告

结合临床感染症状，患者血、尿液及无菌体液中分离到铜绿假单胞菌，特别是反复检出即可确定是感染病原菌。如无感染的临床表现，应作为正常菌群。

防治原则

铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染。

临床上常见的其他假单胞菌

荧光假单胞菌恶臭假单胞菌斯氏假单胞菌致病性医源性感染尿路、皮肤感染，骨髓炎伤口、泌尿道感染，肺炎，心内膜炎鞭毛特点一端丛鞭毛（>3根）一端丛鞭毛（>3根）一端有单根鞭毛(最适)生长温度25~30℃

25~30℃

35℃

4℃生长,42℃不生长4℃和42℃都不生长4℃不生长,42℃生长菌落特点荧光素→黄绿色荧光荧光素黄色素,无荧光培养特性低温培养,不能35℃陈旧培养基有腥臭味可在6.5%高盐培养基生长不动杆菌为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的G-杆菌、常分离到的菌种有醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌等，DNAG+Cmol%为38～46.5。存在于正常人体的皮肤、呼吸道和泌尿道，是引起医院感染的常见病原菌，为条件致病菌，常从感染患者的血、尿、脓液及呼吸道分泌物、脑脊液等标本分离。革兰阴性杆菌，多为球杆状，常见成对排列，可单个存在，有时呈丝状或链状。无芽孢，无鞭毛，粘液性菌株有荚膜。为专性需氧菌，对营养要求一般，最适生长温度为35℃生物学性状鲍曼不动杆菌革兰染色不动杆菌

溶血不动杆菌菌落特征（血琼脂平板）不动杆菌鲍曼不动杆菌菌落特征（MAC）

不动杆菌临床意义条件致病菌，医院感染的常见病原菌。

所致疾病包括肺炎、尿路感染、皮肤和伤口感染、心内膜炎、脑膜炎和腹膜炎等。不动杆菌属检验程序

产碱杆菌属与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产碱杆菌、木糖氧化产碱杆菌及亚种，DNAG+Cmol%为56～70，典型菌种为粪产碱杆菌。人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、尿液、血液及脑脊液中分离出来。为G-杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无荚膜。在普通培养基上18～24h形成无色透明菌落。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，O-F试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。

粪产碱杆菌革兰阴性短杆菌，常成双、链排列；专性需氧，营养要求不高，MAC、SS上成无色透明菌落；液体培养基中均匀混浊、菌膜，管底形成粘性沉淀，在蛋白胨肉汤中产氨，使pH升至8.6，为鉴别特征。氧化酶+，触酶+，柠檬酸盐+；致病：引起创伤和泌尿道感染。粪产碱杆菌菌落特征（MAC）产碱杆菌属黄杆菌属为一群无动力和芽胞、氧化酶阳性的G-杆菌。与临床相关菌种有短黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆菌、芳香黄杆菌、水田黄杆菌、嗜糖黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜温黄杆菌。模式菌种为水田黄杆菌。本菌有两个特点：产生黄色素；分解碳水化合物产酸不产气。DNAG+Cmol%含量31～42。存在于水、土壤和蔬菜中，还可从口腔、上呼吸道、皮肤中检出，是条件致病菌，也是引起医院感染的常见菌。可引起术后感染、菌血症、在新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎中分离出脑膜败血性黄杆菌比例较高。Ｇ-杆菌，需氧代谢，血琼脂培养基生长良好，典型菌落为淡黄色，氧化酶、触酶、磷酸酶阳性。临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄杆菌等对广谱抗菌药(如氨基糖甙类、β-内酰胺酶类、四环素类、氯霉素)有耐药性，应根据药敏试验选择用药。

黄杆菌属莫拉菌属与临床有关的有缺陷莫拉菌、犬莫拉菌、非液化莫拉菌、亚特兰大莫拉、林肯莫拉菌、苯丙酮酸莫拉菌、奥斯陆莫拉。DNAG+Cmol％为40～47．5。能引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心肌炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症。近年来非液化莫拉菌引起脑膜炎及婴幼儿菌血症者日益多，应引起高度重视。Ｇ-球杆菌，双短链状排列，具有多形性。营养要求较高，血琼脂平板上生长，无色不溶血的菌落。氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解糖类，吲哚试验阴性。对青霉素类敏感，对头孢类、四环素类、氨基糖甙类药物均为敏感。

其他临床非发酵菌

不动杆菌属产碱杆菌属黄杆菌属莫拉菌属模式菌株醋酸钙不动杆菌粪产碱杆菌水生黄杆菌

致病性条件致病菌条件致病菌条件致病菌脑膜炎、婴幼儿菌血症糖类不发酵不分解可分解碳水化合物产酸不产气不发酵氧化酶阴性阳性阳性阳性运动性不能不能不能不能生长温度最适35℃

最适25~35℃

最适35℃最适32~35℃

营养要求一般营养要求不高营养要求一般营养要求较高

普板、MAC普板、MAC、EMB、肉汤血平板、MAC血清及心脑浸液、血平板鉴定生化反应生化反应生化反应生化反应营养培养基军团菌属

共有39种及3个亚种，60个血清型。O抗原将嗜肺军团菌分成15个血清型;将伯兹曼军团菌，菲利军团菌，长滩军团菌等分为2个血清型。

军团菌属胞内菌，能在巨嗜细胞内繁殖，所以其免疫主要是细胞免疫。嗜肺军团菌的生存能力较强，在蒸馏水中存活100天以上，在污水中可存活1年、对热和常用化学消毒剂敏感。

军团菌属

Ｇ-杆菌，无芽胞和荚膜，端鞭毛或侧鞭毛。触酶阳性，可液化明胶，不分解糖类，氧化酶阳性；本菌营养要求苛刻，专性需氧，生长缓慢，氧气含量低生长速度减慢，2．5％-5％的CO２环境中生长良好，生长温度为350C，最适pH6.7～7.0。军团菌属

军团菌属（Legionella）军团菌属（Legionella）嗜肺军团菌菌落特征在活性炭-酵母浸液琼脂培养基(BCYE)上3-5天可形成1-2mm直径的光泽菌落。

嗜肺军团菌革兰染色军团菌属（Legionella）

嗜肺军团菌免疫荧光染色军团菌属（Legionella）嗜肺军团菌菌落SEM图

军团菌属（Legionella）临床意义军团菌广泛存在于土壤及自然和人工的水环境中，尤其是在空调冷凝水中的检出率最高，是医院感染的重要病原菌之一。临床表现多种多样，最常见的是肺炎型。

定期清洗空调预防军团菌病军团菌属（Legionella）

嗜肺军团菌是军团菌病的病原菌，流行于夏秋季，治疗不当，死亡率达15%军团菌属（Legionella）军团菌检验程序

军团菌鉴定

溴甲酚紫(BCP)斑点试验BCP100mg溶于1mol／LKOH10ml中，配成10％浓度。然用蒸馏水稀释25倍，使之成为0.4％浓度。试验时取此试剂1滴，滴于滤纸上，再刮取新培养菌，涂抹于含有BCP试剂的滤纸上，若在30s内出现蓝宝石色泽即为阳性。色素产生试验产生的色素可分为①在培养基中产生的褐色素；②细胞外荧光，该荧光是由细菌分泌的—种化合物进人琼脂培养基中而形成的，用长波紫外线照射时可出现黄色或黄